【doc】痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究

【doc】痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究 痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑 肌作用的研究 浙江中医杂志2007年4月第42卷第4期 【实验研究】 痛泻要方与乙酰胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究* 王蓓蓓楚更五郑梅 云南中医学院云南昆明650200 关键词痛泻要方乙酰胆碱离体小肠实验研究 痛泻要方出自《景岳全》,由白术,白芍,陈 皮和防风组成,功效为疏肝利脾,是治痛泻证的主 方.临床医家在应用本方时多主要是围绕着"痛, 泻"为主证而加减应用.肠易激综合征(IBS)即是 以"痛,泻"为主要临床表现,故本方是中医治疗 IBS最常用的基本方.有文献报道,肠易激综合征患 者血中乙酰胆碱(Ach)水平较高[1],故笔者通过对 家兔离体小肠作用的研究,探讨了痛泻要方与乙酰胆 碱对小肠平滑肌振幅,基线和频率的影响,以进一步 明确痛泻要方治疗肠易激综合征的机制,为痛泻要方 的临床治疗IBS提供理论依据. l材料和方法 1.1药品:痛泻要方水提剂,由云南中医学院中药 化学实验室提供,这四昧药按一定比例配成本实验所 用的痛泻要方.氯化乙酰胆碱,上海三爱思试剂有限 公司出品,批号为20030620.Tyrode液(由NaC1 8g,KC10.2g,NaHCO3lg,MgClz0.1g,NaHzPO4 0.05g,CaC120.2g,葡萄糖lg,加蒸馏水至1000ml 配制而成). 1.2仪器:Powerlab/8s生物信号采集系统及恒温浴 槽,澳大利亚埃德公司.软件为Powerlabchart 4.2.3;PrecisaXS125A电子分析天平,瑞士产. 1.3动物:清洁级家兔,体重2,2.5kg,雌雄各半, 由承德医学院实验动物中心提供. 1.4结果的计算方法:按如下方法. 1.4.1振幅:以小肠平滑肌收缩的振幅变化率表示, 中药0剂量组变化率一(Ach相应剂量的振幅一未加 Ach的振幅)/未加Ach的振幅×i009/6,各中药组变 *基金项目:云南省自然科学基金资助课痛泻要方与乙酰 胆碱对家兔离体小肠平滑肌作用的研究,编号:2003C0055M; 同时受云南省教育厅科研基金资助,编号:03y700 化率=(Ach相应剂量的振幅一中药相应各组的振 幅)/中药相应各组的振幅×100%. 1.4.2基线(张力):以基线(张力)下降mV差值 数表示. 1.4.3频率:以小肠平滑肌收缩的频率变化率表示, 中药0剂量组变化率一(Ach相应剂量的频率一未加 Ach的频率)/未加Ach的频率×i00,各中药组变 化率一(Ach相应剂量的频率一中药相应各组的频 率)/中药相应各组的频率×i00. 1.5统计学处理:所有实验数据采用X士S表示. 2实验结果 2.l痛泻要方对Ach所致的家兔离体小肠收缩的作 用:清洁级家兔禁食24小时,击其头部处死后取出 小肠,立刻浸入营养液中,剪去系膜后制成1.5cm的 小肠标本,置于含有20ml台氏液(37-0.5"C)的离 体器官浴槽内,一端连于张力换能器,另一端连于通 气钩,持续通入950+5C02混合气体,加负荷 lg左右,平滑肌张力变化通过张力换能器记录于 Powerlab/8S生物信号采集处理系统.平滑肌在营养 液中稳定30分钟,待产生规律恒定的收缩后,先记 录一段正常曲线,再开始实验.先分别加入不同剂量 的Ach,再分别加不同剂量的痛泻要方.每组加药 前,均冲洗标本3次,待舒缩恢复到用药前水平后再 加下一组药,实验中所用药物浓度均以最终浴槽浓度 计算.观察给药后小肠平滑肌的收缩幅度,基线(张 力),频率的变化,结果见表l,2,3. 2.2先加痛泻要方后加Ach对家兔离体小肠平滑肌 的作用:制作家兔离体小肠标本,方法同前,实验方 法与操作同上,记录一段正常曲线后,分别加入不同 剂量的痛泻要方,再分别加不同剂量的Ach.观察给 药后小肠平滑肌的收缩幅度,基线(张力),频率的 变化,结果见表4,5,6. ? 236?浙江中医杂志2007年4月第42卷第4期 袁1痛泻要方水提物对Ach所致的家兔离体小肠收缩作用的振幅变化率数据(?5,=5) 注:各组分别与中药0剂量组的相应剂量的数据进行比较,*P<O.05,**P<O.01. 表2痛泻要方水提物对Ach所致的家兔离体一J,肠收缩作用的基线(张力)变化率数据(?5,n=5) 注:各组分别与中药0剂量组的相应剂量的数据进行比较,*P<O.05,**P<O.01. 袁3痛泻要方水提物对Ach所致的家兔离体小肠收缩作用的频率变化率数据(士,一5) 注:各组分别与小药0剂量组的相应剂量的数据进行比较,*P<0.05,**P<O.01. 袁4先加痛泻要方水提物后加Ach对家免离体小肠平滑肌作用的振幅变化率数据(z?S,n一6) 注:各组分别与中药0剂量组的相应剂量的数据进行比较,*P<0.05,**P<O.01. 浙江中医杂志2007年4月第42卷第4期 表5先加痛泻要方水提物后加Ach对家兔离体小肠平滑肌作用的基线(张力)变化率数据(士s,=6) 注:各组分别与中药0剂量组的相应剂量的数据进行比较,*P<0.05,**P<0.01. 表6先加痛泻要方水提物后加Ach对家兔离体小肠平滑肌作用的频率变化率数据(士s,=6) 注:各组分别与中药0剂量组的相应剂量的数据进行比较, 3讨论 胆碱能神经元是种系个体发育中最早发现的神经 元,也是肠神经系统内数目最多的神经元[2].AchE 阳性神经是肠道动力疾病研究的重要指标[3].乙酰胆 碱作为胆碱能神经释放的一种兴奋性神经递质,对胃 肠运动调节有重要作用[4],经常用于研究生理或病理 状态下胃肠运动变化[5].由胆碱能神经元释放的乙 酰胆碱可激动胃肠平滑肌细胞膜上的M受体,M受 体是G蛋白耦联受体,M.受体与配体结合后通过G 蛋白与腺苷酸环化酶(AC)耦联,抑制该酶的活性, 使胞内环磷酸腺苷(cAMP)浓度下降,通过细胞膜 信号传导系统,导致胞内钙离子浓度升高],兴奋胃 肠平滑肌并产生强烈的收缩运动[8].当先给予不同剂 量的Ach作用时,痛泻耍方可显着性地抑制hch所 引起的小肠平滑肌的收缩(P<0.01,P<0.05),使 振幅变小,基线(张力)下降,频率减慢;而当先给 予不同剂量的痛泻要方时,痛泻要方可事先显着性地 预防Ach所引起的小肠平滑肌收缩(P<0.01,P< 0.05),此结果提示痛泻要方对肠管产生抑制作用可 能与M胆碱受体被阻断有关.至于痛泻要方对肠管 的作用还与何靶点有关,将在后面的实验中研究. 4参考文献 *P<O.05,**P<0.01. [1]俞亚琴,郭兮钧.健脾疏肝汤对胃肠功能调节作用的实验 研究[J].中医研究,1997,10(3):16—18. [2]NemethL,FourcadeL,PuriP.Markedmorphological differencesinthemyentericplexusbetweenthemesentericand antimesentericsidesofsmallbowelinprematureinfants[J].J PediatrSurg,2000,35(5):748. [3]KobayashiH,LiZ,YamatakaAeta1.Acetylcholinester— asedistributionandrefractoryconstipation-anewcriterionfordi— agnosisandmanagement[J].PediatrSurgInt,2002,18(5— 6):349. [4]DinanTG,ScottLV,BradyDeta1.Alteredhypothalamic cholinergicresponsesinpatientswithnonulcerdyspesia:astudy ofpyridostigminestimulatedgrowthhormonerelease[J].Am JGastroenterol,2002,97(8):1937. [5]何俊堂,刘海峰,房殿春,等.慢传输型便秘大鼠结肠肌 间神经丛胆碱能神经及氮能神经的组化研究[J],解放军医掌 杂志,2004,29(1O):854. [6]朱金照,冷恩仁,张捷.大腹皮对大鼠胃电节律紊乱的影 响及机制[J].解放军医学杂志,2002,27(1):39. [7]操电群.胃肠运动神经调节与高良姜胃肠解痉的可能途径 [J].甘肃中医,2004,17(4):7-9. [8]SimsSM,JiaoY,PreiksaitisHG.Regulationofintracel— lularcalciuminhumanesophagealsmoothmuscles[J].AmJ Physiol,1997,273:1679. 收稿日期2006-11-09