严重急性呼吸综合征死亡患者睾丸炎的病因

严重急性呼吸综合征死亡患者睾丸炎的病因 严重急性呼吸综合征死亡患者睾丸炎的病 因 CHINESEJOURNALOFANATOMYVo1.30No.12007解剖学杂志2007年第3O卷 第l期 严重急性呼吸综合征死亡患者睾丸炎的病因 迟晓春祁丽花徐健?杨京京顾江 (北京大学医学部组织胚胎学教研室,北京100083) 摘要目的:研究严重急性呼吸综合征(sARs)死亡患者睾丸的病理变化以及原因.方 法:原位杂交方法检测6例 SARS尸检的睾丸标本内是否存在病毒.免疫组化方法检测睾丸内的自身抗体 IgG,IgA.结果:6例病例均现为 睾丸炎的病理改变.原位杂交没有检测到睾丸内存在SARS病毒,但是在生精上皮 内存在大量的自身抗体IgG和 IgA.结论:自身抗体的损伤可能是SARS患者产生睾丸炎的主要因素. 关键词严重急性呼吸综合征;睾丸炎;自身抗体 StudyoncauseoforchitisinpatientsdyingofSAILS ChiXiaochun,QiLihua,XuJian~,YangJingjing,GuJiang (DepartmentofHistologyandEmbryology,PekingUniversityHealthScienceCenter,Beijin g100083,China) AbstractObjective:TostudythepathologicalchangesofthetestesofSARSpatientsandtheca useoforchitisof them.Methods:SpecimensofthetesteswerestainedwithH— EThen,insituhybridization(ISH)wasperformedtO detecttheSARSCoronavirus(SARCov),andautoantibodiesofIgGandIgAweredetectedby immunohistochemis— try.Results:Changesoforchitisweredemonstratedinallsixpatients.NopostiveofSARS-Co vsignalwasdetected, buttherewereextensiveautoantibodiesofIgGandIgAintheseminiferousepithelium.Concl usion:SARScausesorchi— tis,andtheinjuryofautoantibodiesmaybeoneofthemainreasons. Keywordssevereacuterespiratorysyndrome;orchitis;autoantibodies 严重急性呼吸综合征相关冠状病毒(severea— cuterespiratorysyndromeassociatedcoronavirus, SARS-CoV)作为一种新发现的病毒引发机体多器官 功能衰竭,但其对男性生殖系统影响的相关报道却 很少.HIV,HBV以及腮腺炎病毒等均可以侵入睾 丸,并引起睾丸炎,甚至导致男性不育以及肿瘤[1]. SARS病毒是否也会引起类似的结果呢?我们发现 SARS死亡患者确实存在睾丸炎的病理表现并对引 起睾丸炎的原因进行了初步的探讨. 1材料和方法 1.1标本采集 全部6个病例(S01,S03,S05,S08,$11,S15)均 取自地坛医院SARS期间死亡尸检的确诊病例.患者 年龄20~51岁,中位年龄39岁,体温38~39~C,病程 21~62d,5例经糖皮质激素治疗.1例在整个病程中 未使用激素(So5).实验对照组采用3个标本,其中 C01(38岁)是持续高热后死亡的非S6患者,经过 国家"863"重点项目(2003AA2O8lO7) ?通讯作者E-mail:jianx2005@sina.conl 收稿日期:2006—04—03;修回日期:2006-07—04 大剂量糖皮质激素治疗;C02(28岁),来自变性手术切 除的睾丸;C03(30岁),死于意外事故.以上标本109,6 甲醛溶液固定,石蜡切片,切片厚度6,8ktm. 1.2H—E染色 常规H—E染色,光镜观察. 1.3原位杂交 地高辛标记SARCoV的RNA探针(包括正 义链和反义链),为北京大学医学部病理系张波教授 提供[2].阳性对照采用SARS患者的肺组织石蜡切 片.阴性对照为不加探针的杂交缓冲液.将石蜡切 片脱蜡至水,100ttg/ml蛋白酶K室温处理30min, 4多聚甲醛固定10min,梯度乙醇脱水上行,风干. 加RNA探针杂交,42?杂交16~20h.含509/5甲酰 胺的2×SSC液,55?,20min;2×SSC,37?, 15min;0.1×SSC,室温,15min.室温下,正常马血 清(1:lOO)封闭60min后,碱性磷酸酶标记抗地高 辛抗体(1:500)孵育6Omin.NBT/BCIP显色,甲绿 复染.阳性信号为紫蓝色. 1.4免疫组织化学染色 1.4.1自身抗体IgO染色辣根过氧化物酶标记 的山羊IgO抗体为一抗(抗人的IgG),辣根过氧化物 酶标记的山羊非免疫IgO替代一抗作为同型对照, 一 25— 以排除组织对山羊IgG的非特异吸附造成的假阳 性.石蜡切片脱蜡至水.39/6过氧化氢封闭10rnin. 枸橼酸缓冲液(pH6.0)沸水浴抗原修复50min,自 然凉至室温.109/6山羊血清封闭30min,吸去多余 血清,滴加酶标抗体,4~C过夜.AEC显色,阳性结果 为棕红色. 1.4.2自身抗体IgA染色采用抗人IgA的山羊 IgG作为一抗;非免疫山羊IgG作为同型对照,排除 组织对山羊IgG的非特异吸附.采用PV-9000两步 法染色.实验步骤参照中杉公司的.AEC显 色,阳性结果为棕红色. 以上抗体和试剂盒均购自北京中杉金桥生物技 术有限公司. 2结果 2.1H—E染色 6例SARS死亡患者的睾丸组织均呈现不同程 度的病理变化:生精小管界膜增厚,纤维化,生精上 皮脱落,各级生精细胞明显减少,管腔内几乎未见精 子.睾丸间质充血,血管扩张,并可见睾丸间质内有 白细胞浸润(图1).对照组睾丸C01(持续高热,大 剂量使用激素),间质轻度充血,生精上皮有轻微损 伤,但各级生精细胞均存在,生精上皮的结构基本正 常,管腔内可以见到精子,精子发生过程依然存在 (图2).其余对照组睾丸组织结构正常. 2.2原位杂交(ISH) 全部6例的SARS睾丸均没有检测到病毒序 列,反义链(图3),正义链(图4)杂交及阴性对照(图 5)结果均为阴性.SARS死亡患者的肺部切片(阳性 对照)则可见阳性颗粒位于肺泡上皮细胞和淋巴细 胞的细胞质内(图6). 2.3自身抗体IgG,IgA免疫组织化学染色结果 所有的6例SARS睾丸的生精上皮均有自身抗 体IgG(图7)沉淀,一些生精细胞和支持细胞的胞质 内呈现明显的棕红色阳性结果,除此之外,间质内也 可以看到IgG阳性细胞,而同型对照均为阴性结果 (图8).对照组除了血管腔为阳性,其余部位均为阴 性结果(图9).同时,所有6例SARS睾丸的生精上 皮也均有自身抗体IgA的沉淀(图10),阳性部位的 分布与IgG基本相同.同型对照以及对照组染色结 果也均为阴性(图11,12). 3讨论 与艾滋病病毒,腮腺炎病毒以及乙型肝炎病毒 等类似,SARS病毒也造成患者的睾丸炎病理改变, 导致生精上皮内的生精细胞大量减少,界膜增厚,以 及间质内的白细胞浸润等.高热和激素都可以引起 一 26一 睾丸细胞的凋亡,以及生殖功能的损伤.本研究中 的SARS病例均有高热,其中5例有使用激素史,其 睾丸功能必然会受到影响.因此,高热和激素可能 是引起SARS睾丸损伤的因素之一.本实验对照 C01为持续高热的非SARS患者,也使用过大剂量糖 皮质激素,虽然睾丸出现了轻微的病理改变,但是并 没有出现生精上皮的严重损坏,在管腔内仍然可以 看到有精子发生.而另有1例SARS组睾丸(S05), 在整个病程中没有使用过激素,却与其余5例表现 相似,有明显的睾丸炎症状并有严重的生精上皮的 损伤.虽然糖皮质激素对睾丸功能有一定的影响, 但也是用来控制炎症治疗睾丸炎的常规用药.所 以,一定还存在其他因素导致SARS睾丸病变. 有文章报道ACE2(aniotensin-convertingen— zyme2)是SARS病毒的功能性受体[3]之一,在睾丸 内比较丰富_4],提示睾丸可能是SARS病毒的靶器 官.然而,我们通过ISH检测,在所有6例SARS睾 丸内均没有发现病毒阳性的细胞.我们的结果与 Ding的报道[7]一致.他们采用免疫组织化学和ISH 方法,在4例睾丸内没有检测到病毒.但是也存在 不同的报道,赵景民等[8]通过对睾丸的电镜观察以 及ISH,在睾丸生精上皮和Leydig细胞发现存在病 毒.不同的研究检测的病例不同,检测的时间和方 法也有差异,因此,目前还不能确定SARS病毒是否 直接攻击睾丸,导致睾丸的损害. 由于血睾屏障的存在,以及支持细胞表达FasI (FasLigand),使睾丸尤其是生精小管存在免疫豁免 能力.在SARS睾丸的间质内存在炎性细胞浸润, 这些炎性细胞可以破坏血睾屏障,破坏生精上皮,甚 至可以侵入到生精小管的管腔内[9],它们分泌炎性 细胞因子,损害睾丸的免疫豁免功能,很有可能引起 睾丸的自身免疫反应.正常睾丸由于血睾屏障的存 在,生精上皮内没有自身抗体.然而本研究全部6 例患者的生精上皮内,包括生精细胞和支持细胞,以 及间质内都出现了大量自身抗体IgG和IgA的沉 淀,这些结果都与实验性自身免疫性睾丸炎[1.."的 表现相同.虽然由于病例血清的缺乏,不能检测血 清中抗精子抗体的存在,但是,这些免疫沉淀显示了 睾丸自身免疫的过度激活. 综上所述,我们认为SARS病毒导致睾丸炎,是 多因素共同参与的结果,而SARS病毒所引起的自 身免疫性损伤可能是主要原因之一. Explanationoffigures(seeinsidefrontcover) Fig1TestisfromSARSpatientS11stainedbyH—E Fig2TestisfromcontrolC01stainedbyH—E. Fig3,4TestisfromSARSpatientS08stainedbyISHdetection withantisenseRNAprobeorsenseRNAprobe,showingno Fig5 Fig6 Fig7 Fig8 Fig9 ?11 ?12 positivecel1. NegativecontrolofSARSpatientS08byISH. LungfromSARSpatientstainedbyISHdetectionwithanti senseRNAprobeaspositivecontro1.Positiveappearedin thealveolarcells(broadarrows)andlymphoeytes(thinarrows). TestisfromSARSpatientS08stainedbyImmunohistochemis— tryofautoantibodyIgG.Positivesignalappearedintheplasmaof spermatogeniccells(broadarrows)andSertolicells(thinarrows). IsotypecontrolofIgGfromSARSpatientS08. NormaltestisfromcontrolofC02,stainedbyirnmunohistochemis— tryofIgG.Positivesigr~onlyappearedinthebloodvesse1. TestisfromSRSpatientS08stainedbyImmunohistochemistryof auto,antibodyIgA.Positivesignalappearedintheplasma0fsper— matogeniccells(broadarrows)andSertolicells(thinarrows). IsotypecontrolofIgAfromSARSpatientS08. NormaltestisfromcontrolofC02,Immunohistochemistrystaining ofIgA.Positivesignalonlyappearedinthebloodvesse1. Norma1testisfromcontro1ofC02byimmunohistochemistry stainingofIgA. 参考文献 1DejucqN.Je'gou&Virusesinthemammalianmalegenitaltract andtheireffectsonthereproductivesystem.Microbio1Mo1Bio1 Rev,2001,65(2):208—231. 2ShiX,GongE,GaoD,eta1.Severeacuterespiratorysyndrome associatedcoronavirusisdetectedinintestinaltissuesoffatalca— ses.AmJGastroentero1,2005,lOO(1):169—176. 3LiW,Moore,VasilievaN,eta1.Angiotensin—convertingan— zyme2isafunctionalreceptorfortheSARScoronavirus.Na— ture,2003,426(6965):450—454. 4HarmerD,GilbertM,BormanR,eta1.QuantitativemRNA expressionprofilingofACE2,anovelhomologueofangiotensin convertingenzyme.FEBS,2002,532(卜2):107一I10. 5TipnisSR,HooperNM,HydeR,eta1.Ahumanhomologof angiotensin-convertingenzyme.JBiolChem,2000,275(43): 33238—33243. 6DonoghueM,HsiehF,BaronasE,eta1.Anovelangiotensin— convertingenzyme-relatedcarb0xypeptidase(ACE2)converts angiotensinItoangiotensin1-9.CircRes,2000,87(5):1-9. 7DingY,HeL,ZhangQ,eta1.Organdistributionofseverea— cuterespiratorysyndrome(SARS)associatedcoronavirus (SARS-CoV)inSARSpatients:implicationsf0rpathogenesisandvi— I'UStransmissionpathways.JPatho1,2004,203(2):622—630. 8赵景民,周光德,孙艳玲,等.严重急性呼吸综合症的临床病理及 发病机制研究.中华实验和临床病毒学杂志,2003,17(3): 217—221. 9赵景民,周光德,孙艳玲,等.严重急性呼吸综合征肺外器官的病 理学观察研究.解放军医学杂志,2003,28(6):480—481. 10hohM,HiramineC,TokunagaY,eta1.Anewmurinemodel ofautoimmuneorchitisinducedbyimmunizationwithviablesyn— geneictesticulargermcellsalone.?.Immunohistochemicalfind— ingsoffully-developedinflammatorylesion.Autoimmunity, 1991,10(2):89—97. 11KohnoS,MunozJA,WilliamsTM,eta1.Immunopathologyof murineexperimentalallergicorchitis.JImmunol,1983,130(6): 2675—2682. (编辑:许家军) 解剖学杂志2007年第3O卷第1期 医学院校青年解剖学教师的培养与自我完善 王险峰李思忠 (商丘医学高等专科学校解剖学教研室,商丘476100) 近几年来,高等医学院校办学规模明显扩大,在校学生 人数逐年增多,教师人数相对较少,人体解剖学教师缺乏尤为 突出.人体解剖学青年教师过早地被推向教学第一线,担任 了过重的教学任务,忽略了对青年教师的培养,不仅从一定程 度上制约了青年教师的成长与可持续发展,也影响了教学质 量LlJ.作为一名解剖学教师,笔者对青年教师的培养和自我 完善这一话题作一探讨,以期共同交流和提高. 1加强教师自身素质的培养 青年教师必须具备一定的政治思想素质.只有把坚定正 确的政治方向放在第一位,才能站稳立场,明辨是非,提高工 作的自觉性和社会责任感,激发工作的积极性和创造性.良 好的职业道德就是热爱教育事业,忠诚教育事业,把全部的精 力贡献给人民的教育事业,教师应把培养人才看作是自己莫 收稿日期:2006—05—22;修回日期:200~08—08 大的幸福,学而不厌,诲人不倦.为人师表,教师的一言一行 对学生起着潜移默化的作用,所以教师的身教重于言教,教师 无论在政治思想,道德情操,治学精神,工作态度,生活习惯, 言谈举止等方面都要严格自己,成为学生的楷模. 2系统地学习和掌握基本的教育理论 医学院校的青年教师大都来自高等医学院校的本科生, 研究生.大多对高等教育规律,教学原理不甚熟悉,近年来, 非师范院校毕业生申请高校教师资格考试中都认真地系统学 习和考评了《教育学》和《心理学》,及时补上这一课. 3认真钻研和苦练基本教学技能 青年解剖学教师应多向具有丰富教学经验的老教师请 教,学习从备课到讲课的每一个细节,然后跟着老教师听课, (下转68页) 1魁喜等严重急性呼吸综台征死亡患者晕丸炎病因的初步探讨{宅! ? ' . :?:: ? 0瑟蕾蔓: 疑麓?要 -?-, 鹂? J心SI1睾_cL?刀-I色 lmnJ1I_L?1 ,I-8阜nSARNCov情毒RNAf枭?《链"2目HI? s8晕"他交阳性圳 A1s融菏部s^1{椭毒k^们1H怔袅t砖.?jtL瓢他于肺1?【t)柞自1l也们驯t内 f十 7舟扎伴IgG电化?斩上m乜括精腿tt)t持婀腿【十l 目睾l冉抗体龟徙州,舢同".性 ""H蛆LmIcLI'I1-f?Jm惜内 l?垂n抗l"}【精?_日乜帖1竹眦ct】手?女持腿c,} 【I8^甘机体l#^痤纠化.时".*…什 f:螗H2-甫』L,n磬lH^似j_l厦m竹r__L I"r】【)r?_L