反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄芩苷的含量

反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄芩苷的含量 反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄 芩苷的含量 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMED1CARESEARCH2008VOL.19NO.8时珍国医国药2008年第19卷第8期 反相高效液相色谱法测定竹沥达痰丸中黄芩苷的含量 张浚,张昌斌,王锦绣 (1.中国人民解放军广州军区药品检验所,广东广州510500; 2.中国人民解放军广州军区药材仓库,广东广州510500) 摘要:目的建立反相高效液相色谱(RP—HPLC)法竹沥达痰丸中有效成分黄芩苷 含量的测定方法.方法采用HPLC法, 色谱柱为ZORBAXExtend—C柱(4.6mmx150mm,5I.zm),流动相为甲醇一水一磷 酸(47:53:0.2),检测波长为316nm. 结果黄芩苷线性范围10.04—77.2ml,r=0.9998(n=7);回收率为100.5%(n=6),RSD为 1.22%.结论测定方 法简便,稳定,能有效地控制该制剂的质量. 关键词:竹沥达痰丸;黄芩苷;反相高效液相色谱法 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1008-0805(2008)08-1977-02 DeterminationofBaicalininZhulidatanPillsbyHPLC ZHANGJun.ZHANGChang-bin'.WANGJin-xiu (1.eInstituteforDrugandInstrumentControlofGuangzhouMilitaryRegion,Guangzhou51 0500,China; 2.TheMedicineWarehouseofGuangzhouMilitaryRegion.Guangzhou510500,Cina) Abstract:ObjectiveToestablishameasurementmethodofbaicalin,theeffectivecomponent ofZhulidatanPills. MethodsTheisolationwasconductedonaZORBAXExtend— C18column(4.6mmx150mm,5I.zm),themobilephaseconsisted ofmethanol—water— phosphate(47:53:0.2),thedetectionwavelengthwas316nm.ResultsThecontentofbaicalin showed goodlinearityintherangeof10.04—77.2ml,r=0.9998(n=7),andtheaveragerecoverywas100.5%(n=6),RSD was1.22%.ConclusionThemethodissimple,stable,andcaneffectivelycontrolthequalityof thepreparation. Keywords:ZhulidatanPills;Baicalin:RP—HPLC 竹沥达痰丸由黄芩,半夏,大黄,橘红,甘草,沉香等6味药材 加工提取制得的制剂,具有豁除顽痰,清火顺气的功效,用于痰热 上壅,顽痰胶结,咳喘痰多,大便干燥,烦闷癫狂等症状.黄芩 为方中主药,主要有效成分为黄芩苷.《中国药典》2005年版I 部竹沥达痰丸项下无含量测定项,为了提高检测手段,有效地控 制产品质量,本文建立了黄芩苷含量的高效液相色谱测定法. 1仪器与试药 1.1仪器Agillent1100高效液相色谱仪(美国),ZORBAXEx— tend—C18(4.6mmx150mm,5m)色谱柱,G1379A四元泵, G1314AVWD检测器,G1316A恒温箱,G1313AALS自动进样 器.MettlerToledoPB1502一S电子天平,MetderToledoAG204电 子分析天平,超声处理器(上海船舶电子设备研究所). 1.2试药黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号 110737-200312,供含量测定用);甲醇(色谱纯);其余试剂均为分 析纯;水为双蒸水. 1.3样品竹沥达痰丸(某药厂批号20060703,20060910, 20061112). 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性实验用十八烷基键合硅胶为填充 剂;以甲醇一水一磷酸(47:53:0.2)为流动相;检测波长316 nm;柱温室温.理论板数按黄芩峰计算应不低于3000. 2.1.1对照品溶液的制备精密称取在60减压干燥4h的黄 芩苷对照品适量,加50%甲醇制成每毫升含30g的溶液,即得. 2.1.2供试品溶液的制备取丸剂,研细,精密称取1.8g置具 塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50ml,称定重量,超声处理(功 率320W,频率35kHz)20min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补 足减失的重量,滤过,精密量取续滤液1ml,置10ml量瓶中,用 50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得. 收稿日期:2007-08-09;修订日期:2007—12—19 作者简介:张浚(1970一),女(汉族),广东广州人,现任中国人民解放军 广州军区药品检验所主管药师,硕士学位,主要从事药品分析检验工作. 2.1.3测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 l,注入液相色谱仪,测定,即得. 2.2检测波长的确定以50%甲醇一水为空白,对黄芩苷溶 液进行紫外扫描,结果表明黄芩苷在280nm及316nm处有最大 吸收,重复测定其在316nm处的吸收度,结果表明在316nm处 测定稳定性好,因此液相色谱法中吸收波长确定为316nm.见 图1—2及表1. i,;一…?J…,…{ LA…I 0 图150%甲醇一水的紫外扫描图图2黄芩苷标准品的紫外扫描图 表1黄芩苷标准溶液在A=316tim处重复测定的吸收度 2.3线性关系考察对照品溶液的制备:精密称取在60?减压 干燥4h的黄芩苷对照品19.3mg,置于250ml量瓶中,加50% 甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为77.2mg/ml的黄芩苷 标准品储备溶液,然后依次精密量取浓度为77.2mg/ml的黄芩 苷标准储备溶液1.3,2.6,4.0,5.2,6.5,8ml于10ml容量瓶中, 加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,即得浓度为10.036,20.072, 30.88,40.144,50.18,61.76,77.2mg/ml的系列黄芩苷标准溶 液.按上述色谱条件分别精密吸取标准品溶液各20l进样测 定,以色谱峰面积为纵坐标,样品浓度为横坐标回归得标准曲线 ? 1977? 时珍国医国药2008年第19卷第8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.8 为:A=40.781C一8.6998,r=0.9998.表明在浓度10.04, 77.2o,g/ml范围内黄芩苷的峰面积与浓度线性关系良好.黄芩 苷标准曲线见图3. 2.4精密度实验精密吸取供试品溶液20l进样测定,一天内 重复进样操作6次,约1h/次,测得各次峰面积分别为1953.5, 1946.2,1929.4,1931.3,1893.2,1878.5计算峰面积的RSD为 1.47%,表明样品利用该方法一天内测定精密度满足要求,但含 量有下降趋势,提示样品处理后应尽可能短时间内进行分析. 2.5专属性实验制备缺黄芩的阴性样品,然后同供试品溶液样 品处理法同法处理,得到黄芩阴性溶液.分别精密吸取阴性溶液, 标准品溶液,供试品溶液20,进样测定,色谱图,见图4,6. 图3黄芩瞢标准曲线图4阴性样品色谱图 图5黄芩瞢标准品色谱图图6样品色谱图 从色谱图中可看出阴性样对测定无干扰,制剂中黄芩苷与相 邻峰分离良好,理论板数可达3000以上.表明此液相色谱法测 定制剂中黄芩苷的专属性良好. 2.6加样回收率实验按半量加入法进行加样回收率的测定,因 本品黄芩苷含量较高,为节省标准品,样品及溶剂按比例缩小至 1/5,另外黄芩苷在水,甲醇等溶解度均较小,在50%甲醇一水中 的溶解度有所增大,我们在实验研究过程发现以50%甲醇一水 为溶剂时,当浓度为3001xg/ml时,溶液已呈混悬状,因此加样回 收率测定中加入浓标有困难,故我们采取的是用提取溶剂量的 50%甲醇一水溶解标准品,然后加入丸剂处理后的粉末中进行样 品提取,具体操作如下:精密称取研细的丸剂粉末约0.2g共6 份(批号050401),置具塞锥形瓶中,各精密加入以50%甲醇一水 溶解的浓度为200.6p.g/ml的标准品溶液10ml,称定重量,超声 处理(功率320W,频率35kHz)20min,放冷,再称定重量,用 50%甲醇补足减失的重量,滤过,精密量取续滤液1ml,置10ml 量瓶中,用50%甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述色谱条件测定,并 按下式计算加样回收率. 加样回收率(%)=(一)/Wox100% 式中:=测得总量 W1=供试品中黄芩苷已知量 Wo:黄芩苷标准品加入量 ? 1978? 结果见表2. 表2丸剂测定的加样回收率 上述加样回收率实验表明利用本方法测定丸剂的黄芩苷含 量准确度高,样品处理方法可行. 2.7样品的含量测定利用该方法测定3批样品.结果见表3. 表3竹沥达痰丸中的黄芩苷的测定结果 n=5 3讨论 3.1检测波长的确定对黄芩苷标准溶液进行紫外扫描结果表 明黄芩苷在280nm及316nm处有最大吸收,且在316nm处测 定稳定性好,因此吸收波长确定为316nm. 3.2加样回收率方法的研究黄芩苷在水,甲醇等溶解度均较 小,在50%甲醇一水中的溶解度有所增大,实验研究发现以50% 甲醇一水为溶剂时,浓度为300g/rnl时,溶液已呈混悬状,所以 加样回收率测定中加入浓标有困难,故我们采取的是用提取溶剂 量的50%甲醇一水溶解标准品,然后加入丸剂粉末中进行样品 提取. 3.3流动相的选择参照《中国药典))2005年I部各种黄芩苷 测定方法,分别采用流动相甲醇一水一冰醋酸(40:60:1),甲醇一 水一冰醋酸(50:50:1),甲醇一水一磷酸(43:57:0.2),甲醇 一 水一磷酸(40:60:0.2)进行实验.结果,在甲醇一水一磷酸(43 :57:0.2)为流动相的条件下,样品分离度良好. 3.4提取时间的确定参照《中国药典))2005年I部黄芩项下 的超声提取方法.分别以50%甲醇,70%乙醇及稀乙醇(53%) 作为提取溶媒进行超声处理实验,结果50%甲醇提取效果较好. 故选择为50%甲醇提取溶媒的提取方法.取本品,研细,精密称 取约2g的量,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50rnl,密塞, 称定重量,分别以20,30,40min进行超声处理.按上述色谱条 件测定,结果显示4个结果差别不大,因而采用提取时间20rnin. 参考文献- [1]国家药典委员会.中国药典,I部[S].北京:化学工业出版社, 2005:438.