[精品]中药制剂复方薏蓝颗粒中黄芪甲苷的含量分析

[精品]中药制剂复方薏蓝颗粒中黄芪甲苷的含量分析 中药制剂复方薏蓝颗粒中黄芪甲苷的含量分析 [摘要] 目的 建立用高效液相色谱法测定复方薏蓝颗粒中黄芪甲苷含量的方法。 方法 采用Inertsil-2(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱;流动相:乙腈-水(1?2.34);检测波 长:205 nm， 结果 黄芪甲苷在1.83,9.21 μg(r = 0.999 8)范围内有良好的线性关系。 平均回收率为97.69%，RSD为1.56%。 结论 本方法操作简便、准确、灵敏度高，可有效地 用于复方薏蓝颗粒的质量控制。 [关键词] 复方薏蓝颗粒;黄芪甲苷;高效液相色谱法;含量分析 [中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)02(c)-0054-02 Analysis of Astragaloside ? in Fufang Yilan Keli of Chinese Medicine CHEN Yihua1 YANG Zhihua2 LIU Zhenfeng2 1.Shantou Hospital of Traditional Chinese Medicine in Guangdong Province, Shantou 515041, China; 2.Shantou Hospital of Skin Disease Prevention and Cure in Guangdong Province, Shantou 515041, China [Abstract] Objective To establish the method of high performance liquid chromatography (HPLC) for analysis of Astragaloside ? in Fufang Yilan Keli. Methods The colum: Inertsil-2 (250 mm×4.6 mm, 5 μm); The mobile phase: Acetonitrile-H2O (1?2.34) (v/v); The detection wavelength: 205 nm. Results The linear range of Astragaloside ? was 1.83-9.21 μg (r = 0.999 8), The average recovery rate was 97.69%, RSD was 1.56%. Conclusion The method is accurate, rapid and sensitive and can be effectually applied to the quality control of Fufang Yilan Keli. [Key words] Fufang Yilan Keli; Astragaloside ?; High performance liquid chromatography (HPLC); Content analysis 复方薏蓝颗粒是汕头市皮肤性病防治院的中药自制颗粒制剂，该颗粒制剂由板蓝根、连 翘、黄芪、黄芩、龙胆草、夏枯草、重楼、紫草、薏苡仁等中药材组成，具有清热除湿、活 血解毒的治疗作用。是本医院临床上用于治疗湿热,毒型引起的带状疱疹、单纯疱疹、湿疣、 扁平疣等症的协定处方之一，疗效确切。为保证该制剂的用药质量，2010年本医院制剂室利 用现有的生产条件优势，积极联合广东一方制药厂的先进生产技术力量进行研制，并申报广 东省药监局审核批准取得医院中药自制制剂注册生产批准文号(粤Z20100090)。由于中药制 剂中的药材成分较复杂，为控制本制剂的内在质量，保证临床用药效果，黄芪甲苷作为制剂 中的主要成分之一，本文参考文献[1-8]采用高效液相色谱法测定制剂中黄芪甲苷的含量，作 为该制剂生产质量的内部控制标准。 1 仪器与试药 1.1 仪器 美国Waters2695高效液相色谱系统，SPD―10Avp紫外可见检测器(日本岛津)，N2000 色谱工作站，MILLIPOKE Smiplicity 185纯水器，Sartorius BP211D 分析天平。 1.2 试药 黄芪甲苷对照品(批号087-8910)购于中国药品生物制品检定所。复方薏蓝颗粒由本医 院制剂室生产的中药制剂，所用药材均为生产用同批药材。 试剂:甲醇为进口色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为AR级。 2 含量测定 2.1 色谱条件 色谱柱:Inertsil―2(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-水(1?2.34);柱温:室温;流速:1.0 mL/min，检测波长:205 nm，灵敏度0.02 AUFS;理论塔版数按黄芪甲苷峰值计为4 550[1-2]。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取一定量的黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1毫升含黄芪甲苷0.920 mg的溶液，即得对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末(过三号筛)5 g，加甲醇50 mL，浸泡过夜，再加入甲醇25 mL，置索氏提取器中，回流提取4 h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水20 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次20、20、15、15 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液提取3次，每次20 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，放冷，加入D101型皂苷类吸附树脂柱(内径1.5 cm，长15.0 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇100 mL洗脱，弃去40%乙醇洗脱液，继续用70%乙醇100 mL洗脱(流速3 mL/min)，收集洗脱液，水浴蒸干，残渣加10 mL甲醇溶解，放冷，加于中性氧化铝柱(100,120目，5 g，内径1.0 cm)上，用甲醇50 mL洗脱，弃去甲醇洗脱液，再用40%甲醇80 mL洗脱(流速为2,3 mL/min)，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇2 mL溶解，然后转移至量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，所得溶液作为供试品溶液。 2.4 阴性对照瓶溶液的制备 取处方中除去黄芪药材的阴性样品，按供试品溶液制剂工艺制备，制得阴性对照品溶液。 2.5 阴性试验 按上述仪器和试验条件，将黄芪甲苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液分别进样测定，结果其他成分在黄芪甲苷出峰处无干扰。 2.6 线性关系考察 精密吸取上述对照品溶液，并适当稀释。按测定时实际配制的对照品溶液浓度分别为0.183、0.378、0.542、0.726、0.922 μm/mL，分别精取10 μL注入液相色谱仪，按上述拟定的色谱条件测定。以黄芪甲苷峰面积积分值对进样量(μg)进行直线回归，得标准曲线:Y = 1.08×10-6 X + 1.25×10-5，r = 0.999 8，表明黄芪甲苷进样量在1.83,9.21 μg范围内有良好的线性关系。 2.7 精密度试验 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 μL，重复进样5次，测得峰面积积分值，结果RSD为0.95%。 2.8 重现性试验 称取同一批的样品5份，依前法制备供试品溶液，按以拟定的样品测定方法分别测定，结果测得黄芪甲苷含量平均值为0.156 7 mg/g，RSD为2.22%。 2.9 加样品回收率试验 称取已知含量的黄芪甲苷样品颗粒研细，精密称取2.5 g，共5份，分别加入一定量的黄芪甲苷对照品，按上述的样品溶液制备方法制备，并进样测定，计算回收率，结果见表1。 2.10 样品含量测定 取5个不同批号的样品颗粒，按上法制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与样品供试液各20 μL，按上述色谱条件测定。5批样品中黄芪甲苷的含量测定结果见表2。 3 讨论 3.1 复方薏蓝颗粒样品中黄芪甲苷成分含量提取方法的选择 在实验的过程中，比较了甲醇超声提取法、热回流提取3次和索氏提取法，从预试验得结果表明，采用索氏提取法得到的供试品溶液中测得有效成分的含量最高，效果最佳。 3.2 复方薏蓝颗粒样品中黄芪甲苷成分纯化方法的优化 根据黄芪甲苷成分的理化性质，以碱水饱和的正丁醇溶液萃取能够除去样品中的大量酸性成分，采用D101型皂苷类树脂柱吸附法除去大量糖类等水溶性杂质，最后采用中性氧化铝柱以除去色素及其他杂质。 3.3 复方薏蓝颗粒样品中黄芪甲苷含量测定方法的精选 中药复方制剂中黄芪甲苷含量的测定方法多数采用薄层扫描法，但由于本颗粒剂还含有黄芩、龙胆草等多种皂苷类成分的中药，在采用该方法时，由于薄层色谱干扰严重，分离度下降，而难以应用。因此选择采用HPLC法，结果表明，HPLC法具有快速、高效、准确的特点，适合于本制剂中黄芪甲苷成分的含量测定。 [参考文献] [1] 中华人民共和国药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药科技出版社，2010:283-284，附录36，781-782. [2] 姚志凌，冯欣煜. 高效液相色谱仪合蒸发光散射检测器法测定固本克糖胶囊中黄芪甲苷含量的研究[J]. 中医学报，2011，26(9):1072-1073. [3] 涂波，汪志勇. 当归补血汤颗粒中黄芪甲苷和黄芪多糖的含量测定[J]. 中国实验方剂学杂志，2011，17(18)115-117. [4] 杨志华，陈德梅. 健肾胶囊中黄芪甲苷的含量测定[J]. 江西中医学院学报，2006，18(2):40-41. [5] 高学敏. 中药学[M]. 北京:中国中医药出版社，2010:428-429. [6] 卫莹芳. 中药鉴定学[M]. 上海:上海科学技术出版社，2010:122-125. [7] 苗明三. 现代实用中药质量控制技术[M]. 北京:人民卫生出版社，2002:890. [8] 陈发奎. 常用中草药有效成分含量测定[M]. 北京:人民卫生出版社，1997:620. (收稿日期:2012-01-10)