蝮蛇外周血白细胞的电镜观察

蝮蛇外周血白细胞的电镜观察 ( ) 文章编号 :1001 - 2443 200104 - 0332 - 04 蝮蛇外周血白细胞的电镜观察 2 1 11 ,2 王如平,王义权,杜开河李 霖, ( )1 . 南京师范大学 生命科学学院 ,江苏 南京 210097 ;2 . 扬州教育学院 生物系 ,江苏 扬州 225002 摘 要 :用透射电镜技术对蝮蛇外周血白细胞的超微结构进行研究. 白细胞由嗜天青粒细胞 、 嗜中性粒细胞 、嗜酸性粒细胞 、单核细胞 、淋巴细胞及血栓细胞组成 ;嗜天青粒细胞分化程度较 低 ,具大量细小的嗜天青颗粒 ;嗜中性粒细胞在电镜下较少见 ,分化程度较高 ,具较多细小的嗜 天青颗粒和特殊颗粒 ;嗜酸性粒细胞具未成熟型 、成熟型两种 ,未成熟型细胞胞质中具若干小 泡 ,成熟型细胞胞质具有颗粒 ,有的颗粒具斑块结构 ,提示前髓细胞阶段的嗜酸性粒细胞即进 入外周血液 ,至后髓细胞阶段开始形成类晶体结构 ;单核细胞亦具未成熟型 、成熟型两种类型 , 后者核质比例较低 ;嗜碱性粒细胞颗粒粗大 ;淋巴细胞核质比例极大 ;血栓细胞具泡状结构. 关键词 :蝮蛇 ;白细胞 ;超微结构 中图分类号 : Q959 . 6文献标识码 :A 爬行动物是变温动物 ,对爬行动物血细胞的研 . 胞质内有丰富的线粒体和粗面内质网 ,粗 清晰可见 究很早就受到动物学家的重视 ,至今积累了很多资面内质网上有紧密排列的核糖体 ,胞质中亦有大量 1 - 7( ) 呈线状排列的游离核糖体 图 2. 胞质中尚有大量 . 有 关 蛇 类 血 细 胞 的 研 究 也 有 一 些 资 料 报 料 10 道 ,国内曾见吴瑞敏对眼镜蛇血细胞的研究,曲细小的嗜天青颗粒 , 直径 0 . 05 - 0 . 1um , 电子染色 9 韵芳对蝮蛇血细胞的研究. 然而 , 对蛇类血细胞 浅 . 超微结构的研究很少. 为此 , 我们对我国常见蛇种 2 . 2 嗜中性粒细胞 ( ) ( ) ———蝮蛇 A gk ist rodon blom hof f i i brev ica u d us 外 蝮蛇的嗜中性粒细胞 图 3呈圆形 ,面有明 周血白细胞的超微结构进行了观察. 显的伪足突起 . 胞体直径 6 . 8 - 8 . 1um. 胞质内有丰 富的细小颗粒 ,颗粒主要沿胞质外缘分布 ,中央颗粒 1 材料和方法 较少. 颗粒分两种类型 : 嗜天青颗粒电子染色较浅 , ( )蝮蛇 A gkist rodon bl om hof f i i brev ica u d us 三 颗粒细小而众多 , 呈圆形 、椭圆形 、棒形 , 直径 0 . 08 () 条 ,雌 2 条 ,雄 1 条每条约重 450 克 . 全部采自南 um 左右. 棒形颗粒中间往往有缢痕 . 特殊颗粒电子 京郊区六合县某蛇类养殖场. 切破颈静脉采血 2 ml . 染色较深 ,颗粒亦细小 ,数量中等 , 直径 0 . 08 - 0 . 1 加 2 . 5 %戊二醛 15 ml 预固定 2 小时. 取出血块 ,取 um ,颗粒形状一般为圆形 ,少数呈哑铃形. 胞质中含 3 其表面 层 有线粒体 、粗面内质网及丰富的游离型核糖体 , 修 成 1 mm小 块. 用 1 %锇 酸 固 定 2 小 ,并可 时 . 磷酸缓冲液冲洗 ,丙酮逐级脱水 ,醋酸铀块染过 见游离型核糖体呈环状排列. 电镜观察中嗜中性粒 夜 , Epo n812 包埋 ,超薄切片 ,醋酸铀和柠檬酸铅双 细胞较少见 ,且未能观察到细胞核. 重染色 ,日立 H - 600 型透射电镜下观察并拍照 . 2 . 3 嗜酸性粒细胞 电镜观察显示 ,有两种不同类型的嗜酸性粒细 2 结果 ( ) 胞 . 嗜酸性粒细胞 ?型 图 4: 呈长椭圆型 ,胞体直 2 . 1 嗜天青粒细胞 径约为 3 . 3 ×5 . 8 um ,伪足样突起不明显. 细胞胞核 较大 ,呈不规则形 ,位于细胞一侧 ,异染色质沿核周 嗜天青粒细胞呈圆形 ,胞体表面有明显的胞突 , () ( ) 分布 ,核间隙较清晰 ,核质比例较大 ; 胞质内有大量 胞体直径 5 . 6 - 6 . 5×7 . 0 - 7 . 5um. 胞核略呈肾 () 的线粒体和发达的高尔基体 ,高尔基体的凹面一侧 型 图 1,直径 2 . 5 ×5 . 4 um. 核内异染色质极少 ,紧 有许多大小不等的泡状结构. 此外 ,胞质中还有聚集 贴核边缘分布 ,核仁明显 ,核孔多而清晰 ,核周隙亦 收稿日期 :2001 - 09 - 26 基金项目 :江苏省“333”人才项目 ( ) 作者简介 :李霖 1963 - ,女 ,江苏扬州人 ,讲师. 成团的糖原颗粒 ,电子染色较深 . 嗜酸性粒细胞 ?型 颗粒 ,未成熟型嗜酸性颗粒发育为成熟型嗜酸性颗 () 图 5:细胞亦呈长型 ,胞体直径 2 . 7 ×5 . 7 um ,有明 粒 . 此外有些颗粒内具有电子染色较深的斑块. 笔者 () 显的伪足样突起. 细胞核较小 与切片位置有关,中 认为 ,蝮蛇嗜酸性粒细胞颗粒内斑块结构可能为类 5 ,6 ,8 央偏位. 核附近有较丰富的线粒体 ,胞质内远离胞核 晶体结构 . 据已知报道,爬行动物嗜酸性粒细 的一侧有形状不一的嗜酸性颗粒多个 ,颗粒直径0 . 1 胞颗粒内含物一般均匀 ,无类晶体样结构. 根据布卢 11 () - 0 . 3 um , 有的颗粒内含物电子染色不均 , 中央有 姆 1985,嗜酸性粒细胞起始于骨髓单能干细胞 一至多个染色较深的斑块 . 此外 ,颗粒中间夹杂少数 分化形成的成髓细胞 ,并进一步分化为前髓细胞 、后 泡状结构. 髓细胞. 嗜酸性髓细胞胞质中存在两类颗粒 ,即致密 的嗜天青颗粒和密度稍低的特殊颗粒 ,两类颗粒大 2 . 4 嗜碱性粒细胞 ( ) 小密度相差较小 ,在晚期前髓细胞 、后髓细胞中 ,特 嗜碱性粒细胞 图 6一般呈圆形 ,胞体边缘有 细小的伪足样突起. 胞体直径 4 . 8 - 5 . 3 um ,胞质内 殊颗粒内含物开始形成结晶 ,因而可见异质性颗粒 充满了粗大的圆形颗粒 ,颗粒直径一般为 0 . 6 - 1 . 0 群体 ,有些颗粒呈现低密度包绕的不同形状的结晶 , um ,电子染色较浅 ,少数颗粒染色稍深. 颗粒内含物 有些颗粒仍保持致密性的均质性. 作者认为 ,爬行动 一般分布均匀 ,胞质内偶见线粒体. 胞核一般为嗜碱 物嗜酸性粒细胞起源于骨髓 ,但前髓细胞阶段即进 性颗粒所覆盖 . 入外周血液 ,在外周血液中进一步发育成熟. 在许多 报道中 ,未能见到颗粒类晶体结构 ,可能是因为处于 2 . 5 单核细胞 电镜观察中可见较多的单核细胞 ,且一般呈现 前髓细胞阶段 ,结晶尚未形成 ,加上外周血液中成熟 ( ) 两种不同状态. 单核细胞 ?型 图 7: 细胞呈卵型 , 嗜酸性粒细胞数量较少 ,所以一般不易观察到结晶 直径 4 . 3 ×6 . 0um ,胞核较大 ,呈蘑菇形 ,直径为 3 . 9 的存在. 是否正确 ,有待于进一步深入研究. ×4 . 7 um , 核仁明显 , 异染色质较少 , 沿核周分布 ,单核细胞亦具两种类型 : ?型为未成熟型单核核孔 、核间隙清晰 ,胞质内线粒体 、内质网较丰富 ;单 细胞 , ?型为成熟型单核细胞. 在成熟过程中 ,胞体 () 核细胞 ?型 图 8:细胞呈椭圆型 ,胞体外周伪足样 略有缩小 ,胞核则明显缩小 ,核质比例降低 ; 胞核由 突起明显 ,胞体直径 4 . 3 ×5 . 6um ,胞核呈典型的马 蘑菇形转变为马鞍形 ,胞质内颗粒物亦从无到有 . 蹄形 ,直径 2 . 7 ×3 . 5um ,核内染色质较浓密 ,核间隙 蝮蛇嗜中性粒细胞在外周血液中也存在发育过较清晰 ,核孔未见 ; 胞质内线粒体 、内质网等结构较 1少见 ,但有丰富的游离型核糖体和较多的嗜天青颗 ( ) 1985认为 , 嗜天青粒细胞和嗜 程 . 根据 Cooper 粒 ,颗粒直径 0 . 14 um 左右. 中性粒细胞可能代表同一种细胞发育分化的不同过 8 2 . 6 淋巴细胞程 . 李丕鹏亦认为爬行动物嗜天青粒细胞是未成 () 淋巴细胞 图 9呈长卵型 ,胞体直径 2 . 0 - 4 . 2 熟的嗜中性粒细胞. 本实验观察结果亦支持这一论 um ,胞核大 ,亦呈长卵型. 异染色质呈块状分布或沿 点 ,嗜天青粒细胞与嗜中性粒细胞相似 ,所不同的是 核边缘分布. 胞质稀少 ,为紧贴胞核分布的一薄层 .嗜中性粒细胞颗粒众多且具两类颗粒 ,而嗜天青粒 2 . 7 血栓细胞细胞核孔多 ,核仁明显 ,核周边仅有少量异染色质 , () 凝血细胞 图 10呈不规则圆形 ,往往单个或 3为分化程度较低的细胞. 据此 ,嗜天青粒细胞为 - 5 个聚集在一起 ,胞核较大 ,占据细胞绝大部分.未成熟的嗜中性粒细胞 ,在成熟过程中 ,嗜天青颗粒 核内异染色质丰富 ,电子染色较深 ,核间隙清晰. 胞 逐渐增加 ,特殊颗粒也逐渐出现. 此外 ,在超薄切片 质中未见线粒体 、内质网等结构 ,但胞质外围有很多 中 ,嗜中性粒细胞较少见 ,其原因有待进一步研究. 大小不等的泡状结构 ,有的细胞中还有少数较粗大爬行动物血细胞的幼稚细胞进入外周血液 ,并 的颗粒.在外周血液中完成其分化过程 ,成为成熟血细胞的 5 ,6 ,7 现象也已见报道,这爬行动物造血器官不 够完善 ,外周血液是造血器官的终末站. 3 讨论 与其它爬行动物相比 ,蝮蛇嗜中性粒细胞中颗 电镜观察显示 ,蝮蛇白细胞在外周血液中往往 粒细小而数量众多. 嗜碱性粒细胞颗粒与其它爬行 图版说明 图 1 示嗜天青粒细胞 ×10000 图 6 示嗜碱性粒细胞 ×15000 图 2 图 7 示嗜天青粒细胞 示嗜×10000 示单核细胞 ?型 ×15000 图 3 图 8 中性粒细胞 示嗜酸性×12000 示单核细胞 ?型 ×15000 图 4 图 9 粒细胞 ?型 示嗜酸性×20000 示淋巴细胞 示血×20000 图 5 图 10 粒细胞 ?型 栓细胞 ×15000 ×12000 ( ) In : Bology of t he reptilia Gans ,c . . New Yo r k :Jo hn Wiley & 发生过程中 ,形态结构改变不大 ,具高度特化和保守 So ns , 1970 ,3 :73 - 91 . 性 .4 Taylo r K W. Elect ro n micro scopic st udy of t urtle bloo d cell J . 血栓细胞的功能类似于哺乳动物的血小板 ,对 Anat . Res. 1963 , 219 - 238 . 凝血过程起不可缺少的作用. 蝮蛇血栓细胞胞质中 5 李丕鹏. 朱洪文龟鳖嗜碱性粒细胞的显微和超微结构J . 动物 学报 ,1990 ,36 :210 - 211 . 出现的泡状结构可能类似于血小板中的表面连接系 李丕鹏. 黄喉拟水龟血液白细胞的电镜观察J . 蛇类研究丛 6 统 ,具有增加凝血因子附着面积的作用. ( ) ,1993 , 4:91 - 94 . 李霖. 扬子鳄外周血液中白细胞的嗜天青颗粒的电镜观察J . 7 参考文献 :( ) 南京师范大学学报 ,2000 , 3:234 - 237 . ( ) 李丕鹏. 中国龟鳖类血细胞及其发生研究J . 四川动物 15, 1 Cooper EL . Reptilian immunit y. in : Biology Of t he ReptiliaM ( ) 1997 , 增刊:105 - 144 . 8 ( ) C. Gans ,et al ,eds. New Yo r k :Jo hn Wiley & So ns , 1985 , 13 : ( ) 曲韵芳. 蛇类血液的研究J . 两栖爬行动物学报 ,1985 ,4 , 4: 599 - 678 . 353 - 354 . 9 吴瑞敏. 眼镜蛇血细胞的形态与分类J . 武夷科学 ,1983 ,4 : 2 Desser S S , Weller I. Ult rast ruct ural o bservatio n o n t he granular leukocytes of t he t uatara S phenodon p u nct at us J . Tissue and 80 - 83 10 W 卢布姆 , W 福西特. 组织学M . 北京 :科学出版社 ,1984 . Cell Research 1979 ,11 :703 - 715 . 3 Saint - Giro nl S M . Mo rp hology of t he circulating bloo d cellM . 11 OBSERVATIO N I N PERIP HERAL BLOOD L E KOCY TES OF A G KIS T R O D O N BL O M HO F F I I B R EV I CA U D US 1 ,2 2 1 1L I Lin, WAN G Ru2ping, WAN G Yi2quan, DU Kai2he ( 1 . College of Life Sciences , Nanjing No r mal U niversit y , Nanjing 210097 , China ;2 . Depart ment of Biology , Yangzho u Educatio n College , Yangzho u )225002 ,China Abstract : The ult rast ruct ure of perip heral bloo d leukocytes of A gk ist rodon blomh of f i i brev ica u d us was st udied using t ransmissio n elect ro nic micro scope . The leukocytes has t he following cell t ypes : azurop hilic granule cell 、 neut rop hil、eo sinop hil 、basop hil 、mo nocytes 、lymp hocyte and t hro mbocyte . Azurop hilic granule cell is in lower lever in divided extent and it has a large number of small azurop hilic granules. There are a few neut rop hils w hich are in higher level in divided extent and have a large number of small azurop hilic granules and specific granules in perip heral bloo d. Eo sinop hil has t wo t ypes : immat ure cell and mat ure cell . Immat ure cells have many small bub2 bles , and so me granules in mat ure cells have stain st ruct ures. This show s t hat eo sinop hils in p ro myelocyte stage began to enter perip heral bloo d , and t hen fo r m t he st ruct ure of crystallizatio n gradually in metamyelocyte stage . There are t wo t ypes of mo nocyte :immat ure and mat ure cell ,and t he ratio of nucleus to cytoplasm of t he lat ter is lower . Besides t he granules of basop hil are big , t he ratio of nucleus to cytoplasm of lymp hocyte is very big ,and t hro mbocytes are small and have bubble st ruct ures. Key words : A gk ist rodon bl om hof f i i brev ica u d us ; leukocytes ; ult rast ruct ure