受体血清和Hanks液保存兔角膜植片的内皮细胞比较

受体血清和Hanks液保存兔角膜植片的内皮细胞比较 受体血清和Hanks液保存兔角膜植片的内 皮细胞比较 HEILONGJIANGMEDICINEANDPHARMACYFeb.2003,Vo1.26No.1?41? 受体血清和Hanks液保存兔角膜植片的内皮细胞比较 杨丽红王玉清刘远光 (佳未斯大学附属第一医院,黑龙江佳未斯l54003) 提要目的:评价血清对角膜植片保存的意义方法:对新鲜兔角膜在受体血清和Hanks液中分别进行24h和72h保存后, 各组的平均内皮细胞密度及内皮细胞存活率等指标进行比较.结果:血清74h保存组的植片内皮细胞各项指标均优于Hanks 液72h保存组.结论:血清有着维护角膜内皮细胞结构和功能的作用. 关键词角膜保存;受体血清;角膜内皮细胞 中图分类号R329.27;R772.2文献标识码A文章编号1008—0104(2003)01—0041—01 近年来随着角膜移植术的开展,角膜材料供不应求的矛 盾日毅力突出.为了避免不必要的角膜浪费,最大限度的保 存角膜材料的活性,人们对角膜保存技术研究的探索日趋深 入.本文就两种保存方法保存72h以内的兔角膜内皮细胞活 性进行了比较,报道如下. 1材料与方法 1.1角膜材料的保存方法 角膜材料采用两种方法进行保存:?Hanks液保存法: 在0.5的水解乳蛋白一Hanks液中加入100ug/ml的庆大霉 索,再用氢氧化钠将pH值调至7.4,7.8后煮沸灭菌,装入青 霉索小瓶(每瓶约5m1).将角膜片内皮面朝上置于保存液中, 4?冰箱保存.?受体血清保存法:抽取受体兔静脉血10ml, 3000r/min离心10min制成血清,置于消毒的青霉索小瓶内, 加入100ug/ml的庆大霉素.将植片内皮面趄上浸于血清中, 4?冰箱保存. 1.2角膜材料的分组 取新西兰健康大白兔15只(30只眼),耳缘静脉注气处 死后立即摘除眼球,4?冰箱保存2h内分别进行Hanks液保 存(24h,72h)和受体血清保存(24h,72h),分为以下5组:? 对照组:即新鲜角膜组;?处理1组:受体血清24h保存组;? 处理2组:Hanks液24h保存组;?处理3组:受体血清72h保 存组;?处理4组:Hanks液721a保存组. 1.3角膜内皮细胞活性的检测与评价 将角膜片于0.2的茜素红和0.25的锥蓝各染色4min 后,放于载玻片上镜检.观察角膜内皮细胞的形态及着色情 况并照相.采用照相计数的方法用红细胞计数板计算角膜平 均内皮细胞密度及内皮细胞存活率(ESR) 1.4数据处理及统计分析 本实验采用SPSSforWindows10.0软件,计量资料结果 将P<O.05作为差异显着性 以均数士差(士)示, 标准.对5组角膜植片的平均内皮细胞密度和ESR进行方差 分析,q检验和.检验. 2结果 2.1植片的平均内皮细胞密度 结果见附表,对照组,血清组和Hanks液24h保存各组间 差异无显着性;而将Hanks液72h保存分别与对照组,Hanks 液24h保存组及同样72h血清保存组相比.其平均内皮细胞 密度的减少具有统计学意义. 附表各组植片内皮细胞密度及平均存活率的比较(z?5,a=6) 组别密度(个/mm0)平均ESR() 与对照组相比,'P<0.01;与血清24h保存组相比,P<0.05;与 Hanks液24h保存组和血清72h保存组相比,AAp<O.05 作者简介:杨丽红(1974,)女.黑龙江哈尔滨人,硕士. 2.2角膜内皮细胞存活率 在2O×100倍光镜下观察1O个视野并计算活性内皮细 胞的存活率.结果见附表.Hanks液24h保存组,血清72h保 存组,Hanks液72h保存组的ESR与对照组相比,差异具有 显着性;Hanks液24h保存组,血清72h保存组的ESR与血清 24h保存组相比,ESR的下降也具显着性;同时,Hanks液 72h保存组的ESR下降与其24h保存组及同时间的血清保存 组相比,差异也具有统计学意义. 3讨论 各种角膜保存液的研制往往致力于最大限度的保存角 膜材料的活性,使之周围的微环境接近生理条件,历史上,血 清没有被作为保存液广泛应用的原因主要为价格昂贵,采集 困难,不能加热灭菌.但它具有较高的粘稠性,能维持保存液 的凝胶状态,并能较好的维持保存液的pH值,及为细胞提供 各种微量元素,某些中间产物,激素,酶类等物质_1],这些优 点往往是人工合成的保存液很难比拟的.将受体血清保存的 植片用于角膜移植还可以避免残存植片上的血清可能造成 的受体过敏反应.由于穿透性角膜移植的材料要求组织具有 良好的活性,其中内皮细胞的活性最为重要n].本实验以茜 素红和锥蓝对保存的植片进行活性染色及对内皮细胞形态 学进行分析发现,同样条件下保存72h,Hanks液保存组的细 胞着色快,且深而不均匀,细胞轮廓不清晰,细胞肿胀及多形 性较明显,有时可见到细胞融合现象,平均ESR仅为89. 92.而血清保存组,内皮细胞形态较规则,边界也清晰,平 均ESR为95.41.Hanks液72h保存组平均内皮细胞密度 的下降与其它4组相比也具有显着性,而其余4组间差异无 统计学意义.这表明,含有水解乳蛋白的Hanks液虽然含有 很多种营养成分和无机盐离子,但它还是不能有效地起到保 护内皮细胞的作用,难以避免角膜的水肿及内皮细胞的丢 失.而血清却有着天然的维持角膜内皮细胞结构和功能的作 用. 尽管各种新型无血清的角膜保存的研制已成为一种趋 势.但不外乎是在一种基本的合成培养基基础上,通过添加 HCO7及CS等外加成分来维持溶液的pH值及渗透压.这些 虽然使保存液的性状得到一定程度的改善,但是外源物质对 角膜的长期保存是否有害尚无从考证,而且人工培养基往往 缺少血清中的那些维持细胞各种生物学性状的未知成分.总 之,鉴于血清对角膜内皮细胞的保护作用,在血清各成分及 作用未被弄清的情况下,保存液的改良可以考虑将血清作为 一 种成分添加其中. 参考文献 1.鄂征主编.组织培养和分子生物学技术[M].第2版.北京:北京出 版社,l997,2:50 2.杨朝忠.现代角膜移植学[M],第1版.人民军医出版社,l998.1 279 (2001一O9—28收稿) (下转第42页) ? 42?黑龙江医药科学2003年2月第26卷第1期 全髋关节置换术与人工股骨头置换术 在治疗股骨颈骨折中的临床比较 唐华羽 (佳木斯大学2001届研究生,黑龙江佳木斯154007) 关键词股骨颈骨折;全髋关节置换术;人工股骨头置换术 中图分类号R683.42文献标识码B文章编号1OO8—010,1(2003)01—0042一O1 随着老龄化社会的到来.作为老年人常见的股骨颈骨折1资料与方法 已日益增多且发病率有上升趋势.而股骨颈骨折的治疗仍欠我院自1993一O1,2OO1一O1共收治55岁以上股骨颈骨 满意.保守治疗和各种内固定治疗都有较高的骨不愈合及股折患者263例,男198例.女65例,年龄55,80岁,平均62岁. 骨头缺血性坏死的发生率.因此,目前很多医院均采用全髋其中人工股骨头置换96例,人工全髋关节置换167例,均采 关节置换术或人工股骨头置换术进行股骨颈骨折的治疗.为用髋关节后外侧切口.其取样标准为头下型或经颈型新鲜骨 了更好了解两种术式的利弊,我们按着一定的标准筛选两组折或陈旧性骨折经保守治疗骨不愈合者年龄>55岁,随访时 病例进行比较.对术式选择提出了自己的看法. 附表 问超过1年以上.详见附表 两组评估内容比较(j士S) 2结果 两组平均住院时间差异无显着性意义(P>0.05).通过 手术时间,出血量,引流量比较,人工全髋关节置换术出血量 多,创伤大.两组术中术后并发症均较低.各为1例,经过治疗 痊愈.肺炎,褥疮及泌尿系感染等并发症均未发生.两组随访 时间分别为人工股骨头置换术12,6O个月,平均38.3个月, 人工全髋关节置换术12,72个月.平均42.9个月.随访发现 ?人工全髋关节置换术的病人只有1例?出现髋痛且症状 轻,而人工股骨头置换术病人有31例,出现不同程度髋痛.? 人工股骨头置换术病人有8例出现不同程度的髋臼磨损,关 节间隙变窄,髋臼骨皮质变薄,6例在术后12,36个月出现, 2例48个月后出现.?人工股骨头置换术后有5例翻修而人 工全髋关节置换术无l例翻修且术后关节功能良好. 3讨论 关节置换术治疗股骨颈骨折可彻底解决骨不愈合及股 骨头无菌坏死的问题及连续长期卧床引起的肺炎,褥疮及泌 尿系感染等并发症问题,随着人工关节材料及医疗技术 的成熟和发展.关节置换治疗股骨颈骨折必将日益发展起 来.我们通过比较两组病例可以.两种术式患者住院时 间相仿,早期并发症均较低,但人工股骨头置换术虽然费用 低,创伤小.但中远期并发症不仅发生率高,而且与全髋关节 置换组比.在同样具有假体松动时,还有其特有的不同程度 的髋臼磨损.在功能方面本组结果显示,人工全髋关节置换 术治疗股骨颈骨折髋痛少,明显低于人工股骨头置换术.股 骨颈骨折常常见于老年人,其年龄大,手术耐受能力差,手术 风险也比较大.所以我们一定要把握手术最佳时机,要在患 者精力,体力旺盛时期.提供一切必要手段使他们战胜疾病, 恢复生活自理能力.随着我国人民生活质量的提高,对术后 恢复生活和工作能力要求也随之提高,尤其是老年人应最大 限度地恢复其生活和工作能力,减少并发症的发生,避免手 术翻修.我们认为,股骨颈骨折有移位的头下型或经颈型骨 折,年龄>55岁应行人工假体置换术,其中以人工全髋关节 置换术为佳. (2002—11—17收稿) 作者简介:唐华羽(1968,)男.黑龙江佳木斯人,学士.主治医师. (上接第41页) Thepropertiesofrabbitcornealendothelialcells afterpreservati0ninrecipientserumandHankssolution YANGLihongwANGYuqingLlUYuanguang (TheFirstAffiliatedHospitalofJiamusiUniversity,Jiamusi154003,China) AbstractObjective:Toevaluatethesignificanceofserumingraftspreservation.Method:The discrepanciesoftheaveragedensityofendothelialcellsandendothelialcellssurvivalrate(ES R)inrabbit cornealgraftswereanalyzedaftertheywerepreservedinrecipientserumandHankssolutionf or24hand 72h,respectively.Results:ThedensityofendothelialcellsandtheESRofgraftspreservedinHanks solutionfor72hweredistinctlylessthanthosepreservedinrecipientserumConclusions:Serumllasan activefunctioninprotectingendothelia1cells. Keywordscornealpreservation;recipientserum;endothelialcells