葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶微板法)

葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶微板法) 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法) 简介: 葡萄糖(Glucose, Dextrose,Glu)又称玉米葡糖,简称葡糖,化学式CHO,分子6126量为180.16,是自然界分布最广、最重要的一种单糖,属于多羟基醛。用酶学方法测定葡萄糖是生化检测中的常用方法,最常用的有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法。上述酶学法特点是:1、灵敏度、准确度、精密度均高;2、使用温和的反应条件;3、操作简便;4、适用于自动分析仪。 Leagene葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶比色法)其检测原理是在己糖激酶的催化下,葡萄糖和ATP发生磷酸化反应生成葡萄糖-6-磷酸,后者不NAPD在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶催化下发生氧化还原反应,生成6-磷酸葡萄糖酸和NAPDH,NADPH的生成量不葡萄糖浓度成正比,分光光度计进行比色测定。本试剂盒与门用于人或动物的血清、血浆、脑脊液、尿液、细胞、组织等样本中葡萄糖含量定量测定,特异性高,不受尿酸和抗坏血酸的干扰,故可以检测尿液中葡萄糖。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。 组成: 编号 TC0701 Storage 名称 50T 试剂(A): 显色试剂 5ml -20? 避光 试剂(B): 酶试剂 5ml -20? 避光 临用前,按显色试剂:酶试剂=1:1混匀,即HK工作液,4?保存。 试剂(C): Glu标准(5mmol/L) 1ml -20? 使用说明 1份 自备材料: 1、 生理盐水或PBS 2、 离心管、小试管或96孔板 3、 水浴锅或恒温箱 4、 分光光度计或酶标仪 5、 全自动或半自动生化分析仪 操作步骤(仅供参考): 1、 样本处理: ?血清、血浆、脑脊液、尿液样本:从待测样本中分理出的血清或血浆不应有溶血,直接检测,如超过线性范围,用生理盐水稀释后检测。 ?细胞样本: 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 6a、取适量的细胞(一般推荐>10以上),离心,弃上清,留取沉淀。 b、用PBS或生理盐水清洗,离心,弃上清,留取沉淀。 c、加入PBS或生理盐水匀浆,冰浴条件下超声破碎细胞,功率300W,每次3~5s,间隔。亦可手动匀浆,制备好的匀浆液不可离心,待用。亦可用Triton X-100冰浴,制备好的裂解液不可离心,待用。 ?组织样本:准确称取适量组织样本,按质量(g):生理盐水或PBS(ml)的比例,加入生理盐水或PBS,冰浴条件下手动或机械匀浆。离心,取上清待用。 2、 酶标仪Glu测定操作: ?按下表依次加入试剂: 空白管(B) 对照管(C) 标准管(S) 待测管(U) 生理盐水(ml) 0.005 0.2 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.005 待测样本(ml) 0.005 0.005 HK工作液(ml) 0.2 0.2 0.2 ?充分混匀, 37?水浴中孵育。 ?酶标仪测定340nm波长处吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。 3、 分光光度计(1ml比色杯)、半自动生化分析仪Glu测定操作: ?按下表依次加入试剂: 空白管(B) 对照管(C) 标准管(S) 待测管(U) 生理盐水(ml) 0.01 1.0 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.01 待测样本(ml) 0.01 0.01 HK工作液(ml) 1.0 1.0 1.0 ?充分混匀, 37?水浴中孵育。 ?分光光度计测定a波长处吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。 4、 普通分光光度计(2ml比色杯)Glu测定操作: ?按下表依次加入试剂: 空白管(B) 对照管(C) 标准管(S) 待测管(U) 生理盐水(ml) 0.02 2.0 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.02 待测样本(ml) 0.02 0.02 HK工作液(ml) 2.0 2.0 2.0 ?充分混匀, 37?水浴中孵育15min。 ?分光光度计测定吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 5、 全自动生化分析仪Glu测定操作: ?按下表依次加入试剂: 空白管(B) 对照管(C) 标准管(S) 待测管(U) 生理盐水(ml) 0.005 0.3 Glu标准(5mmol/L)(ml) 0.005 待测样本(ml) 0.005 0.005 HK工作液(ml) 0.3 0.3 0.3 ?充分混匀,水浴中孵育。 ?酶标仪测定吸光度。以空白管调零,读取标准管和各待测管的吸光度。 机器参数: 主波长 340nm 反应类型 终点法 反应方向 升反应(+) 计算公式: 葡萄糖(mmol/L)=,(A-A-A)/(A-A),×5mmol/L UCBSB 葡萄糖(mg/dl)=葡萄糖(mmol/L)×18 参考区间: 健康成年人空腹葡萄糖:3.9~6.1mmol/L(70~110mg/dl) 备注:Glu标准(5mmol/L)=90mg/dl 性能指标: 外观 无色至淡黄色澄清液体 线性范围 0~25mmol/L,r>0.990 变异系数 批内<3%,批间<5% 空白吸光值 <0.2(1cm光径) 干扰因素 轻度溶血、脂血、黄疸、VC、氟化钠、 肝素、EDTA、草酸盐均不干扰。 稳定性 密闭,12个月 注意事项: 1、 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。 2、 本法可直接用于检测脑脊液和检测尿液中的葡萄糖含量。 北京雷根生物技术有限公司 www.leagene.com 3、 待测样本如不能及时测定,应置于2~8?保存,3天内稳定。 4、 溶血样本,若血红蛋白超过5g/L时,会干扰检测。 5、 本法线性范围可达25mmol/L,如果样本葡萄糖浓度过高,结果可能呈假性降低。应 用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。 6、 配制好的HK工作液,4?避光保存,1周有效。 有效期: 12个月有效。 相关: 编号 名称 DC0032 Masson三色染色液 DM0007 瑞氏-姬姆萨复合染色液 NR0001 DEPC处理水(0.1%) PW0053 Western抗体洗脱液(碱性) TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)