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精子活率 

2017-11-17 6页 doc 21KB 56阅读

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精子活率 精子活率  一、实验目的 1、掌握精液的活力评定方法及评价指标; 2、掌握用血球计数板进行精子密度计数的方法; 3、了解并验证某些外界因素对家畜精于的影响,以加深和提高正确进行精液处理操作的科学意识,为学习人工授精技术奠定基础。 二、实验材料 1.精液样品:牛精液(冻精)或猪精液 2.药械用品:0(5、3,和0(9%氯化钠溶液,4,柠檬酸钠液、6,葡萄糖液(pH值3(0,7(0、8(0)、3,碳酸氢钠液、3,柠檬酸液、75,酒精,0(1,新洁尔灭液、2,来苏儿溶液,兔血清。温度计、镊子、漏斗、玻璃棒,大塘瓷盘、热水...
精子活率 
精子活率  一、实验目的 1、掌握精液的活力评定方法及评价指标; 2、掌握用血球计数板进行精子密度计数的方法; 3、了解并验证某些外界因素对家畜精于的影响,以加深和提高正确进行精液处理操作的科学意识,为学习人工授精技术奠定基础。 二、实验材料 1.精液样品:牛精液(冻精)或猪精液 2.药械用品:0(5、3,和0(9%氯化钠溶液,4,柠檬酸钠液、6,葡萄糖液(pH值3(0,7(0、8(0)、3,碳酸氢钠液、3,柠檬酸液、75,酒精,0(1,新洁尔灭液、2,来苏儿溶液,兔血清。温度计、镊子、漏斗、玻璃棒,大塘瓷盘、热水、显微镜、载玻片、盖玻片、乙醚、纱布、试管,2,煤酚皂液、保温箱、冰、普通显微镜、血球计数器、95,酒精、乙醚、保温瓶、脱脂棉、滴管、pH试纸、蒸馏水。 三、实验内容 (一)精子活率评定: 必须于采精后立刻在18—25?实验室中进行,最好在37?保温箱内进行, 同时也可以测定精于的密度。 用玻棒蘸取一滴原精液或稀释的精液(马、猪、精液密度低不须稀释,牛,羊密度大,需用0(9,氯化钠溶液稀释,其温度相近),滴在载玻片上,也可滴在载片上翻放于凹玻片的凹窝上,最后置于显微镜下,放大250—400倍检查,显微镜的载物台须放平。并最好在暗视野中进行。 精子的活动有三种类型:前进运动、旋转运动和振摆运动,评价精子活率是根据前进运动精子数多少而定。 精子活率=(总精子数,非前进运动精子数)/总精子数 目前评定精子活率等级的方法有两种: 十级制——在显微镜下估计直线前进运动精子所占百分数,直线前进运动精子为100%者评为1(0级:90,者评为0(9级,依此类推。 五级制——全部精子都呈前进运动者属于“5”级,绝大多数精子(约80,)呈前进运动者为“4”级,前进运动的精于略多,于半数者(约60,)为“3”级,不及半数者为“2”级;呈前进运动的精子数目极少者属“1”级。 牛及羊的精液中由于附性腺分泌物少,要求“密5’即密度为“密”,活率为“5”级)及“密4”或“中5”及“中4”一级才能作为输精之用。马与猪的精液中附性腺分泌多,就是“稀5” “稀4”甚至“稀3”的亦可用于输精。 (二)精子密度计数检查 1(介绍血球计数室的构造(用多媒体或投影仪)。 2(介绍血球吸管的构造及各种家畜应该使用何种血球吸管(红血球吸管或白血球吸管)。由于同学们在学习生理时已熟悉有关血球计数器的运用,故不再详述它的结构。 (1)牛、羊、鸡的精液(密度高)用红血球吸管:若将精液吸至“0(5”刻度处,然后再吸3,NaCl至“101”刻度,为稀释200倍。如将精液吸至“1(0”刻度处,再吸3,NaCl至“101”刻度,则为稀释100倍。 (2)猪、马、兔的精液(密度低)用白血球吸管:若将精液吸至“0(5”刻度处,然后再吸3,NaCl至“11”刻度,为稀释20倍。如将精液吸至“1(0”刻度处,再吸3,NaCl至“11”刻度,则为稀释10倍。 3.方法和步骤: (1)将计数室推上盖玻片。要求盖玻片被推上后以立起计数板不掉下来为原则,并且盖玻片在折光时可见到清晰的彩色条纹。 (2)将盖好盖玻片的计数板置于低倍镜下观察,首先要求找到清晰的计数室。 (3)用血球吸管吸精液,用药棉擦去吸管尖端外围附着的精液,并用3,NaCl稀释,因不同的家畜用不同的吸管稀释。 (4)吸管吸好精液和3,NaCl以后,用拇指及食指堵住吸管两端进行来回的充分摇动,混匀。然后弃去吸管中的前两滴,再将吸管尖端置于血球计数室和盖玻片交界处的边缘上,吸管内的精液自动渗入计数室内,使之自然、均匀地充满计数室。注意不要使精液溢出盖玻片,也不可因精液不足而使计数室内有气泡或干燥处,否则,应重新操作。静置2min,开始计数。 (5)镜检和计数:移到高倍镜下检查。 首先数出四角和正中间的五个方格中的精子数,也就是80个小方格中的精子数。载物台要乎置,不能斜放。光线不必过强。 计算精子数:5个方格中共数的精子数×5,整个计数室中25个中方格内的精子总数。也就是lmm2×l,10mm,1,10 mm3的精子;如果再×10,就为lmm3 l ml精液内的精子数;再X稀释倍数。如果取来精液内的精子数;再×1 000, ”倍,那么还须再דX”倍。将以上的的精液本身不是原精液,而是经稀释“X 结果总括起来说: lml原精液内的精子数,5个中方格数的精子数×5×10×1 000×稀释倍数 )。 (如果是原精液不要דX” 注:(1)一般羊的精子密度为20亿,30亿,ml; 一般牛的精子密度为10亿,15亿,ml; 一般猪、马的精子密度为1亿,1(5亿,ml; 一般兔的精子密度为2亿,3亿,ml; 一般鸡的精子密度为35亿,38亿,ml。 (2)吸管用后清洗步骤: 自来水 蒸馏水 95,酒精 乙醚。 (3)计数板用后清洗方法: 自来水 蒸馏水 白稠布擦干净备用。 (4)也可用移液器稀释。 用移液器吸10 ul精液十1 990ul(在小试管内先加2ml,再吸出10 ul)的3,NaCl,即稀释200倍。同样,20 ul精液用1 980 ul的3,NaCl稀释,即稀释100倍。以此类推。 还有其他方法,如在10ml离心管中,加0(5ml精液,再用NaCl稀释至10ml,即稀释20倍。 (5) 也可用2,伊红溶液稀释精子,既杀死精子又使精子头部着色,使计数容易。 4.注意事项 (1)若精子压计数室的线,则以精子头为准,按照“数上不数下,数左不数右”的原则计数。 (2)为了减少误差,应对同一样品做2,3次重复,求其平均值。如果计数的结果相差较大,则应进行再次检查。 (三)理化因素对精子的影响 1.精液样品的稀释和压片标本的观察 在本实验中,凡精液需稀释时,一律在载玻片上进行稀释,即先在载玻片上滴一滴精液,再滴——滴指定的其它液体,混匀后制成压片标本。以原精液或以6,葡萄糖溶液稀释的精液制成的压片标本作对照用。 将制作好的精液压片标本直接或经规定的处理以后,置于400、600倍显微镜下仔细观察观察精子的运动状态和形态,并评定出精子的活率。 2(温度的影响 (1)用原精液制一压片标本,装入密闭的标本瓶中,迅速放入5,0?以下的冰箱(或装有冰块的广口保温瓶)中3,4分钟,然后取出在室温下镜检。 (2)制一压片标本放在55?恒温培养箱中,3分钟后取出镜检。 (3)制—压片标本缓慢地降温至15,12?立即镜检;然后将其放在酒精灯火焰上方5,7厘米处以钟摆速度左右拉动3,4次升温后镜检。 3.PH值的影响 取一滴原精液滴于载玻片上,滴加—滴3,碳酸氢钠液制成压片标本;另取一滴精液滴加3,柠檬酸液制成压片标本,在室温下放置2,3分钟后镜检。然后,以同样方法各稀释一滴精液,用试纸测出其pU值以便于进行记录。 4.渗透压的影响 (9,氯化钠取两块载玻片,各在其两端分别滴一滴原精液,再分别滴以0液、3,氯化钠液、6,葡萄糖液和蒸馏水,制成压片标本镜检。 5.消毒剂的影响 各滴一滴原精液于载玻片上,制成压片后镜检;然后分别揭开盖玻片,每个标本片上滴一滴下列药液(只滴一种)后再做一次镜检: (1)肥皂水; (2)2,来苏儿液; (3)0(1,新洁尔灭液; (4)75,酒精溶液。 6.光照的影响 取一滴精液制成压片标本后立即镜检;然后将其置于日光下曝晒10分钟以上再次镜检。 7.振荡的影响 取一滴精液制成对照标本片,将剩余的精液剧烈振荡3、5分钟后制片镜检。
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