支原体 衣原体病原体与药敏检测方法现状 局

支原体 衣原体病原体与药敏检测方法现状 局 支原体 衣原体病原体与药敏检测方法 现状 局 支原体、衣原体病原体与药敏检测方法现状、局限性及相关问题分析 解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)和沙眼衣原体(CT)都是寄生在泌尿生殖道的病原体，常引起泌尿生殖道疾患。支原体和衣原体感染不但是非淋菌性尿道炎(NGU)的最主要病因(90%以上)，且已成为发病率最高的性传播疾病，已越来越受到重视。但由于技术局限，目前对其检测仍存在不少局限性。本文就这一问题进行简单的分析。 1、直接培养法:这样可检测到病原体存在的直接证据，此方法为的方法，支原体可用人工合成培养基培养，或作为新诊断试剂方法学评价的金标准。 局限性:虽然为标准的方法，但是缺点也是很明显的，就是需要的时间长。培养法不能快速检测支原体感染，一般解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)需2,3天才能出结果。生殖支原体(MG)生长所需的营养成分复杂，生长极缓慢，一般需2周,3月。沙眼衣原体(CT)必须采用细胞培养，但细胞培养需专业化技术、试剂和设备，要求较高，周期也较长。目前临床一般不采用，仅在科研单位进行科研活动。 2、间接培养法:也就是不一定要直接培养到肉眼或普通显微镜所能看到的菌落，而是根据加入其它试剂，间接判断病原体的存在，另外在培养的同时也进行药敏试验，这样可大大缩短检测的时间。如目前临床培养法检测解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)多采用液体培养基，加样培养变色判断结果，在检测病原体的同时药敏结果也同时可以检测出。 局限性:由于是间接的证据，因此，理论上这种变色也可能由于其它微生物如某些细菌代谢而发生，造成结果出现假阳性，如果造成结果假阳性的细菌为致病菌的话，药敏结果也能在一定程度上反映出该菌对抗生素的耐药性，此时的药敏结果有一定的临床应用价值。但是如果为非致病菌所致如标本受到污染，就有可能使结果产生错误，误导临床用药。 3、免疫法:采用此法检测的试剂目前临床较常用。一般为间接法(ELISA法或金标法)检测抗体。此类试剂理论上灵敏度和特异性都较高。常 用于衣原体的检测。 局限性:由于支原体在人群中广泛存在，许多正常人也有低滴度抗体水平，单纯根据一次抗体检测结果，很难判断标本病人是既往感染还是现症感染，再次测定支原体抗体滴度增加时方可判为支原体阳性。为此要求检测支原体抗体的应为定量试剂，而目前国内间接法检测支原体抗体的试剂都是定性试剂，且有一定的市场占有率，这就说明了为什么许多病人检测抗体为阳性而培养则为阴性，也在一定程度上影响了病情的确诊。国内有些科研单位正研制间接法检测支原体抗原的试剂，直接检测病原体抗原，因此比检测抗体试剂有更高的特异性和准确性。但是用于检测支原体抗原的试剂目前尚未商品化。此外、免疫方法只能判断有没病原体的感染，而不能同时做药敏，临床只能经验性的用药，如有耐药菌就会对治疗有一定的影响。 PCR法:简单的说就是检测标本中病原体的基因的存在。PCR反应有 4、 较高的灵敏度。 局限性:对实验条件、试剂以及操作人员的要求都较高，操作不当易造成错误判断，并且PCR定性试剂一般没有药品批准文号，临床上使用应慎重。定量试剂有药品批准文号，但面市不久，尚处于推广中。科研单位使用PCR试剂一般用于鉴定血清型，而医疗单位使用PCR定量试剂多用于临床疗效观察。同免疫方法一样只能判断有没病原体的感染，而不能同时做药敏，临床只能经验性的用药，如有耐药菌就会对治疗有一定的影响。 5、快速生化法:由于支原体生化酶反应速度和特异性都存在问题，目前尚无检测支原体快速生化法试剂，但衣原体已有此方法学试剂。临床应用较少。 局限性:用此方法用于检测衣原体，假阴性的情况多见。因为此生化反应与衣原体侵染的上皮细胞有关，因此与标本采集的合格程度的关系。由于是化学反应因此某些化学物质如药物也可能对结果有一定的影响。 其它相关问题: 1、标本的采集:标本的采集是保证支原体、衣原体检测准确性中的一个非常重要的环节。标本采集与送检过程应当无菌。在临床中常常会遇到一些患者在采集标本与送检时不注意，造成标本的污染。如采集时尿液时没有及时收集到无菌的容器内，没有采用中段尿，甚至某医务人员有采集分泌物时没有及时的收集到无菌容器内。在送检过程中还有发现有的患者，拿着没有盖子的容器送检，或者是盖子掉了，检起再盖上的状况出现。这样都可能使结果出现错 误，误导诊断与用药。 2、标本接种的时间:除了检测者送检时应当注意外，这与检验人员有相当大的关系。主要就是收到标本后没有立即接种，导致支原体在接种时已经死亡或是其它杂菌生长，污染的检测标本，对检验结果造成影响。还有就是要提醒大家的就是，尽量不要在非正常上班时间如节假日或是夜班时间去检测支原体或是衣原体。因为此时值班人员此时主要是针对急诊，对于此类并不能马上出结果的检测标本就不会太注意(当然不是故意的)，可能到接种时已经是过了很久，还有就是此时的值班人员不一定是该专业的人员，对于接种时的操作等方面就不会那么注意了。 3、标本量的问题:对于分泌物来讲，采集标本量时多时少，如果这次取的分泌物少，即使分泌物中支原体数量多，但是计算的结果可能会出现阴性的结果;同样中段尿是一个定性且很泛的概念，每次不可能取到相同位置的中段尿，也不可能标准化。既然取样不能标准化，计数就不科学，会给临床治疗工作带来误导。此外，试剂厂家没有意识到标本采集量的标准化问题或是故弄噱头和跟风，也会给临床检测带来不便。 4、支原体检测结果变化的原因:很多医院由于条件的限制，没有充分考虑支原体生长增殖所需的最佳条件;试剂厂家标准不一，如试剂厂家仅考虑其它微生物存在造成的假阳性而没考虑某些微生物存在会抑制支原体的生长繁殖;在UU和MH鉴别中，培养基一般添加野株天然耐药的抗生素，但临床株也有可能在进化过程中突变而对这种抗生素敏感，导致假阴性的结果。文献所道在临床工作中发现一种支原体试剂，性病门诊UU阳性率为60.65%，MH阳性率为23.26%，与国外资料比较符合，并且与国内其它文献报道(58.97%)接近，与此对比国内另一种同类试剂UU阳性率为22.17%，MH阳性率为9.35%。这说明了各厂家试剂的敏感性与特异性均有差别。即使是同一厂家，某同一批号衣原体试剂在有些地区(并不一定是性病高发区)的阳性率比较接近厂家标示的水平，而在另外一些地区(有些还是性病高发区)的阳性率则远远低于厂家标示的水平。