紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三萜酸的含量

紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三萜酸的含量 紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三 萜酸的含量 23卷第4期 2010年12月 海南师范大学(自然科学版) Journalo1'}lainanNormaIUniversity(NaturalScience) V0I.23O.4 Dec.2010 紫外分光光度法测定斜脉暗罗 叶和枝总三萜酸的含量 简蓝,刘冰晶,陈光英',毕和平,鲍长余, (1.海海南师范大学化学与化工学院,海南海口571158; 翟明君 2.海南师范大学"省部共建一热带药用植物化学"教育部重点实验室,海南海口57l158) 摘要:测定斜脉暗罗叶和枝中总三萜酸的含量.以熊果酸为对照品,以质量分数5%香草 醛一冰醋酸和高氯酸系统为显色剂,采用紫外分光光度法在546nm波长处测定样品的吸光度.熊 果酸对照品在20~100g/mL范围内呈良好线性关系,回归方程为Abs=(J.1548C+O.0286,r= (J.9993.斜脉暗罗叶和枝中总三萜酸的含量分别为0.592%和1.436%.本法操作简便,结果稳定, 重复性好,易于推广. 关键词:斜脉暗罗;三萜酸;紫外分光光度法 中图分类号:R284.2文献标识码:A文章编号:1674—4942(2010)04—0410—03 UltravioletSpectrophotometricDeterminationofTritepenoidic AcidintheLeavesandStemsofPolyalthiaPlagioneura JIANLan',LIUBingjing'一,CHENGuangying'?, BIHeping'一,BAOChangyu1,21ZHAIMingjun (1.CollegeofChemistryandChemicalEngineering,HainanNormalUniversity,Haikou571158,China; 2.KeyLaborato0o/'TropicalMedicinalPlantChemistryofMinistryofEducation,HainanNormalUniversit), Haikou571158,China) Abstract:Undertheexperimentalconditionsincludingursolicacidasthereference5%,ranillin—aceticacidandper- chlo~'icacidascolorsystem,thecontentoftriterpenoidicacidintheleavesandsteinsofPolyalthiaplagioneurawasde— tel~inedbyultravioletspectI_0ph0tometricmethodat546nm.Thecalibrationcurvewaslinear(r:0.9993)intherange of0.2, 1.6g/mL,andtheCUIvewasAbs=0.1548C+0.0286,thecontentwas1.436%and0.592%.Theresultwassta— ble,andhasgoodrepeatability.Thismethodwasconvenientlytooperateandeasyforapplication. Keywords:Polyalthiaplagioneura;Tritepenoidicacid;UltravioletspectI_f1phot0n1etricmethod 番荔枝科(Annonaceae)斜脉暗罗(Polyahhia plagioneura)系我国的特有植物,分布于两广和海 南的部分地川.国内外学者从暗罗属的20多种植 物中得到了多种萜类,生物碱l1等多种化合物. i萜酸具有广泛的生物活性,可以降低胆固醇,降 血糖,免疫活性,抗炎,抗菌和抗病毒,抗肿瘤活性 等.本文以熊果酸为对照品,以质量分数5%香草 醛一冰醋酸和高氯酸系统为色剂,采用紫外分光 光度法测定斜脉暗罗叶和枝巾总:萜酸的含量,为 斜脉暗罗的开发提供科学数据. 1仪器,试剂与材料 UV2600紫外分光光度计(上海国美科学仪器 有限公司);EYEI40SB一2100旋转蒸发仪(日本东 收稿日期:2010-05—21 基金项目:海南省高校硕士研究生创新科研课题(Hxwsv2o(】9一i0);国家大学生 创新实验项目(101165815) 通讯作者 第4期简蓝等:紫外分光光度法测定斜脉暗罗叶和枝总三萜酸的含量 京理化);索式提取器等. 质量分数95%乙醇,无水乙醇,香草醛,高氯 酸,冰醋酸等均为国产分析纯;熊果酸对照品购自 上海顺勃生物工程有限公司(纯度大于98.0%). 斜脉暗罗采自海南省昌江县,经霸王岭自然保 护区陈庆工程师鉴定为番荔枝科晴罗属植物Poly— althiaplagioneura,标本现存于海南师范大学省部 共建一热带药用植物化学教育部重点实验室. 2实验部分 参照文献【7—1O]的方法并做改进. 2.1对照品溶液制备 准确称取105?干燥至恒重的熊果酸对照品 20.0mg,置于50mL容量瓶中,加无水乙醇溶解并 稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.400g/L溶液,精确移 取溶液2.5mL,定容至100mL,得浓度为0.01g/L 的对照品溶液. 2.2供试品溶液制备 将粉碎过的斜脉暗罗叶和枝置于50cI二烘箱干 燥24h,各准确称取2.0g,用无水乙醇浸泡2h后, 用索式提取器提取8h,提取液用TLC测定,至渣液 与浓HSO反应不显紫色为止.回收乙醇后,提取 液放冷至室温,用无水乙醇定容至100mL,摇匀. 分别准确吸取叶和枝提取液2.5mL和5.0mI于 100mL容量瓶中,再用无水乙醇定容,摇匀,制得 供试品溶液. 2.3测定波长选择 精确量取对照品溶液5.0mL,加入5%香草醛一 冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸溶液0.8mL显色后,进 行全波长扫描,随行空白对照.结果表明,对照品溶 液在546Elm处有最大吸收峰,试验结果见图1,故 选择546am作为样品测定波长. 2.4曲线绘制 准确吸取对照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0, 1.2,1.6mL分别置于10mL容量瓶中,沸水浴挥去 无水乙醇,冷却后,加入5%香草醛一冰醋酸溶液 0.2mL和高氯酸溶液0.8mL,将容量瓶放人70cI= 水浴中加热15min,冷却至室温,用冰醋酸定容到 刻度,摇匀.在546nm波长处测定吸光度值,随行 空白对照.以熊果酸含量(mL)为横坐标,吸光 度值为纵坐标,作图得到标准曲线(见图2),标准 曲线方程为:A=0.1548C+O.0286,式中A为吸光 度值,c为浓度(g/mL),相关系数r=0.9993,线性 范围为0.2—1.6mL. 4ll 600700800 h/nm 图1对照品紫外吸收图 Fig.1UVabsorptionspectrumofreferencesubstations C(mL) 图2标准曲线图 Fig.2Standardcurve 2.5稳定性实验 取对照品和样品溶液各5.0mL,按照2.4项下 方法进行,每隔15min测定一次,结果见表1,RSD 值较小(RSD=2.37%,1.27%,1.75%),表明本法在 1.5h内基本稳定. 2.6精密度实验 取同一批样品液,进行5次平行实验,测定含 量,结果见表2,叶和枝的分别为RSD=0.85%(n=5) 和RSD=I.57%(n=5),精密度良好. 2.7加样回收实验 准确量取5份已知含量的斜脉暗罗叶和枝提 取液各5.0mL,准确加入一定量的的熊果酸对照 品,余下部分按2.4项下方法操作,实验结果见表 3.实验表明,叶提取物平均回收率100.57%,RSD= 1.50%(n=5),枝提取物平均回收率100.76%,RSD= 1.03%(n=5). 2.8样品含量测定 准确量取各3份斜脉暗罗叶和枝的样品溶液 412海南师范大学(自然科学版)2010钷 5.0mL于50.0mL容量瓶中,沸水浴挥去无水乙醇, 冷却后加入5%香草醛一冰醋酸溶液1.OmL,高氯酸 4.0mL,容量瓶放人70qC水浴中加热15rain,冷却 至室温,用冰醋酸定容,摇匀,余下部分按2.4项方 法操作.实验和计算结果见表4,斜脉暗罗叶中总 j三萜酸含量为1.436%,RSD=0.42%(n=3),枝中总 三萜含量为0.592%,RSD=I.88%(n=3). 表1稳定性实验 Tab.1Stabilitytest ? 表2精密度实验 Tab.2Precisiontest 表3加样回收实验 Tab.3Recoverytest 3讨论 表4样品测量结果 Tab.4DeterminationresultsOfsamples 测量总三萜酸类时,文献报道显色系统香 草醛一冰醋酸和高氯酸溶液的是不同的,本文对质 量分数为5%的香草醛一冰醋酸溶液与高氯酸溶液 的比例进行了调整,结果表明,本实验显色稳定,重 复性好. 试验结果表明,在显色系统香草醛一冰醋酸和 高氯酸溶液条件下,用紫外光分光光度法测定斜脉 暗罗中的总三萜酸有良好的线性关系,干扰少,方 法简便,测定结果准确可靠,是测定斜脉暗罗总三 萜酸类化合物的较佳方法. (下转第448页) 448海南师范大学(自然科学版)2010扭 的整体形象和特色旅游产品. 4.4提高从业人员整体素质 据2007年调查,巴马县直接从业旅游的人员 仅412人",远远不能满足游客的需求.因此,巴马 县可以通过本土导游人员来提高从业人员的 整体水平.本土导游人员可以从当地的居民中选 拔,这样既可以使游客在体验养生的同时又可以潜 移默化的领略到独特的瑶族风情. 4.5扩大社区民众的参与性 旅游资源开发的最终目的之一是要带动当地 经济的可持续发展.因此,应引导当地人以不同的 形式积极参与旅游服务,确立他们的主体参与地位 并从中不断受益,这对资源的开发和保护就变被动 为主动而很容易进行,为巴马县的旅游资源可持续 发展提供源源不断的动力和基础,同时也可以减少 景区内的搬迁,管理等引发的经济利益纠纷问题. 5结语 随着生态旅游的不断发展,巴马县的长寿生态 旅游资源成为一块旅游资源瑰宝,但特殊的地理位 置使得巴马的长寿旅游资源具有脆弱性,即喀斯特 生态环境脆弱性,人文环境脆弱性,生态因子脆弱 性.旅游资源的持续利用是发展旅游所追求的一个 目标,因此,在开发利用的过程中,必然要保护优 先,合理利用,设施建设以保护生态环境为主才能 保证资源的持续利用,同时明确主题,进行多元化 宣传,提高从业人员整体素质,扩大社区参与度,形 成一个成熟的旅游产品,才能实现长寿旅游资源的 独特价值,实现可持续发展. 参考文献: [1】卢家鑫.原生态民族文化旅游开发及民族文化传承与发 展【J】.贵州师范大学:自然科学版,1008,26(1): 1O3—112. 【2]张瑞泉,李孝鉴,丁永祯.乐东黎族自治县旅游资源及生 态旅游开发对策探讨【J】.热带地理,2006,26(2):181—186. 【3]田喜洲.关于生态旅游资源脆弱性的深入分析『I】.林业 经济问题,2006,26(1):64,67. 【4】巴马瑶族自治县志编纂委员会.巴马瑶族自治县志【M1. 广西人民出版社.2003:27—29. 【5】唐照凡.巴马瑶族自治县土地志lM】.南宁:广西人民出版 社.1999:38—56. 【6】王世杰,季宏兵,欧阳自远,等.碳酸盐岩风化成土作用的 初步研究【J】.中国科学(D辑),1999,29(5):441—449. [7】苏维词.贵州喀斯特山区生态环境脆弱性及其生态整治 【JJ.中国环境科学,2000,20(6):547—551. f8]田喜洲.关于生态旅游资源脆弱性的深入分析fJ】.林业 经济问题,2006,26(1):64-67. f9】夏敏慧,骆冰,陈智,等.海南少数民族体育旅游的开发研 究【J】.海南师范大学:自然科学版,2010,23(2):224—228 [10】吴良林.广西喀斯特山区原生态旅游资源脆弱性及其 安全保护[J】.热带地理,2008,28(i):75—79. 责任编辑:黄澜 (上接第412页) 参考文献: [I】蒋英,李秉滔,李延辉.中国植物志,第三十卷:第二分册 『M1.北京:科学出版社,1979:170. f2】ChoudhuryMH,MohammadA.HossainAndmoham— madAB.ashid,ClerodaneDiterpenoidsfromPolyalthia Iongifoliavar.Pendulla【J】.BiochemicalSystematicsand Ecology,1995,23(3):331—332. 【3】JossangA,LeboeufM,CaveA,eta1.Alcaloidesdesan— nonacees,L:AlcaloidesdesPolyalthiacauliflora[J】.JNat Prod,1984,47:504-513. 【4]WuYC,DuhCY,WangSK,eta1.Twonewnatural azafluorenealkaloidsandacytotoxicaporphinealkaloid fromPolyalthialongifloria【J】.JNatProd,1990,53: 1327-1331. 【5】郑祥慈,杨仁洲,徐任生,等.斜脉暗罗素甲一具有C一OH 的单四氢呋喃环型番荔枝内酯?I.植物,1994,36 (7):557—560. 【6]姚新生,吴立军.天然药物化学IM】.4版.北京:人民卫生 出版社,2003,306.25(1):4. 【7】陈彦君,程素霞,龙跃,等.中草药雀儿舌头中总三萜酸含 量的紫外分光光度法测定【J】.郑州大学学4t:医学版, 2008,43(3):602—6O3. [8]张雁冰,王克让,刘宏民.马桑叶中总三萜酸的含量测定 fJ】.时珍国医国药,2006,17(4):529—530. [9]周巧霞,张经硕,顾明,等.测定山楂及提取物总三萜酸的 含量【J】.中国野生动植物资源,2004,23(5):43,44. 【10】蔡亚玲,阮金兰,苏群,等.紫背鼠尾草中总三萜酸的含 量测定【J】.中药材,2008,31(5):692—693. 责任编辑:毕和平