地红霉素肠溶片检测技术分析

地红霉素肠溶片检测技术 [摘 要]目的 对地红霉素肠溶片释放度测定的三种方法进行系统的研究和比较，并建立其最佳测定方法。硫酸显色法因试剂易得，操作简便，快捷、准确，将其作为最佳测定方法。 [关键词]地红霉素 TH552 A 1009-914X(2014)10-0301-01 地红霉素(dirithromycin)是一种新的第二代红霉素类大环内酯类抗生素，由红霉环胺与脂肪醛酸缩合而成。地红霉素通过阻碍细菌转肽过程，抑制细菌蛋白质的合成。体外试验证明地红霉素对临床上多种常见致病菌有抗菌作用。地红霉素具有与红霉素相似的抗菌谱，其特点是药动学性质优良，半衰期长达20,50h，不良反应相对较轻。我国的试行药品中采用了硫酸显色法;另外，还可以采用含量测定的HPLC法进行释放度的测定。 1 仪器与试药 1.1 仪器 ZRS-8型智能溶出试验仪(天津大学无线电厂);ShimadzuUV-2401PC型紫外-可见分光光度计;Shi-madzu高效液相色谱仪(LC-10ATvp泵、SPD-10Avp可见紫外检测器、SCL-10Avp控制器);AE200电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)。 1.2 试药 地红霉素对照品(纯度99.83%)为自制，并由中国药品生物制品检定所标定;地红霉素肠溶片(规格:0.25g)为自制产品;10%占吨氢醇甲醇溶液购自北京恒业中远化工有限公司;乙腈、甲醇为色谱纯;盐酸、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠及硫酸等均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 占吨氢醇显色法 在采用占吨氢醇显色法测定本品释放度的过程中发现，完全依照USP23中的显色条件，方法的线性和耐受性不佳;经过改良显色条件，可使方法具有较好的线性和显色稳定性。其他条件如对照品溶液的浓度、检测波长等则与USP23中条件相同。 2.1.1 美国药典中的显色条件。精密量取待测溶液0.50ml，加入0.50ml乙酐，混匀。然后加入5.0ml冰乙酸，静置5min，加入0.50ml占吨氢醇试液，放置30min使显色。 2.1.2 改良后显色条件。精密量取待测溶液1.0ml，加入0.10mol/L盐酸溶液4.0ml，摇匀，再加占吨氢醇试液10.0ml，混匀，于沸水中加热5min，于冰浴中冷却，再于室温放置15min。占吨氢醇试液的配制取10%占吨氢醇甲醇溶液0.02ml，置100ml量瓶中，加冰乙酸20ml及盐酸1ml，摇匀，用冰乙酸稀释至刻度。 2.1.3 标准曲线的制备。精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成0.07、0.14、0.21、0.28、0.35、0.42、0.49和0.56mg/ml的标准溶液。分别精密量取1.0ml，按上述方法进行显色，测定540nm波长处吸收度。以吸收度A对标准溶液浓度C(mg/ml)进行回归，得标准曲线方程为:A=1.8452C-0.0042，r=0.9998。 2.1.4 溶液室温放置稳定性试验。取上述0.28mg/ml的标准溶液于室温下放置，分别于0、1、2、4、6和8h精密量取1.0ml进行显色，测定。结果明溶液的吸收度在4h内变化不大。 2.1.5 回收率试验。精密称取地红霉素11、14及17mg，分别置50ml量瓶中，加入处方量的空白辅料，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤。分别精密量取续滤液1.0ml，按上述方法进行显色，于540nm波长处分别测定吸收度。计算测得量及回收率，结果见Tab.1。 2.1.6 测定法。取本品，先以盐酸溶液(9?1000)900ml为溶剂，采用篮法，转速100r/min，经2h，每片肠溶膜均不得有裂缝或软化现象;继以磷酸盐缓冲液(pH6.8)900ml为溶剂，45min时取溶液10ml，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，并稀释成0.28mg/ml的溶液，作为对照品溶液;精密量取上述溶液各1.0ml，加入0.10mol/L盐酸溶液4.0ml，摇匀，再加入占吨氢醇试液10.0ml，混匀，于沸水中加热5min，于冰浴中冷却，再于室温放置15min。以空白试剂溶液作对照，于540nm波长处测定吸收度，以两者的比值计算释放百分率。 2.2 硫酸显色方法 采用显色条件与地红霉素肠溶片试行标准中规定的相同条件，即以(75?100)硫酸液5ml为显色试剂，室温下反应1h，检测波长为482nm。 2.2.1 标准曲线的制备。精密称取地红霉素对照品适量，用pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成32、64、96、128和160μg/ml的标准溶液。分别精密量取5.0ml，加入(75?100)硫酸液5ml，摇匀，室温下放置1h，测定482nm处吸收度。以吸收度A对标准溶液浓度C(μg/ml)进行回归，得标准曲线方程为:A=0.0064C-0.0766(r=0.9993)。 2.2.2 溶液室温放置稳定性试验。取上述96μg/ml的标准溶液于室温下放置，分别于0、1、2、4、6和8h精密量取5.0ml，进行显色，测定。结果表明，溶液的吸收度在4h内变化不大。 2.2.3 回收率试验。精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素80、100和120μg/ml的溶液，分别精密量取5.0ml，按上述方法显色，测定482nm处吸收度。计算测得量及回收率，结果三个剂量的回收率分别为99.6%、100.2%和99.1%，对应的RSD分别为0.8%、0.6%和0.5%。 2.2.4 测定法。取本品，按照2.1.6项下所述方法操作，取磷酸盐缓冲液(pH6.8)为释放介质，45min后取溶液10ml，滤过，精密量取续滤液2ml，加入磷酸盐缓冲液(pH6.8)稀释至5ml，作为供试品溶液;另精密称取地红霉素对照品适量，用磷酸盐缓冲液(pH6.8)溶解，并稀释成100μg/ml的溶液，作为对照品溶液;精密量取上述溶液各5.0ml，按2.2.4项下所述方法显色，测定482nm处吸收度。以两者的比值计算释放百分率。 2.3 高效液相色谱法(HPLC法) 2.3.1 色谱条件与系统适用性试验。色谱柱:Diamond-C 18(4.6mm×250mm，5μm);流动相:乙腈?甲醇?磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾1.41g与磷酸氢二钾6.91g，加水至1000ml)(44?19?37);检测波长205nm;流速2ml/min;柱温40?;进样量10μl。 系统适用性试验依照USP23中地红霉素肠溶片含量测定项下方法进行。根据试验结果规定，地红霉素16R异构体峰与9(S)红霉胺峰之间分离度R12不得小于5.0，地红霉素16R异构体峰与16S异构体峰之间分离度R2.3不得小于2.0。 2.3.2 空白辅料及溶剂的干扰试验。试验结果表明，空白辅料及溶剂(pH6.8磷酸盐缓冲液)均在2min之前出峰，不干扰样品的测定。 2.3.3 标准曲线的制备。精密称取地红霉素对照品适量，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解并分别稀释成0.05、0.10、0.20、0.40和0.60mg/ml的标准溶液。分别吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以峰面积A对浓度C(mg/ml)进行回归，得标准曲线方程为: A=553934C+894.69(r=0.9999)。 2.3.4 溶液稳定性及精密度。取上述0.20mg/ml的标准溶液于室温条件下放置，分别于0、1、2、4和6h吸取 10μl，进行测定，结果表明，6h内峰面积变化不大，RSD为0.75%。0时连续进样6次，记录色谱图，量取峰面积，计算其相对标准偏差，RSD为0.66%。 2.3.5 回收率试验。精密称取地红霉素及处方比例的辅料，加pH6.8磷酸盐缓冲液溶解，过滤，分别稀释成含地红霉素0.20、0.25和0.30mg/ml的溶液，分别吸取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算测得量及回收率。结果表明，三个剂量的回收率分别为100.0%，99.7%和99.4%，对应的RSD分别为0.5%、0.6%和0.5%。 2.3.6 测定法。分别吸取2.1.6项下所述供试品溶液和对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，按外标法计算释放百分率。 3 讨论 (1)比较上述三种地红霉素肠溶片的释放度测定方法，占吨氢醇显色法为美国药典中规定的方法，操作繁琐，且显色试剂国内没有生产，必须进口;硫酸显色法为我国试行药品标准中规定的方法，优点为试剂易得，操作简便快捷;HPLC法为参考美国药典中地红霉素肠溶片含量测定方法建立的，优点为准确，灵敏度高，但所需时间较长，成本较高。 (2)三种方法均具有较高的准确度，所测得的释放曲线间差异较小。但综合考虑，硫酸显色法成本较低，操作方便，为地红霉素肠溶片释放度测定的最佳方法。 (3)采用上述三种方法测得的自制地红霉素肠溶片45min的释放量均达标示量的100%左右，说明该制剂的释放性能良好。 (4)USP23规定的方法中，占吨氢醇是采用的固体，而国内仅有其10%的甲醇溶液销售，因此，上述占吨氢醇显色法中采用了10%占吨氢醇甲醇溶液，方法学研究表明，这种变动不会影响测定结果的准确性。 文档资料:地红霉素肠溶片检测技术分析 完整下载 完整阅读 全文下载 全文阅读 免费阅读及下载 感谢你的阅读和下载 *资源、信息来源于网络。本文若侵犯了您的权益，请留言或者发站内信息。我将尽快删除。*