尿酶-波氏比色法测定游泳池水中尿素的含量

尿酶-波氏比色法测定游泳池水中尿素的含量 尿酶-波氏比色法测定游泳池水中尿素的含 量 488中国卫生检验杂志2006年4月第l6卷第4期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology.Apr2006;Vol16No4 【经验交流】 尿酶一波氏比色法测定游泳池水中尿素的含量 陈爱国,邵国健 (浙江省湖州市疾病预防控制中心,浙江湖州313000) [关键词】尿酶一波氏比色法;游泳池水;尿素 [中图分类号]R123.1[文献标识码]C[文章编号】1004—8685(20o6)o4—0488—02 游泳池水中尿素是公共卫生监测的一项重要指标,它反 映了游泳池水受污染的情况,尿素超标时引起人体过敏,产生 刺痒等各种症状.目前测定尿素常用是二乙酰一肟安替 比林法…,此法线性范围窄,方法繁锁,试剂保存不便,反应时 间长,易褪色.笔者参阅有关文献J,研究采用脲酶一波氏比 色法测定游泳池水中尿素的方法,尿素浓度在1—80g/lIll 范围内与吸光度有很好的线性关系,取样量小,反应时间仅需 10rain,灵敏度,准确度,精密度较好,操作简单,省去以往常用 的稀释步骤,且不需复杂设备,适于各级实验室. 1材料与方法 1.1原理 脲酶水解尿素,在碱性条件下释放氨,氨与次氯酸反应生 成氯铵,再与酚衍生物作用生成绿色吲哚酚,亚硝基铁氰化钠 催化反应,绿色吲哚酚的生成量与尿素含量成正比,在620nm 波长处有吸收峰.其反应为: 尿素+H20NH+CO NH3+OC1一NCl+OH— NH:C1+酚衍生物+0绿色吲哚酚+H:O (显色剂用苯酚替代酚衍生物时,反应生成为蓝色吲哚 酚,在630哪处有最大吸收值.) 1.2试荆与仪器 脲酶(冻干);显色剂I(酚衍生物及亚硝基铁氰化钠溶 液);显色剂?(碱性次氯酸溶液);缓冲液pH7.0;以上试剂可 由上海伊华医学科技有限公司提供.尿素溶液:准确称 取0.1000g尿素于小烧杯中,加少量纯水溶解后转入 1000lIll容量瓶中,加0.1lIll三氯甲烷并用纯水定容,此溶液 每毫升含0.1mg尿素. 723分光光度计(上海第三分析仪器厂). 1.3操作方法 1.3.1用缓冲液5.5lIll复溶试剂脲酶冻干品,待用. 1.3.2标准曲线制备取25lIll比色管加入尿素标准液0, 0.25,0.5,1.0,l_5,2.5,并用纯水稀释至25,尿素浓度 为0,1,2,4,6,10g/ral,此为低标准浓度系列;加入尿素标准 液0,2.5,5.0,10.0,15.0,20.0lIll,并用纯水稀释至25lIll,尿 素浓度为0,10,20,4o,印,80lIll,此为高标准浓度系列.用 [作者简介]陈爱国(1975一),男,检验技师,主要从事卫生理化 检验工作. 移液枪各吸取100上述标准系列溶液至10lIll比色管中, 加脲酶100,混匀,37?水浴5rain,取出,分别加入显色剂 I,显色剂?各2.5OlIll.充分混匀后置37?水浴5rain,取 出.以空白管调零,在620nm处,1cm比色皿.测定各管吸 光值. 1_3.3样品测定取水样100,按上述步骤测定吸光值, 查标准曲线,得出水样中尿素含量. 2结果与讨论 2.1标准系列 低浓度A=0.0064C(lIl1)+0.0O48,相关系数r= 0.9997;高浓度A=-0.0064C(g/m1)+0.0045,相关系数r= 0.9999. 经20次空白值测定数据计算,标准偏差s:8.5×10,,最 低检出限为0.加lIll,尿素含量在1—80m$/L范围内符合 朗伯一比耳定律. 2.2波长范围的选择 在580—650iIm处进行选择,实验结果,620哪处有最大 吸收值. 2.3干扰物的影响 2.3.1氨的影响一般情况下生活饮用水中的氨氮要求小于 0.50me/L以下,测定结果不受影响.当游泳池水受污染严 重,氨的含量较高时,需测定脲酶处理前后的氨含量,再计算 尿素浓度. 2.3.2余氯的影响将尿素标准配成4,10,2o,60me/L溶液 后,加入氯制剂使余氯达到1.0mg/L,分别测定,经检验加氯 后测得值与标准值无显着性差异. 2.3.3空气中的氨气污染试剂或玻璃器皿,可使检测结果偏 高. 2.4精密度实验 取3份游泳池水样在不同时间,相同条件下进行6次测定 得RSD<1%(结果见表1). 裹1对不同样品进行6次测定结果(mg/LJ 样品l23456is脚(%) 中国卫生检验杂志2006年4月第l6卷第4期 Chine~kumfl0fHealt}lLabomto~TklII10Jo,Apr2006;Vd16No4489 2.5回收率实验一2000游泳池水中尿素测定方法分别测定,经配对t检验,P 用该方法进行高中低3个浓度的加标回收实验.回收率>0.05,两种测定结果无 显着性差异(见表3). 97.2%.-102.2%(见表2). 衰2方法回收率实验 2.6对比实验 取游泳池水10份,用本法和国家标准方法GB/T182o4.29 裹3两种方法测定样品结果Img/L) 编号12345678910 国标法4.113.282.193.771.892.334.526.742.331.65 本法4.123.332.153.741.862.304.556.772.311,65 [参考文献] [1]GB/TI82~.29—2000.游泳池水中尿素测定方法[S]. [2]陆永绥,张伟民.临床检验管理与技术规程[M].浙江:浙江大学 出版社.20o3.515—517. (收稿日期:2oo5—12-20) (上接第486页) 2.2植物色素的干扰 变色酸法和盐酸苯肼法操作简便快速,但都易受植物色 素的干扰,变色酸法的生成物为复色,不易判断;盐酸苯肼法 因需加入可使蛋白质沉淀的铁氰化钾试剂,有时可导致溶液 混浊,使比色结果偏高. 2.3显色稳定性比较 品红亚硫酸法是甲醛的特效反应,在硫酸介质中唯甲醛 产生蓝色,能将甲醛与别的醛类区别开来.此法定性较好. 但其所用试剂配制较繁,加硫酸后生成的蓝色产物稳定时间 短,需尽快测定,在操作中应注意. 2.4较好的测定方法 乙酰丙酮法生成物稳定时间长,标准曲线线性关系好, 回收率高,是甲醛合次硫酸氢钠定量的较好方法.但应注意 乙酰丙酮在保存过程中被阳光照射易变质,使用时需重新蒸 馏. 2.5空白对照样品的使用 在实际测定中,还应选择合适的空白对照样品(面粉). 正常面粉中因含有类胡萝卜素等植物色素,常使溶液显浅橙 红色,干扰显色反应,且甲醛合次硫酸氢钠分解较快,粉状物 在一两个星期内就完全分解.选用品红亚硫酸法也不应忽视 低浓度阳性面粉与阴性面粉显色较难区分,遇此情况应反复 用几种方法进行测定,也可测定二氧化硫进行定性,并结合现 场调查,慎重考虑再下结论. [参考文献】 [1]中国医学科学院卫生研究所.水质分析法[M].北京:人民卫生 出版社.1972. [2]中国预防医学科学院环境卫生检测所.环境空气质量监测检验方 法[M].北京:中国科学技术出版社,1991. [3]试剂手册[M].上海:上海科学技术出版社.1984. (收稿日期:2oo5一l2—27) (上接第487页) 裹1水样回收率试验结果3小结 采用氢化物发生原子荧光光谱法同时测定饮用水中的 砷,硒,实验结果表明此方法测量范围广,灵敏度高,精密度与 回收率试验均符合要求.用此方法测定了大量的饮用水样 品,结果令人满意,在实际工作中有很大的推广价值. [参考文献] [1]生活饮用水检验[S].20o1. [2]伍云卿,范超.氢化物发生原子荧光法同时测定食品中砷和锡 [J].中国公共卫生.2oo5,21(2):239—240. (收稿日期:2oo5一l2一lO)