金黄色葡萄球菌不同培养与反应条件对其血浆凝固酶的影响_cropped

1 前言,阻碍体内吞噬细胞的吞噬 ,即使被吞 积于菌体表面 ( ) 葡萄球菌属 Staphylococcus 是一群革兰氏阳性 噬后 , 也不易被杀死 。同时 , 凝固酶集聚在菌体四 球菌 , 因常堆聚成葡萄串状 , 故名 。多数为非致病 周 ,亦能保护病菌不受血清中杀菌物质的作用 。葡 菌 ,少数可导致疾病 。葡萄球菌是最常见的化脓性 萄球菌引起的感染易于局限化和形成血栓 ,与凝固 球菌 ,是医院交叉感染的重要来源 。可引起化脓性 酶的生成有关 。 炎症 、皮肤软组织感染 、内脏器官感染 、全身感染等 我国对金黄色葡萄球菌检验目前采用的方法是 以国 标 GB . 4789 . 10 - 2003 及 检 验 检 疫 行 业 标 准 多种人类严重疾病 ,是一类危害极大的致病菌 。根 SN. 0172 - 92 作为依据 ,通过对样品增菌处理后 ,进 据生化反应和产生色素不同 ,可分为金黄色葡萄球 行平板划线 ,然后挑取可疑菌落进行形态 、染色及血 ( ) ( ) 菌 S . aureus、表皮葡萄球菌 S . epidermidis 和腐生 浆凝固酶试验从而得以判定 。我们根据该 ,就 ( ) 葡萄球菌 S . saparophytics 。其中金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌的不同培养时间 、不同反应时间 、不 同体积等因素对其血浆凝固酶的不同影响进行了研 多为致病菌 ,表皮葡萄球菌偶尔致病 ,腐生葡萄球菌 究 ,现报告如下 。 一般不致病 。 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶 ,是一种能 2 材料和方法 使含有枸椽酸钠或肝素抗凝剂的人或兔血浆发生凝 2 . 1 材料固的酶类物质 ,致病菌株多能产生 ,常作为鉴别葡萄 2 . 1 . 1 菌株来源 由东莞检验检疫局食品实验室 球菌有无致病性的重要标志 。凝固酶有两种 : 一种 提供 。 是分泌至菌体外的 ,称为游离凝固酶 。作用类似凝 2 . 1 . 2 培养基及试剂 胰酪胨大豆肉汤 、7 . 5 %氯 血酶原物质 ,可被人或兔血浆中的协同因子激活变 成凝血酶样物质后 ,使液态的纤维蛋白原变成固态 化钠肉汤 、血平板琼脂 、Baird - Parker 琼脂 、肉浸液 的纤维蛋白 ,从而使血浆凝固 。另一种凝固酶结合 肉汤 、冻干兔血浆等为北京陆桥技术有限责任公司 于菌体表面并不释放 ,称为结合凝固酶或凝聚因子 , 生产 ;0 . 85 %灭菌生理盐水由实验室自配 。 在该菌株的表面起纤维蛋白原的特异受体作用 ,细 ( ) 2 . 1 . 3 实验仪器 恒温培养箱 ,日本三洋 SNAYO菌混悬于人或兔血浆中时 ,纤维蛋白原与菌体受体 公司 。交联 而 使 细 菌 凝 聚 。凝 固 酶 耐 热 , 粗 制 品 100 ? 2 . 2 检验方法 参照国家标准 GB/ T4789 . 10 - 200330min 或高压灭菌后仍保持部分活性 , 但易被蛋白 进行 。在本研究中 ,对影响血浆凝固酶试验结果的分解酶破坏 。 3 个因素分别进行实验 。 凝固酶和葡萄球菌的毒力关系密切 。凝固酶阳 性菌株进入机体后 ,使血液或血浆中的纤维蛋白沉 2 . 2 . 1 5 个 金 黄 色 葡 萄 球 菌 菌 株 不 同 培 养 时 间 ( ) 12h 、24h 、48h的肉浸液肉汤血浆凝固酶试验结果 2 . 2 . 2 5 个金黄色葡萄球菌菌株的肉浸液肉汤在 4 . 1 对比表 1 可以看出 ,同一金黄色葡萄球菌菌株 ( ) 不同反应时间内 3h 、6h 、12h 、24h血浆凝固酶试验 不同培养时间的肉浸液肉汤培养物其血浆凝固酶试 结果比较 。 验结果也不同 ,随着培养时间的延长 ,凝固程度逐渐 2 . 2 . 3 5 个 金 黄 色 葡 萄 球 菌 菌 株 的 不 同 体 积 增大 ,到 24h 到达顶峰 ,随即凝固程度逐渐下降 。原 () 0 . 3mL 、0 . 5mL 、0 . 8mL的肉浸液肉汤血浆凝固酶试 因是试管法检验的是游离血浆凝固酶 ,随着菌体的 验结果比较 。分裂成对数增长趋势 ,当培养液中的细菌浓度达到 3 结果饱和时 ,其分泌的游离血浆凝固酶浓度也最大 ,此时 3 . 1 5 个金黄色葡萄球菌菌株分别在肉浸液肉汤 凝固程度最强 。随着培养液的养份被逐渐消耗 ,细 中培 养 12h 、24h 、48h , 取 不 同 培 养 时 间 的 培 养 物 菌浓度开始下降 ,相应的游离血浆凝固酶浓度也下 0 . 5mL进行血浆凝固酶试验 , 反应时间为 12h , 结果 降 ,从而导致凝固程度变低 。因此 ,在平常检验工作 如下 : 中要注意掌握好可疑菌株的肉浸液肉汤培养时间 , 表 1 不同培养时间培养物血浆凝固酶试验结果比较以 24h 最为合适 ,培养时间过长或过短都会对检验 12h 凝固程度 24h 凝固程度 48h 凝固程度 结果造成影响 。 菌株 1 + + + + + + + + + 4 . 2 从表 2 可以看出 ,反应时间的长短对血浆凝固菌株 2 + + + + + + + 酶试验结果也有很大的影响 。国标法的反应时 + + + + + + 菌株 3 间是 6h ,在规定的时间内有 4 个菌株试验结果呈阳 + + + + + + + + + 菌株 4 性 ,有 1 个菌株为阴性 。当反应时间延长到 12h 时 , 菌株 5+ + + + 所有 5 个菌株试验结果均呈阳性 ,且原有的 4 个阳 性菌株的凝固程度有所增大 , 凝固现象更加明显 。 3 . 2 5 个金黄色葡萄球菌菌株分别在肉浸液肉汤 24h 的凝固程度与 12h 相同 。由此可知 , 如果仅观 中培养 24h 后 ,取 0 . 5mL 培养物进行血浆凝固酶试 察 6h 即结束试验 ,很可能会导致漏检 ,而把观察时 验 ,观察其在 3h 、6h 、12h 、24h 时的结果 ,如下 : 间延长至 12h ,可提高金黄色葡萄球菌的检出率 ,防 表 2 不同反应时间血浆凝固酶试验结果比较 止漏检 。 3h 凝固程度 6h 凝固程度1 2h 凝固程度 2 4h 凝固程度 4 . 3 从表 3 可以看出 ,进行血浆凝固酶试验时 ,加菌株1 + + + + + + + + + + + + 菌+ 株+ +2 + + + + + - 入的肉浸液肉汤培养物体积不同 , 其结果也不同 。 + + + + + + + + + - 菌株 3 加入体积为 0 . 3mL 的培养物 ,反应 12h 后仅有 2 个 菌株 4 + + + + + + + + + + + + 菌株出现很 弱 的 凝 集 现 象 。当 加 入 体 积 为 0 . 5mL + + - + + - 菌株5 的培养物时 ,5 个菌株均出现明显的凝集现象 。而 当加入体积为 0 . 8mL 的培养物时 ,5 个菌株的凝集 3 . 3 5 个金黄色葡萄球菌菌株分别在肉浸液肉汤 现象基本与 0 . 5mL 的相同 。说明在血浆凝固酶试 中培养 24h 后 ,取 0 . 3mL 、0 . 5mL 、0 . 8mL 培养物进行 验中有一个最低菌液体积 , 即 0 . 5mL 菌液体积 , 当 血浆凝固酶试验 , 观察其 在 12h 时 的 结 果 , 记 录 如 菌液体积低于 0 . 5mL 时 , 凝集现象可能不会发生 , 下 : 因此在实际工作中需加以注意 。 表 3 不同体积培养物血浆凝固酶试验结果比较 参考文献 0. 3mL 凝固程度 0. 5mL 凝固程度 0. 8mL 凝固程度 中华人民共和国国家标准 食品卫生微生物学检验 GB/ T4789 . 10 - 2003 ,北京 :中国标准出版社 ,2004 菌株 1 + + + + + + + + + 菌株 2 - + + + + + + + 2 王秀茹主编. 预防医学微生物学及检验技术. 北京 : 人民出版 社 ,1996 - + + + + + + 菌株 3 王叔淳主编. 食品卫生检验技术手册. 北京 : 化学工业出版社 , 菌株 4 + + + + + + + + + 3 1994 - + + + + + 菌株 5 罗雪云 ,刘宏道主编. 食品卫生微生物检验标准手册. 北京 : 中 4 国标准出版社 ,1995