芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用
芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的
保护作用
中西医结合心脑血管病杂志2007年95卷第9期821?
论着
芪丹通脉片对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用D
壬宗仁,李军昌,王文,王跃民,龙锢,赵燕玲
摘要:目的观察芪丹通脉片预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞损伤的影响.方法雄性SD大鼠随机分为4组,即假手术组
(A组),缺血再灌注模型组(B组),芪丹通脉片加缺血再灌注I组(C组),芪四通脉;q-加缺血再灌注U组(D组).大鼠麻醉开胸结
扎冠状动脉前降支40rain,再灌注4h.采用Evan'sBI,i<2和下T?染色测定心肌梗死范围,并F1JNEL法测定大鼠心肌组织的细胞
凋亡,检测血清中肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白I(c'I'nI)的水平结果不同剂量(1.08g/kg,3.24g/kg)芪丹通脉片预处理组,缺血/
再灌注后心肌梗死面积和凋亡指数显着小于模型组(P<0.05或P<0.0L);与假手术组比较,缺3~.//再灌注4h后B组大鼠血清CK
和cTnI有统计学意义(P<0.05或尸<O.0I);而不同剂量芪丹通脉片预处理组再灌注后血清CK和crrnI含量明显降低,与B组
比较有统计学意义(P<0.05或P<001)结论芪丹迫脉片预处理能够有效地抑制缺血,再灌注所致犬鼠心肌损伤.
关键词:芪丹通脉片;再灌注损伤;心肌;细胞凋亡;大鼠
中图分类号:R542.2R285.6文献标识码:A文章编号:1672—1349(2007)09—082I一03
EffectofQidantongmaiTabletOllMyocardialIschelnia._——ReperfusionInjuryinRats
WangZongren,LiJunchang,WangWen,elal DepartmentoftheTraditionalChineseMedicine,XijingHospital,TheFoulthMilitaryUnive
rsity(Xi'an710032)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofQidanongmaitablet(QDTMT)onmyocardialischemiainjI】ryinrats.Methods
MaleSprague—
Dawleyratsweredividedrandomlyinto4groups:Shamgroup,ischelnia/repelfusion(controlgroup),Qr不MT—I(1.08
g/kg)treatmentgroupandQcrrMT一
1I(3.24g/kg)treatmentgroup.Theratswereanesthetizedandthenfollowedby40rainofmy—
oeardialischemiaand4hreperfusion.Theprotectiveeffectof(1"MTw&sasscasedby,theinfactsizebyEvans'Blueand1riphenYlte,
trazoliumchloridestaining.ThecardiomyocyteapoptosisV~8SdeterlninedbyTUNELmethodandthelevelofcreatinekinase(CK)andcar.
diactmponinI(cTnI)inserum.ResultsFollo,abagpretreatmentwithQrMTatdifferentdoses,theratioofinfarctsize,areaatrisk
andcardiomyocyteapoptosisindexesreducedandtheywe,resignificantlysmallerthanthatincontrol(P<0.05orP<0.01).Thelevelsof
CKandTnIincontrolweresignificantlyhigherthanthatinshalngroup.TilelevdsofLKirlgroupsI玎Mrtrcalmentatckxses1.08gAgor
3.24g/kgweresignificantlylowerthanthatincomrol(I'<0.05orP<0.01).ConclusionPretreatmentwithQI不MTcouldprotect
heartagainstischemiareperfusioninjury
Keywords:Qidantongmaitablet;reperfusioninjury;myocardium;cellapoptosis;rat 急性心肌梗死后应用溶栓术,经皮冠状动脉血管成形术等
方法快速恢复冠状动脉血流的再灌注策略对于挽救可用性心肌
是必要的_1J.然而,再灌注可引起心肌损伤加重,心肌细胞的进
一
步丢失和功能恢复障碍_2J,缺血/再灌注损伤(ischemiareper—
fusioninjury,I/1R)是医学面临的新临床问题.细胞凋是再灌
注中心肌细胞丢失,心功能恢复障碍的病理机制之.抑制细
胞凋亡被证明能够有效抑制再灌注损伤的重要策略Y3.益气活 血复方芪丹通脉片具有益气活血,化瘀通脉的功效(专不0号: 2006100419006),用于防治缺血性心脏病能够保护心肌l4. 但其对于缺血/再灌注心肌损伤的影响还不清楚.本研究制备 了缺血/再灌注大鼠心肌损伤模型,观察不同剂量的苠坩通脉片 对缺血/再灌注心肌梗死范围,心肌细胞凋亡以及血清中心肌损 伤标志物的影响.
1材料与方法
1.1实验材料健康成年雄性sL)大鼠24只,260g:20g,第 四军医大学动物中心提供,合格证号:200505. 1.2药品和主要试剂芪丹通脉片(Qi{!a~tonDtt~blet,
QDTMT)提取浸膏干粉(黄芪30g,丹参30g,当归15g,红花 1)为全军医药卫生科研重大临床专项课题基金项日(200619001)
30g,桂枝l0g.每克f粉含生药2.862g.以生理盐水配制成 混悬液324g/i,第军医大学利研药厂提供);TUNEL试剂盒 为Roche公司产品.
1.3实验
将大鼠随机分为4组,每组6只,假手术组(A 组),动物开胸,冠状动脉下穿线但不结扎;缺血再灌注模型组 (MI/R,B组);芪丹通脉片处理加缺血再灌注I组(QDTM2一 I,c组);芪丹通脉片处理加缺血再灌注u组(QDTMT—II,D 组).
A组和B组给予生理盐水10mI/(?d)灌胃,C组和D组 分别给予浸膏混悬液108gag和3.9_4gag灌胃10rc~/(kg?d),
均连续灌胃6d.第7天.灌胃完成30min后进行造模. 1.4心肌缺血再灌注模型制备参考文献[6]的方法. 1.5心肌梗死范围的测定实验结束时,重新结扎包绕在冠状 动脉左降支的丝线,经领动脉快速注人10g/LEvan's兰(2 n)染色区分缺血区(areaatrisk,AR)和非缺血区(显示为监 色)通过Optimax图像处理软件进行分析,并计算梗死面积
(infarctsize)与缺血区面积(areaatrisk,AAR)的比值(%, IS/AAR).
?
822?CHINESEJCKFIZ\iM()FINFE(;RATIVEMEDICINEON(眦)l()/CEREBRO\As
【,uRDISEASESeptember2007Vo1.蔓二_No.9 1.6TUNEL法测定心肌细胞凋亡应用TUNEL凋亡检测 试剂盒严格按照原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)说明书进行操 作检测前对石蜡切片进行微波修复以标记前用DNA酶处 理切片做阳性对照;在染色过程中用PBS代替TdT反应液,其 余同说明书操作,作为阴性对照
1.7肌酸激酶(CK)和肌钙蛋白l(cq,n1)的测定实验结束时 由颈动脉采血,室温静置30min,3000r/rain离心15min,取上 清,一20?存放待测.采用微粒子化学发光法由Beckman CoulterAccessII全自动免疫分析仪及其套餐试剂盒测定cTnl; 全自动生化分析仪测定血清中的CK.
1.8统计学处理数据以均数?
差(i?s)
示,应用 SPSS10.0软件进行数据统计,同组前后使用配埘t检验,组问 比较应用方差分析.P<0.05为有统计学意义.
2结果
2.1芪丹通脉片对缺血/再灌注大鼠心肌梗死面积的影响缺 血/冉灌注后的心脏经Evan's兰染色后,染色的缺血区呈砖红 色,而梗死区为灰白色.B组心肌梗死面积占缺血区的49.1%? 10.3%,C组,D组心肌梗死面积分别为36.7%?8.9%和 28.8%?8.4%,与B组比较均有统计学意义(P<0.05或P< 0.01).
2.2芪丹通脉片对缺血/冉灌注大鼠心肌细胞捌亡的影响 TUNEL染色结果显示,凋亡心肌细胞核缩小,染色不均,细胞 核被明显染成棕红色.B组心肌细胞凋亡指数为2I.34.2,('
组,D组为14.3?3.8和10.6?2.0,与B组比较,芪丹通脉片能 够减少心肌细胞的凋亡指数(尸<0.05或P<0.01). 2.3芪丹通脉片对缺血厂冉灌注损伤大鼠血清CK和cTnl影 响再灌注4h后B组血清CK和din1分别为l2801.84u/1? 4102.70U/L和64.89ng/m1?13.03ng/mL,与A组
(1552.83U/L?451.07U/L和1.40ng/mL?0.64ng/mL)比较 有统计学意义(P<0.05或P<0.01);而不同剂量芪丹通脉片 处理组再灌注后血清中CK和cTnl的含量分别为10017.17 U/L?3345.46U/L与6973.50U/111778.40U/L和
47.23ng/mL?12.76ng/mL与35.13ng/mL114.42ng/mL,
与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01) 3讨论
缺血性心脏病的病理改变是缺血心肌细胞因缺氧而坏死或 凋亡,尽早恢复血液灌流是治疗缺血性心脏病的首要
然 而,再灌注损伤成为病人从缺血后复流获益的最大障碍.通 过包括预处理和后处理等措施能够抑制缺血/冉灌注所致的心 肌损伤J.然而,在临床应用时,预处理和后处理均需准确预见 到缺血或再灌注发生的时问;需要准确控制短暂问歇性循环缺 血一再灌注实施的时问;机械刺激的方式力度的掌握均影响保 护效应.这些固有的缺陷给应用上述两种机械方式获得保护心 肌的作用带来困难.因此发现模拟其作用的药物对于临床抑制 再灌注后心肌的损伤有重要意义s.
凋亡是导致缺血/再灌注损伤,心肌细胞丢失的重要病理形 式之一l3.虽然缺血和再灌注过程与心肌细胞凋亡发生的相关 性还存在争论』,但三磷酸腺苷(ATP)在缺血期的缺少和再灌 注期间恢复的变化特点与凋亡的能量依赖特征为再灌注中凋亡 的存在提供了直接证据一:尽管再灌注导致心肌细胞凋亡的机 制尚不清楚,但大量实验研究结果显示:通过预处理或后处理策 略减少再灌注心肌细胞的凋亡能有助于心肌功能恢复3J.CK
作为心肌受损的重要指标,动态监测CK的水平,并计算CK时 间下的面积能够反映再灌注后心肌损伤的程度,临床应用该面 积作为评价再灌注成功与否的指标l1.?cTnI是反映心肌损伤 的敏感血清学指标,也是反映心肌损伤的特异性指标_1. 芪丹通脉片主要成分为黄芪,丹参,红花,当归,桂枝等.方 中黄芪,丹参配伍益气活血,化瘀而不耗气伤血,共为君药,当 归,红花为臣,补血活血,桂枝为佐使药,辛温通阳,疏通脉络,并 兼引诸药归于心经之力.诸药配伍,具有益气活血,化瘀通脉的 功效既住有研究表明其可增加血清中内皮生长因子的表 达一31在本实验中,药物连续灌胃7d后,应用结扎大鼠冠状 动脉左降支制备急性I/R1模型,研究发现,染色后不同组心肌 中出现蓝色,红色和灰白色的区域,模型制备成功.而不同剂量 的芪丹通脉片组均能够使缺血(40min)/再灌注(4h)所致的心 肌梗死范围减小,并能够降低再灌注后心肌细胞的凋亡指数,与 对照组均有统计学意义(P<0.05或P<001).研究中发现芪 丹通脉片能够抑制缺血/再灌注所致的大鼠血清CK和cTnI增 高,表明芪丹通脉片能够抑制了缺血/再灌注对大鼠心肌的损伤 程度因此,苠丹通脉片能够提高心肌细胞对再灌注损伤的耐 受能力,抑制再灌注所致的心肌细胞凋亡和心肌组织的破坏. 其机制有待进一步研究
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中西医结合心脑血管病杂志2007年9月第5卷第9期?823?
blinded.placebo—controlledmulticentertrialofadenosineasanad—
uncttoreperfusioninthetreatmentofacutemyocardialinfarction (AM1STAD11)JjJAn1CollCardiol,2005,45:17751780 l13JGuarracinoF,LandoniG,TritapepeL,etalMyocardialdamage preventedbyvolatileanesthetics:Anmlticenterrandomizedcontrolled
studylJJJCardiothoracVaseAnesth,2006,20(4):477,483.
作者简介:王宗仁(195l一),男,教授,主任医师,博士生导师,现工作于 中国人民解放军第四军医大学第一附属医院(邮编:710032);李军昌,王 文,王跃民,龙铟,赵燕玲,工作于中国人民解放军第四军医大学第一附 属医院
(收稿日期:200706l1)
(本文编辑王雅洁)
益气活血解毒汤对实验性动脉粥样硬化家兔
血脂,前列环素及血栓素A2的影响D
李忠志,杨明,孙薇,胡业彬
摘要:目的通过高脂饲料喂饲诱发动脉粥样硬化家兔模型,探讨中药复方益气活血解毒汤对家兔动脉粥样硬化的干预作用及
其作用机制.方法24只日本雄性大耳白兔随机分为4组,分别为空白对照组,模型对照组,益气活血解毒汤组及辛伐他汀组.l0
周后测定各组血清总胆固醇(TC),三酰甘油(T(),高密度脂蛋白胆固醇(HI)IC),低密度脂蛋白胆固醇(LDL—c),血栓素B)
(TxEj2),6一酮一前列腺素(6一ketoPGFI【J)的含量.结果模型对照组TC,TG,LDI一C,较空白对照组有不同程度升高
(P<0.05或P<0,01),6一keto—PGF1及H)I一C显着下降(P<0.05).益气活血解毒汤组及辛伐他汀组1?,TG,H)L—C及I
均低于模型对照组,6一keto—PGF1及HDIC升高明显(P<0.()1),益气活血解毒汤组HDL—C与辛伐他汀组比较有所升高
(P<0.05):结论益气活血解毒汤对家兔动脉粥样硬化有明显的预防和治疗作用,调节血脂,维持PGI,/'I,XA2的平衡可能是其
作用机制之一.
关键词:动脉粥样硬化;益气活血解毒汤;血脂;6一酮一前列腺素;血栓素 中图分类号:R541.4R285.5文献标识码:A文章编号:16721349(2007)09—0823—02 EffectsofYiqihuoxuejieduDecoctiononSerumLipid,PGI2andT?2inRabbitswithExperimentalAtherosclerosis
LiZhongzhi,YangMing,Sun?,ei,n
DepartmentofMedicine,FirstAffiliatedHospital,AnhuiCollegeofTraditionalChineseMedicine,Anhui(Hefei230031)
Abstract:0bjectiveTostudytheeffectofYiqihuoxuejieduDecoctiononrabbitswithatherosclerosis.MethodsTwenty—four
Japanesewhiterabbitsweredividedrandomlyintofourgroups:Controlgroup,modelgroup,Yiqihuoxuejiedudecoctiongroupandsimvas
taingroup.Aftertellweeks,theconcentrationoftotalcholesterol(TC),triglyceride(TG),highdensitylilmproteincholesterol(HDL—C),
lowdensitylipoproteincholesterol(LDL—C),6一
ketoPGF1andTXB2weremeasured.ResultsComparedwiththecontrolgroup,the levelof1,C,TG,}{1)L—C,LDL—CandI'Xt~increased(P<0.05orP<0.01)6一keto
—PGF1.,卜匝)L—Cdeceasedsignificantly(P<
0.01)inmodelsgroup.Con~paredwiththemodelgroup,theconcentrationof,】,,1,LDL—
CandTXB2deceasedand6一keto—pGFI.
andHDL—
Cincreasedobviously(P<0.01)inYiqihuoxuejiedudecoctiongroupandSimvastaingroup.Comparedwiththesimvastain
group,thelevelofHDL—
CincreasedinYiqihuoxuejiedudecoction(P<0.05).ConclusionYiqihuoxuejiedudecoctionwaseffectivefor
treatmentandpreventionofatherosclerosis.1tmightberelatedtoregulatetheserulnlipidandPGI,/TXA2.
Keywords:athercxsclerosis;Yiqihu()xuejiedudecoction;sermnlipid;6一keto—
PGF1o;T
动脉粥样硬化(atherosclercxsis,AS)是以血管平滑肌细胞增
殖及富含脂质的巨嗜细胞聚集为特征的多因素过程.AS的
病因多样,发病机制复杂.本实验通过高脂饲料复制家兔动脉
粥样硬化模型,观察益气活血解毒汤对AS家兔血脂,6酮
前列腺素(6一keto—PGF1.)及血栓素B2(Tx)的影响,探讨其 抗AS的作用机制.
1材料与方法
1.1动物健康日本雄性大耳白兔24只,体重2.0kg土0.2 kg,(4,6)月龄,购自安徽医科大学实验动物中心
1.2药物益气活血解毒汤由安徽省中医院煎药室煎制,每袋 200mL,真空包装;辛伐他汀每片40mg(杭州默沙东公司提供, 批准文号:J20040032)
1.3主要试剂血脂检测试剂盒由浙江东瓯生物
有限公 司提供.6keto—PGF1及TXB2放射免疫试剂盒由北京普尔 1)为安徽省教育厅自然科学基金项目(No2006KJ340B) 伟业生物科技有限公司提供,批准文号分别为国药准字 S109502l6,S10950213.
1.4主要仪器OLYMPUSAU一4()(】全自动生化分析仪(日 本),80—2离心沉定器(上海手术器械厂),HH—S水浴锅(郑州 长城科工贸有限公司),DFM一96型16管放免7计数器(上海 原子核研究日环仪器厂).
1.5动物模型复制与分组将动物随机分为4组,每组6只. 分别为空白对照组,模型对照组,益气活血解毒汤组,辛伐他汀 组.喂饲高脂饲料(1%胆固醇,5%猪油,94%基础饲料)复制 AS动物模型_2.,复制期为10周其中益气活血解毒汤组及辛 伐他汀组边造模边给药,前两组以等量生理盐水灌胃,动物在适 应性喂养1周后,空白对照组喂饲普通饲料;模型对照组,益气 活血解毒汤组以及辛伐他汀组喂饲高脂饲料,每日每只50g;按 人与动物问体表面积折算的等效剂量比值,模型对照组每只家