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芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用

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芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用 芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的 保护作用 中西医结合心脑血管病杂志2007年95卷第9期821? 论着 芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用D 壬宗仁,李军昌,王文,王跃民,龙锢,赵燕玲 摘要:目的观察芪丹通脉片预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的影响.方法雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组 (A组),缺血再灌注模型组(B组),芪丹通脉片加缺血再灌注I组(C组),芪四通脉;q-加缺血再灌注U组(D组).大鼠麻醉开胸结 扎冠状动脉前降支40rain,再...
芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用
芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用 芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的 保护作用 中西医结合心脑血管病杂志2007年95卷第9期821? 论着 芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用D 壬宗仁,李军昌,王文,王跃民,龙锢,赵燕玲 摘要:目的观察芪丹通脉片预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的影响.方法雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组 (A组),缺血再灌注模型组(B组),芪丹通脉片加缺血再灌注I组(C组),芪四通脉;q-加缺血再灌注U组(D组).大鼠麻醉开胸结 扎冠状动脉前降支40rain,再灌注4h.采用Evan'sBI,i<2和下T?染色测定心肌梗死范围,并F1JNEL法测定大鼠心肌组织的细胞 凋亡,检测血清中肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白I(c'I'nI)的水平结果不同剂量(1.08g/kg,3.24g/kg)芪丹通脉片预处理组,缺血/ 再灌注后心肌梗死面积和凋亡指数显着小于模型组(P<0.05或P<0.0L);与假手术组比较,缺3~.//再灌注4h后B组大鼠血清CK 和cTnI有统计学意义(P<0.05或尸<O.0I);而不同剂量芪丹通脉片预处理组再灌注后血清CK和crrnI含量明显降低,与B组 比较有统计学意义(P<0.05或P<001)结论芪丹迫脉片预处理能够有效地抑制缺血,再灌注所致犬鼠心肌损伤. 关键词:芪丹通脉片;再灌注损伤;心肌;细胞凋亡;大鼠 中图分类号:R542.2R285.6文献标识码:A文章编号:1672—1349(2007)09—082I一03 EffectofQidantongmaiTabletOllMyocardialIschelnia._——ReperfusionInjuryinRats WangZongren,LiJunchang,WangWen,elal DepartmentoftheTraditionalChineseMedicine,XijingHospital,TheFoulthMilitaryUnive rsity(Xi'an710032) Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofQidanongmaitablet(QDTMT)onmyocardialischemiainjI】ryinrats.Methods MaleSprague— Dawleyratsweredividedrandomlyinto4groups:Shamgroup,ischelnia/repelfusion(controlgroup),Qr不MT—I(1.08 g/kg)treatmentgroupandQcrrMT一 1I(3.24g/kg)treatmentgroup.Theratswereanesthetizedandthenfollowedby40rainofmy— oeardialischemiaand4hreperfusion.Theprotectiveeffectof(1"MTw&sasscasedby,theinfactsizebyEvans'Blueand1riphenYlte, trazoliumchloridestaining.ThecardiomyocyteapoptosisV~8SdeterlninedbyTUNELmethodandthelevelofcreatinekinase(CK)andcar. diactmponinI(cTnI)inserum.ResultsFollo,abagpretreatmentwithQrMTatdifferentdoses,theratioofinfarctsize,areaatrisk andcardiomyocyteapoptosisindexesreducedandtheywe,resignificantlysmallerthanthatincontrol(P<0.05orP<0.01).Thelevelsof CKandTnIincontrolweresignificantlyhigherthanthatinshalngroup.TilelevdsofLKirlgroupsI玎Mrtrcalmentatckxses1.08gAgor 3.24g/kgweresignificantlylowerthanthatincomrol(I'<0.05orP<0.01).ConclusionPretreatmentwithQI不MTcouldprotect heartagainstischemiareperfusioninjury Keywords:Qidantongmaitablet;reperfusioninjury;myocardium;cellapoptosis;rat 急性心肌梗死后应用溶栓术,经皮冠状动脉血管成形术等 方法快速恢复冠状动脉血流的再灌注策略对于挽救可用性心肌 是必要的_1J.然而,再灌注可引起心肌损伤加重,心肌细胞的进 一 步丢失和功能恢复障碍_2J,缺血/再灌注损伤(ischemiareper— fusioninjury,I/1R)是医学面临的新临床问题.细胞凋是再灌 注中心肌细胞丢失,心功能恢复障碍的病理机制之.抑制细 胞凋亡被证明能够有效抑制再灌注损伤的重要策略Y3.益气活 血复方芪丹通脉片具有益气活血,化瘀通脉的功效(专不0号: 2006100419006),用于防治缺血性心脏病能够保护心肌l4. 但其对于缺血/再灌注心肌损伤的影响还不清楚.本研究制备 了缺血/再灌注大鼠心肌损伤模型,观察不同剂量的苠坩通脉片 对缺血/再灌注心肌梗死范围,心肌细胞凋亡以及血清中心肌损 伤标志物的影响. 1材料与方法 1.1实验材料健康成年雄性sL)大鼠24只,260g:20g,第 四军医大学动物中心提供,合格证号:200505. 1.2药品和主要试剂芪丹通脉片(Qi{!a~tonDtt~blet, QDTMT)提取浸膏干粉(黄芪30g,丹参30g,当归15g,红花 1)为全军医药卫生科研重大临床专项课题基金项日(200619001) 30g,桂枝l0g.每克f粉含生药2.862g.以生理盐水配制成 混悬液324g/i,第军医大学利研药厂提供);TUNEL试剂盒 为Roche公司产品. 1.3实验将大鼠随机分为4组,每组6只,假手术组(A 组),动物开胸,冠状动脉下穿线但不结扎;缺血再灌注模型组 (MI/R,B组);芪丹通脉片处理加缺血再灌注I组(QDTM2一 I,c组);芪丹通脉片处理加缺血再灌注u组(QDTMT—II,D 组). A组和B组给予生理盐水10mI/(?d)灌胃,C组和D组 分别给予浸膏混悬液108gag和3.9_4gag灌胃10rc~/(kg?d), 均连续灌胃6d.第7天.灌胃完成30min后进行造模. 1.4心肌缺血再灌注模型制备参考文献[6]的方法. 1.5心肌梗死范围的测定实验结束时,重新结扎包绕在冠状 动脉左降支的丝线,经领动脉快速注人10g/LEvan's兰(2 n)染色区分缺血区(areaatrisk,AR)和非缺血区(显示为监 色)通过Optimax图像处理软件进行分析,并计算梗死面积 (infarctsize)与缺血区面积(areaatrisk,AAR)的比值(%, IS/AAR). ? 822?CHINESEJCKFIZ\iM()FINFE(;RATIVEMEDICINEON(眦)l()/CEREBRO\As 【,uRDISEASESeptember2007Vo1.蔓二_No.9 1.6TUNEL法测定心肌细胞凋亡应用TUNEL凋亡检测 试剂盒严格按照原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)说明书进行操 作检测前对石蜡切片进行微波修复以标记前用DNA酶处 理切片做阳性对照;在染色过程中用PBS代替TdT反应液,其 余同说明书操作,作为阴性对照 1.7肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白l(cq,n1)的测定实验结束时 由颈动脉采血,室温静置30min,3000r/rain离心15min,取上 清,一20?存放待测.采用微粒子化学发光法由Beckman CoulterAccessII全自动免疫分析仪及其套餐试剂盒测定cTnl; 全自动生化分析仪测定血清中的CK. 1.8统计学处理数据以均数?差(i?s)示,应用 SPSS10.0软件进行数据统计,同组前后使用配埘t检验,组问 比较应用方差分析.P<0.05为有统计学意义. 2结果 2.1芪丹通脉片对缺血/再灌注大鼠心肌梗死面积的影响缺 血/冉灌注后的心脏经Evan's兰染色后,染色的缺血区呈砖红 色,而梗死区为灰白色.B组心肌梗死面积占缺血区的49.1%? 10.3%,C组,D组心肌梗死面积分别为36.7%?8.9%和 28.8%?8.4%,与B组比较均有统计学意义(P<0.05或P< 0.01). 2.2芪丹通脉片对缺血/冉灌注大鼠心肌细胞捌亡的影响 TUNEL染色结果显示,凋亡心肌细胞核缩小,染色不均,细胞 核被明显染成棕红色.B组心肌细胞凋亡指数为2I.34.2,(' 组,D组为14.3?3.8和10.6?2.0,与B组比较,芪丹通脉片能 够减少心肌细胞的凋亡指数(尸<0.05或P<0.01). 2.3芪丹通脉片对缺血厂冉灌注损伤大鼠血清CK和cTnl影 响再灌注4h后B组血清CK和din1分别为l2801.84u/1? 4102.70U/L和64.89ng/m1?13.03ng/mL,与A组 (1552.83U/L?451.07U/L和1.40ng/mL?0.64ng/mL)比较 有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而不同剂量芪丹通脉片 处理组再灌注后血清中CK和cTnl的含量分别为10017.17 U/L?3345.46U/L与6973.50U/111778.40U/L和 47.23ng/mL?12.76ng/mL与35.13ng/mL114.42ng/mL, 与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01) 3讨论 缺血性心脏病的病理改变是缺血心肌细胞因缺氧而坏死或 凋亡,尽早恢复血液灌流是治疗缺血性心脏病的首要然 而,再灌注损伤成为病人从缺血后复流获益的最大障碍.通 过包括预处理和后处理等措施能够抑制缺血/冉灌注所致的心 肌损伤J.然而,在临床应用时,预处理和后处理均需准确预见 到缺血或再灌注发生的时问;需要准确控制短暂问歇性循环缺 血一再灌注实施的时问;机械刺激的方式力度的掌握均影响保 护效应.这些固有的缺陷给应用上述两种机械方式获得保护心 肌的作用带来困难.因此发现模拟其作用的药物对于临床抑制 再灌注后心肌的损伤有重要意义s. 凋亡是导致缺血/再灌注损伤,心肌细胞丢失的重要病理形 式之一l3.虽然缺血和再灌注过程与心肌细胞凋亡发生的相关 性还存在争论』,但三磷酸腺苷(ATP)在缺血期的缺少和再灌 注期间恢复的变化特点与凋亡的能量依赖特征为再灌注中凋亡 的存在提供了直接证据一:尽管再灌注导致心肌细胞凋亡的机 制尚不清楚,但大量实验研究结果显示:通过预处理或后处理策 略减少再灌注心肌细胞的凋亡能有助于心肌功能恢复3J.CK 作为心肌受损的重要指标,动态监测CK的水平,并计算CK时 间下的面积能够反映再灌注后心肌损伤的程度,临床应用该面 积作为评价再灌注成功与否的指标l1.?cTnI是反映心肌损伤 的敏感血清学指标,也是反映心肌损伤的特异性指标_1. 芪丹通脉片主要成分为黄芪,丹参,红花,当归,桂枝等.方 中黄芪,丹参配伍益气活血,化瘀而不耗气伤血,共为君药,当 归,红花为臣,补血活血,桂枝为佐使药,辛温通阳,疏通脉络,并 兼引诸药归于心经之力.诸药配伍,具有益气活血,化瘀通脉的 功效既住有研究表明其可增加血清中内皮生长因子的表 达一31在本实验中,药物连续灌胃7d后,应用结扎大鼠冠状 动脉左降支制备急性I/R1模型,研究发现,染色后不同组心肌 中出现蓝色,红色和灰白色的区域,模型制备成功.而不同剂量 的芪丹通脉片组均能够使缺血(40min)/再灌注(4h)所致的心 肌梗死范围减小,并能够降低再灌注后心肌细胞的凋亡指数,与 对照组均有统计学意义(P<0.05或P<001).研究中发现芪 丹通脉片能够抑制缺血/再灌注所致的大鼠血清CK和cTnI增 高,表明芪丹通脉片能够抑制了缺血/再灌注对大鼠心肌的损伤 程度因此,苠丹通脉片能够提高心肌细胞对再灌注损伤的耐 受能力,抑制再灌注所致的心肌细胞凋亡和心肌组织的破坏. 其机制有待进一步研究 参考文献: [1vanDomburgRT.SonI1enscheinK,uwlaatR,ela1.Sustained benefit20yearsafterreperfusiontherapyinacutetherapyinacute myocardialinfarcfion[J]JAm(2ollCardiol,2005,46:15—20. 2(;rossGJ,AuchampachJA.Reperfusicminjury:【itexist[J].J MolCellCardiol,2007.42(1):12—18 [3ZhaoZQ,MorrisCD,BuddeJM,eta1.Inhibitionofmyocardial apoptosisreducesinfarctsizeandimprovesregionalcontractiledys— functionduringreperfusion[J].Cardiov~scRes,2003,59(1):132— 142. 4行利,马静,王宗仁,等蓖丹通脉片对大鼠急性心肌缺血损伤的影 响Jj.第四军医大学,2003,24(5,:415—417. 5李晶华,王宗仁,肖铁卉,等芪丹通脉片对急性心肌缺血犬血清 NO和血浆ET水平的影响J].安徽中医学院,2002,21(1): 3949. 16严晓红.汪长华.心肌缺血/再灌注损伤模型的制备[M]//朱妙 章.袁文俊,吴博威,等.心血管生理学与临床.北京:高等教育出版 社,2004:633—635. [7jYellonDM,Hausenloy.Realizingtheclinicali~tentialofischemicpre— conditioningandpostconditioning[J.NatCtinPractCardiovasc Med,2005,2(I1):568—575 l8]GrossER,GrossGJLigandtriggersclassicalpreconditioningand p.st?ndt;0njngJCaMiovascRes,2006,70:212—221. [91TaimorG,Lorenz.H,HofstaetterB,eta1.Inductionofnecrosisbut tlOtapoptosisafteranoxiaandrcoxygenationinisolatedadultcar— diomyocytesofrat[J:Cardiova~Res,1999,41(1):147—156, [10:李晶华王宗仁,邵中军,等.琵丹通脉片对实验性急性心肌梗死 夫鼠心肌的保护作用及其分子机制[J],中国临床康复,2004,8 (9):17061707, [11王宗仁,马静,芪丹通脉片对大鼠心肌线柱体损伤的保护作用 J].第四军医大学,2003,24(5):400—402. 112iRossAM,GibbonsRJ,StoneGW,eta1.Arandomized.double— 中西医结合心脑血管病杂志2007年9月第5卷第9期?823? blinded.placebo—controlledmulticentertrialofadenosineasanad— uncttoreperfusioninthetreatmentofacutemyocardialinfarction (AM1STAD11)JjJAn1CollCardiol,2005,45:17751780 l13JGuarracinoF,LandoniG,TritapepeL,etalMyocardialdamage preventedbyvolatileanesthetics:Anmlticenterrandomizedcontrolled studylJJJCardiothoracVaseAnesth,2006,20(4):477,483. 作者简介:王宗仁(195l一),男,教授,主任医师,博士生导师,现工作于 中国人民解放军第四军医大学第一附属医院(邮编:710032);李军昌,王 文,王跃民,龙铟,赵燕玲,工作于中国人民解放军第四军医大学第一附 属医院 (收稿日期:200706l1) (本文编辑王雅洁) 益气活血解毒汤对实验性动脉粥样硬化家兔 血脂,前列环素及血栓素A2的影响D 李忠志,杨明,孙薇,胡业彬 摘要:目的通过高脂饲料喂饲诱发动脉粥样硬化家兔模型,探讨中药复方益气活血解毒汤对家兔动脉粥样硬化的干预作用及 其作用机制.方法24只日本雄性大耳白兔随机分为4组,分别为空白对照组,模型对照组,益气活血解毒汤组及辛伐他汀组.l0 周后测定各组血清总胆固醇(TC),三酰甘油(T(),高密度脂蛋白胆固醇(HI)IC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL—c),血栓素B) (TxEj2),6一酮一前列腺素(6一ketoPGFI【J)的含量.结果模型对照组TC,TG,LDI一C,较空白对照组有不同程度升高 (P<0.05或P<0,01),6一keto—PGF1及H)I一C显着下降(P<0.05).益气活血解毒汤组及辛伐他汀组1?,TG,H)L—C及I 均低于模型对照组,6一keto—PGF1及HDIC升高明显(P<0.()1),益气活血解毒汤组HDL—C与辛伐他汀组比较有所升高 (P<0.05):结论益气活血解毒汤对家兔动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,调节血脂,维持PGI,/'I,XA2的平衡可能是其 作用机制之一. 关键词:动脉粥样硬化;益气活血解毒汤;血脂;6一酮一前列腺素;血栓素 中图分类号:R541.4R285.5文献标识码:A文章编号:16721349(2007)09—0823—02 EffectsofYiqihuoxuejieduDecoctiononSerumLipid,PGI2andT?2inRabbitswithExperimentalAtherosclerosis LiZhongzhi,YangMing,Sun?,ei,n DepartmentofMedicine,FirstAffiliatedHospital,AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Anhui(Hefei230031) Abstract:0bjectiveTostudytheeffectofYiqihuoxuejieduDecoctiononrabbitswithatherosclerosis.MethodsTwenty—four Japanesewhiterabbitsweredividedrandomlyintofourgroups:Controlgroup,modelgroup,Yiqihuoxuejiedudecoctiongroupandsimvas taingroup.Aftertellweeks,theconcentrationoftotalcholesterol(TC),triglyceride(TG),highdensitylilmproteincholesterol(HDL—C), lowdensitylipoproteincholesterol(LDL—C),6一 ketoPGF1andTXB2weremeasured.ResultsComparedwiththecontrolgroup,the levelof1,C,TG,}{1)L—C,LDL—CandI'Xt~increased(P<0.05orP<0.01)6一keto —PGF1.,卜匝)L—Cdeceasedsignificantly(P< 0.01)inmodelsgroup.Con~paredwiththemodelgroup,theconcentrationof,】,,1,LDL— CandTXB2deceasedand6一keto—pGFI. andHDL— Cincreasedobviously(P<0.01)inYiqihuoxuejiedudecoctiongroupandSimvastaingroup.Comparedwiththesimvastain group,thelevelofHDL— CincreasedinYiqihuoxuejiedudecoction(P<0.05).ConclusionYiqihuoxuejiedudecoctionwaseffectivefor treatmentandpreventionofatherosclerosis.1tmightberelatedtoregulatetheserulnlipidandPGI,/TXA2. Keywords:athercxsclerosis;Yiqihu()xuejiedudecoction;sermnlipid;6一keto— PGF1o;T 动脉粥样硬化(atherosclercxsis,AS)是以血管平滑肌细胞增 殖及富含脂质的巨嗜细胞聚集为特征的多因素过程.AS的 病因多样,发病机制复杂.本实验通过高脂饲料复制家兔动脉 粥样硬化模型,观察益气活血解毒汤对AS家兔血脂,6酮 前列腺素(6一keto—PGF1.)及血栓素B2(Tx)的影响,探讨其 抗AS的作用机制. 1材料与方法 1.1动物健康日本雄性大耳白兔24只,体重2.0kg土0.2 kg,(4,6)月龄,购自安徽医科大学实验动物中心 1.2药物益气活血解毒汤由安徽省中医院煎药室煎制,每袋 200mL,真空包装;辛伐他汀每片40mg(杭州默沙东公司提供, 批准文号:J20040032) 1.3主要试剂血脂检测试剂盒由浙江东瓯生物有限公 司提供.6keto—PGF1及TXB2放射免疫试剂盒由北京普尔 1)为安徽省教育厅自然科学基金项目(No2006KJ340B) 伟业生物科技有限公司提供,批准文号分别为国药准字 S109502l6,S10950213. 1.4主要仪器OLYMPUSAU一4()(】全自动生化分析仪(日 本),80—2离心沉定器(上海手术器械厂),HH—S水浴锅(郑州 长城科工贸有限公司),DFM一96型16管放免7计数器(上海 原子核研究日环仪器厂). 1.5动物模型复制与分组将动物随机分为4组,每组6只. 分别为空白对照组,模型对照组,益气活血解毒汤组,辛伐他汀 组.喂饲高脂饲料(1%胆固醇,5%猪油,94%基础饲料)复制 AS动物模型_2.,复制期为10周其中益气活血解毒汤组及辛 伐他汀组边造模边给药,前两组以等量生理盐水灌胃,动物在适 应性喂养1周后,空白对照组喂饲普通饲料;模型对照组,益气 活血解毒汤组以及辛伐他汀组喂饲高脂饲料,每日每只50g;按 人与动物问体表面积折算的等效剂量比值,模型对照组每只家
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