【doc】I—65对豚鼠右心室游离壁缺血再灌注心肌电活动的影响

【doc】I—65对豚鼠右心室游离壁缺血再灌注心肌电活动的影响 I—65对豚鼠右心室游离壁缺血再灌注心肌 电活动的影响 一 /77,f7 第20卷第2期 ,6?嫉.嗽 西安医科大学 1999年6月JOURNALOFXI!ANMEDICALUNIVERSITY Vo1.2ONo.2 Jun.1999 I一65对豚鼠右心室游离壁缺血再灌注 ' 心肌电活动的影响 d 封卫毅袁秉祥魏友侠刘书勤-.一 .?--??一 张秋霞张华安王美纳一 (第一临床医学院药剂科西安710061) . 2 Jc,I 摘要利用一对玻璃徵电极同时记录内外膜下心肌细胞的跨膜电位,研究了模 拟缺血再灌注条件下,3,6-[二甲胺基]一二苯骈碘杂六环枸棵酸盐对离体脬鼠心室肌 心律失常及跨壁传导等电生理特性的影响.结果显示,其可明显性降低心律失常发生 率,改善缺血再灌过程的跨壁传导阻滞,相对增加有效不应期,减少触发活动的发 生. 关键词3,6-E-甲睦基]一=莱骈碘杂士环枸橼酸盐;缺血再灌注律失常;跨 壁传导 I一65即3,6-[二甲胺基]一二苯骈碘杂六 环枸橼酸盐,是我国自行研制合成的具钙拮 抗作用的化台物.I65对在体大鼠具抗缺血 再灌注心律失常(RIA)作用….本文利用豚 鼠右心室游离壁缺血再灌注心律失常模 型],对I一65抗R1A作用的电生理机制进行 了研究. 与 1实验材料 1.1药品I一65由兰州大学化学系陈 淑英提供. 1.2仪器,试齐?和动物仪器:MEZ一 8201型徽电极放大器(日本光电公司);YC一2 程控电刺激仪(成部仪器厂);RM6000型八 道生理记录仪(日本光电公司). 试剂:正常Tyrodes液组成(mmol/L) }NaC1129.0.KC14.0.CaC122.5,MgSO{ 0.5,NaHPO0.9,NaHCO.20.0.葡萄糖 *基础医学院药理学教研室 *第二临床医学院临床药理研毙室 5.5.用5CO2+95O不断饱和的正常 Tyrode's溶液在(36.5?0.5)C时pH值为 7.35,7.4.缺氧Tyrode's液的组成(mmo[/ L):NaC1123.0,KC18.0,CaCI22.5,Mg— SO0.5,NaH2PO0.9,NaHc036.0乳酸钠 20.0.用10CO2十9ON饱和后pH值为 6.8.所用试剂均为钝, 动物:健康成年豚鼠57只,雌雄不限, 体重350,400g,由西安医科大学实验动物 中心提供. 2实验方法取豚鼠击头致晕,迅速开 胸摘取心脏投入正常Tyrode'S液中,小心挤 压洗去淤血.沿室间隔和房室交界处剪取右 心室游离壁约1.5cm大小.放入用正常 Tyrode's液灌流的灌流槽中.将标本心内膜 向上按其自然弯曲形状,从边缘垂直固定.标 本在溶液中距灌流槽底约Imm,保证标本 和灌流液充分接触.灌流液流速为30ml/ m[n. 用仅尖端裸露的金属电极渡宽3ms, 2Hz,1.5倍阚值强度的方波.在标本内膜一 定部位刺激驱动标本,每12个连续刺激间隔 2期封卫毅,袁秉祥,魏友侠等.I65对豚鼠右心室游离壁缺血再灌注心肌电活动的 影响175 3s.用一对玻璃微电极同时分别在心内膜和 心外膜的一定部位记录心肌细胞的跨膜电 位.玻璃微电极用2.7tool/L的KCI溶液填 充,尖端电阻值为10,20兆欧.记录电极距 刺激电极负极4,12ram.生物信号和刺激信 号均由示渡器监视.用磁带记录仪和八道生 理记录仪同步记录.' 观察I65对豚鼠右心室正常心肌电生 理特性的影响时,标本在正常Tyrodes液灌 流槽中平衡60min后,用含有不同浓度药物 的正常Tyrodes液灌流60min.测定给药前 后动作电位时程(APD),内膜有效不应期 (ERP),传导时间(CT)等参数.ERP按文献 方法测定"],从刺激开始到动作电位开始的 时间差即为CT. 观察I65对RIA发生率以及心室肌跨 壁传导等电生理特性的影响时,将标本分为 模型对照组和给药组:模型对照组标本在正 常Tyrodes液灌流槽中平衡60min后,用缺 氧Tyrodes液灌流15mln.然后再用正常 Tyrodes液进行复灌40min.给药组标本依 次用正常Tyrodes溶液和含有一定浓度药 物的正常Tyrodes溶液分别平衡灌流 30rain,然后用含有相同浓度药物的缺氧和正 常Tyrodes溶液与模型对照组平行操作.灌 流液中药物的浓度分别为1/~mol/L和 5/~mol/L.测定缺血时和再灌后不同时刻的 心律失常发生率以及实验过程中各时刻 APDERP,CT等参数.每5min测定记录1 次. 数据处理:药物对正常灌流标本的影 响.用配对t检验;与模型对照组比较,计数 资料用x(2×2)法,计量资料用非配对t检 验. 实验结果 1I一65对脬鼠右心室正常心肌电生理 特性的影响 豚鼠标本21只,分为3组,给予I一65,观 察并计算给药前后各电生理参数的变化率 [变化率一(给药前值一给药后值)/给药前 值].结果显示;给予1/~mol/L和5/~mol/L I一65后,豚鼠右心室内,外膜下心肌APD 心内膜ERP均明显性减小;但心内膜CT和 跨壁CT值均无显着性改变(见】). 表11-65对豚鼠右心室内膜T,O肌电生理参数的影响(;士,n=7) :目,IrisP<0.c5.*P<001 2I一65对脬鼠右心室RIA及心肌电生理 特性的影响 2.1I-65对心律失常发生率的影响 结果显示,1~mol/L(n一7)和5~mol/L(n一7) I一65在缺血过程RIA发生率分别为14.3 和0,再灌注过程为28.6和14.3.与模 型对照组(n一22)的20和75相比,其可明 显降低再灌注过程C-律失常发生率(尸<0. 05). 2.2对APD..的影响如表2所示,在 缺血再灌注过程中,I一65组内膜下心肌细胞 APD..的变化值(变化值或差率一缺血再灌注 过程值一缺血前值)与同时刻对照组的变化 值相比均无显着性差别;对于外膜下心肌细 胞APD除I一65可促进再灌注末的APD恢 复外,与对照组相比均无显着性差别. 176西安医科大学第20卷 2.3对心内膜ERP值和ERP/APD.的相比I一65各浓度组的ERP变化值和ERP/ 影响在缺血末和再灌注初,与模型对照组APD.值均有明显性增加(见表2). 表2缺血再灌过程I一65对豚鼠心室肌APD叭内膜ERP,CT变化的影响(ms,2-- 士) 内膜APD. 内膜ERP ERP/APD00 外膜APD. 内膜CT 跨壁CT {奠型对照组 1ptmol/L组 5ptmol/L组 模型对照组 lptmol,L组 5/~mol/L组 摸型对照组 ]ptmol/L组 5mol/L组 模型对照组 1mol/L组 5,tmml/L组 模型对照组 1,umol/L组 S,umol,/L组 模型对照组 1.,umol/L组 5,umol/L组 一 58.6士57.3' 一 47.1士39.0 一 2O.3士21.0 一 51.9士331 一 21.3士49.5 一 12.9士22.1'' 0.773士0.246 0.986士0.230 0.9804-0.2'19 一 40.7士24.5 一 42.8士32.6十 一 23.1士29.2 10.35士14.34 5.7士4.0 46士2.2 28.1士12.4 15.65:13.0' 12.75:92… 一 49.2士23.5 一 263士443 — 7.95:18.2 — 43.8士14.1 5.7?55.6 4.34-19.6'. 0,897?0,297 l_002士0.123 l_033士0.068 — 5O.5士3O.9 27.7士19.9 一 3.6士28.0'' 6.17士10.97 2.9士4.9 23士2.6 16.8士23.5 6.8士8.9 84土9.9 — 44.3士6O.9 一 8.4士32.6 5.0士28.9 — 18.9士6O.5 3,1.0士71.6 11.3士28.8 0,877士0,314 1.066士0.179 0.993士0.06,1 — 36.1士47.3 4.9士35.8' 4.6士16.4' 3.0士7.93 0士3.1 1_4士2.9 1O.4士1O.3+ 3.3士7.6 4.7士9.8 — 3l_7士.8 一 4士46.0 0.7士13.0 — 15.5士31.4 46.7土155.9 一 1.4士1Z.1 0,997士0.273 0.920士0.194 0.905士0.096 — 35.5士56.4 10.9士35.4 7.1士27.2 0.64士3.54 — 1.6士36 0.1士2.7 7.4士12.4 一 2.0士6.6 0.7士6.7 注:与模型对照组对比*P<0.05,**尸<0.01;与缺血前相比I+P<0.05,++尸<0.01 2.4对心肌传导变化的影响以记录如表2所示,在缺血再灌注过程中,l~mol/ 电极在缺血再灌注过程不同时刻所记录到的L,5~mol/LI-65对缺血和再灌注引起的心 CT变化差率作为指标,观察各浓度的1—65内膜传导时间的延长无明显性影响;对于缺 对缺血再灌注过程中心肌传导改变的影响.血再灌注过程中的外向跨壁传导时间延长, 2期封卫毅,袁秉样,魏友使等.I一65对豚鼠右心室游离壁醯血再灌注心肌电活动的影响177 I一65组具有对抗作用. 2.5对早后除极(EAD),迟后除极 (DAD)或振荡后电位或(OAP)的影响选 择对RIA发生率有明显性降低作用的 5~mol/LI-65组,对在缺血末至再灌注 10min时的3次记录过程中,可记录到和不 能记录到EAD,DAD或OAP的标本进行总 计.结果表明.EAD,DAD或OAP的发生率 与模型对照组相比显着性减少(P<0.0S). 讨论 I一65为一钙拮抗剂,在正常灌流时.I一65 (1t~mol/L,5.~mol/L)可使豚鼠右心室内外 膜下心肌组织的APD内膜ERP明显性缩 短.但在缺血和再灌注过程中,与模型对照组 相比,I一65能明显性对抗缺血再灌注引起的 心室肌跨壁传导阻滞.可使内膜不应期相对 延长.传导速度的相对加快和内膜不应期的 相对延长,可使处于不应期的组织的空间广 度范围相对增加,从而使异常的传导冲动易 于消除在不应期之中.这些作用都既不利于 折返激动环的形成也不利于折返激动的维 持,从而发挥其抗RIA的作用. 对于在体的心肌梗死和再灌注心脏.改 善跌血区的心肌传导,促进缺血区与非缺血 区之间复极的均一化,则可以减小正常区,边 缘区与缺血区之间的传导和兴奋性的差异, 从而减少折返激动的形成.而发生于这一区 域的折返激动,又被认为是心肌梗死后心律 失常发生的最重要原固.由此推测,消除 折返激动的发生也可能是I一6s发挥其在体 抗RIA作用的重要途径之一. 本次实验也证明,I一65(5.amol/L)明显减 少DAD或OAP的发生,使触发活动产生 RIA的可能性减小.这些作用,可能与其发 挥钙拮抗作用有关.从而也提示,I一6可能是 一 个有潜在临床应用价值的抗缺血再灌注心 律失常药物. 参考文献 1邓秀玲,邱培伦,刘倥田等_[二甲胺基]二苯骈 碘杂六环枸缘酸盐对大鼠心肌缺血再灌注损伤 的保护.中国药理,1993f14(4)#367 2FernerGR.GuyetteCM.Ventricutartachycar— diainanisolatedguineapigventricularfreewalt modelofischemiaandreperfusion.JCardiovasc Pharmaco[,1991:17(2)t238 3Gui—RongLee,FerrlerGR.EffeCtSOfquinidine ODarrhylhmiasandconductioninanisolated tissuemodelofischemiaandreperfusion.JCar— diovasPharmco1.1991'l7(2)t23g 4KramerJB.SaffhzJE,WitkowskiFXeta1.In- tramura[reentryasamechanismofventricular lachycardiaduringevolvingeaalnemyocardial infarclion.CireRes.198S{S6l736 SGaranH,FalIonJT,RosenthalSeta1.Endocar— dial,intramural,andepicardialactivationpat— ternsduringsustainedmonomorphicvenlricular tacyhcaridiain[atecaninemyocardialinfarction. CircReS.1987l60(6)|870 (1998—10—04收稿1998—12—24修回) EFFECTOFI一65ONELECTROPHYSIOLOGICALPROPERTIES INANIS0LATEDVENTRICULARMUSCLEM0DEL0F ISCHEMIAANDREPERFUSION FengWeiyi,YuanBingxiang,WeiYouxiaetal (Dept.ofPharmacy,FirstMedicalcollege) AbstractTransmemhraneelectricalactivitymicroelectrodes.Effectof3,6_dimethami— wasrecordedfromendo—andepicardiumofisolated segmentsofguinapigrighlventricleswithapair dodibenzopyriodoniumcitrateODischemiareper|u— sionarrhylhmlas(下转第198页) 198西安医科大学第20卷 PYmotifintheepithe]ialNachanne1suburuits asatargetsequenceformutationscausingchan— nelactivationfoundinLidd]esyndrome.EMBO J,1996;15t2381,2387 5BuhjenJK,IsomailovII,CornwellTeta1.Lid— desdisease'abnormalregulationofamiloride— sensitiveNachanne]sbyBsubunitmutation. 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Keywords3.6-dimethamidodlbenzopyriodoniumcitrate;ischemiareperfusionarrhythmias1:transmural conduction