曙红Y与牛血清蛋白作用的荧光光谱研究及分析应用

曙红Y与牛血清蛋白作用的荧光光谱研究及分析应用 () 摘 要 : 在 的介质中 , 曙红 Y与牛血清蛋白BSA作用形成复合物 , 最大吸收峰从 513 nm 红移到 529 H 2. 53 p ( ) nm , 曙红 Y荧光光谱发生显著变化 , 最大发射光波长 540 nm最大激发光波长 308 nm荧光猝灭 , 其猝灭程度与 σ) ( BSA 含量成正比 , 线性范围 0,2. 5 m/ L , 相关系数 0. 999 , 检出限 2. 8。 作者研究了反应条件、干扰 / L 3 ggμ 物质及进行了样品测试 , 结果令人满意。 关键词 : 曙红 Y; 牛血清蛋白 ; 荧光光谱 ( ) 中图分类号 : Q51 ; O657. 3文献标识码 : A文章编号 : 1004 - 4957200005 - 0048 - 02 蛋白质测定在临床医学和生命科学研究中有重要意义 , 这方面的研究引起人们的广泛兴趣 。 最常用的测1 ,3 定方法是染料结合法, 染料在酸性介质中与蛋白质作用形成复合物 , 而后进行测定 。 荧光法测定蛋白质 4 , 5 () 文献报道较少。 我们在研究曙红 Y与牛血清蛋白BSA作用时 , 发现曙红 Y最大吸收峰从 513 nm 红移到 ( ) 529 nm , 荧光光谱发生显著变化 , 最大发射光波长 540 nm激发射光波长 308 nm荧光猝灭 , 其猝灭程度与 ( ) BSA 含量成正比 , 据此拟定测定牛血清蛋白的分析方法 。 该法线性范围宽0,2. 5 m/ L, 灵敏度高 , 检出限 g 可达 2. 8σ) ( , 选择性好 , 不受常见物质干扰 , 简便快速 , 对合成样品测试 , 结果令人满意 。/ L 3 gμ 1 实验部分 1. 1 仪器与试剂 () () PHB - 4H 计 上海雷磁仪器厂。 RF - 540 荧光分光光度计日本岛津;p () 牛血清蛋白BSA , 中国科学院化学研究所相对分子质量按 65 000 计 , 以 5 / L NaCl 水溶液配成 100 m/ L , gg- 4 使用时稀释 ; 曙红 Y溶液 : 1 ×10 mol / L ; HCl 溶液 : 0. 2 mol / L ; 所用试剂均为分析纯 , 实验用水为二次蒸馏 水 。 1. 2 实验方法- 4 ( ( ) ) 在一系列 10 mL 比色管中分别加入 0. 5 mL 曙红 Y溶液 1 ×10 mol / L、0. 2 mL HCl 溶液 0. 2 mol / L以及 一定量 BSA 溶液并摇匀 , 放置 5 mi n 后 , 用 308 nm 波长光激发 , 在 波长 540 nm 处测定发射光强度 , 同时作试剂空白实验 。 2 结果与讨论 2. 1 吸收光谱 在 介质中曙红 Y最大吸收峰 513 nm , 当加入 BSA 后最 H 2. 53 p 大吸收峰红移到 529 nm , 表明曙红 Y与 BSA 生成复合物 , 吸收光谱 见图 1 。 2. 2 激发光谱与发射光谱 图 1 吸收光谱在 介质中曙红 Y最大激发光波长 308 nm , 最大发射光 H 2. 53 p ()Fi. 1 Absortion sectra H 2. 53gppp ( ) 1. 曙红 YEosi n Y; 2. 曙红 Y 与 BSA波长 540 nm , 加入 BSA 后 , 荧光猝灭 , 其猝灭程度与 BSA 含量成正 ( ) ( ) 的复合物Eosi n Y- BSA; c Eosi n Y= 比 , 据此拟定牛血清蛋白的分析方法 , 实验结果见图 2 。- 5 () BSA= 5 m/ L mol / L ; 2 ×10g ρ 收稿日期 : 2000 - 01 - 03 ; 修订日期 : 2000 - 06 - 08 ( ) 基金项目 : 中国分析测试基金资助项目99 - 11 ( ) 作者简介 : 卢 臻1964 - , 男 , 湖北咸宁人 , 讲师 , 现在湖北咸宁教育学院工作 ; 宋功武 , 联系人 . 2. 3 反应时间的影响 曙红 Y与 BSA 反应很快 , 于室温下 5 mi n 反应完全 , 0. 5 h 内 荧光强度不变 。 2. 4 反应酸度的影响 试验 对复合物形成的影响 , H 2. 53 时荧光强度最大且 H p p 较稳定 , 结果见图 3 。 2. 5 曙红 Y 加入量的影响 - 4 试验曙红 Y加入量对体系的影响 , 当 1 ×10 mol / L 曙红 Y 加入量为 0. 5 mL 时荧光强度最大且较稳定 。 图 2 激发光谱与发射光谱 ()Fi. 2 Fluorescence sectra H 2. 53gpp 2. 6 离子强度的影响( ) 1 、1′. 曙红 Y Eosi n Y; 2 、2′. 曙红 Y用 NaCl 的加入量来试验离子强度对体系的影响 , 结果表明 ( ) 与 BSA 的复合物Eosi n Y- BSA0. 1 mol / L NaCl 的加入量在 2. 5 mL 以内 , 对体系的荧光强度没有 - 6 ( ) () c Eosi n Y= 5 ×10 mol / L ; BSA= ρ影响 。 2. 5 m/ Lg 2. 7 试剂加入顺序的影响 ( 试验了几种试剂加入顺序 曙红 Y、盐酸 、BSA ; 曙红 Y、 ) BSA 、盐酸 ; 以及 BSA 、曙红 Y、盐酸对体系的影响 , 以曙红 Y、 BSA 、盐酸加入的顺序 , 荧光强度最大且较稳定 。 2. 8 工作曲线 按照实验方法 , 测定了 BSA 的工作曲线 , 线性范围 0,2. 5 m/ L , 线性方程 F = 0. 833 - 0. 197 , 相关系数 0. 999 , 检出限gρ σ) ( 2. 8。 对 2. 00 m/ L BSA 11 次测定平均值为 2. 01 m/ / L 3 gggμ L , 相对偏差 ??2. 7 % , 说明本法准确可靠 。 图 3 H 对体系的影响 p 2. 9 干扰物质的影响Fi. 3 Effect of H on sstemgp y - 6 ( ) () c Eosi n Y= 5 ×10 mol / L ; BSA= 2. 5 mg/ L ρ 2 + 2 + 2 + 2 + 2 + 2 + 3 + 试验了氨基酸 、葡萄糖 、柠檬酸 , 以及 Ca、Cu、Co、Ni、Pb、Fe等离子的影响 , 只有当 Fe的浓度超过 BSA 浓度的 20 倍时有干扰 , 说明本法选择性较好 。 2. 10 样品的测定 按照实验方法对合成样品的 BSA 进行测定 , 结果见表 1 。 表 1 BSA 测定结果 Table 1 Assaresult of total rotei ns of BSA y p RecoverAdded RSD Found y No - 1 - 1 ))( . ( . R/ % ( )/ mL / mL sr / % n = 6 A g F g ρρ1 1. 00 1. 02 102 2. 1 2 1. 50 1. 46 97. 3 1. 5 3 2. 00 2. 05 102. 5 2. 7 4 2. 50 2. 45 97. 2 1. 9 参考文献 : 1 WEI Yon -u , LI Ke- an , TONG Shen- an. The i nteraction of bromohenol blue with rotei ns i n acidic solutionJ . Talata , 1996 ,gj ygp p ( ) 43 1: 1. ( ) 李 娜 , 李克安 , 童沈阳. 偶氮胂 ?与牛血清白蛋白作用的分光度研究J . 分析化学 , 1996 , 24 1: 10.2 ( ) 魏永巨 , 李克安 , 童沈阳. 溴甲酚绿与血清白蛋白的结合反应J . 分析化学 , 1996 , 24 4: 387.3 ( ) 黄祖云 , 岳贵花 , 陈震华 , 等. 四环素族化合物荧光标记蛋白质的研究J . 分析科学学报 , 1997 , 13 3: 213.4 ( ) 冯 喜 , 白春礼 , 林 璋 , 等. 吖啶橙与牛血清白蛋白的相互结合反应J . 分析化学 , 1998 , 26 2: 154.5 摘 要 : 采用分步交换法 , 制备了氧化铝柱层状类钙钛矿型新铌酸盐 KSrNbO。 采用 X 射线衍射、扫描电镜 2 3 1 0 对该化合物的结构与形貌进行了表征 , 并测定了其比表面积。 结果表明 , 该化合物具有较高的热稳定性和较大 的比表面积。 关键词 : 氧化铝柱 ; 铌酸盐 ; 结构 ; X 射线衍射 ; 热稳定性 ( ) 中图分类号 : O614. 512文献标识码 : A文章编号 : 1004 - 4957200005 - 0050 - 03 80 年代以来 , 一系列以氧八面体骨架结构为基础的层状金属氧化物能被有机胺撑开形成层柱化合物 , 此1 ,3 类材料在分离 、吸附 、传导和催化等领域具有潜在的巨大的应用前景 , 因而受到科学家们的普遍关注。 但是由于层间的有机胺离子不耐高温 , 此类材料在各方面的应用受到了很大的限制 , 因此制备热稳定性好的 4 , 5 新型层柱化合物一直是该领域的研究重点之一。 我们在探索新型铁电材料的过程中 , 合成了一种三层类钙钛矿结构新铌酸盐 KSr2 Nb3 O10 , 其结构特征使 6 , 7 其可能特别适合于作为一种模型来设计和开发新型层柱化合物。 由于 KSr2 Nb3 O10 没有遇水膨胀的性质 , 本文采用分步交换法 , 合成了新型氧化铝柱三层类钙钛矿结构铌酸盐样品 , 采用 X 射线衍射仪 、扫描电镜对 样品的结构与形貌进行了表征 , 并测定了样品的比表面积 。 1 实验部分 1. 1 样品制备 ( ) KSr2 Nb3 O10 的制备见文献7 。 将 KSr2 Nb3 O10 粉末浸入到过量的 5 mol / L HCl 溶液中 , 室温 25 ?下进行 收稿日期 : 2000 - 01 - 01 ; 修订日期 : 2000 - 06 - 02 ( ) ( ) 基金项目 : 国际衍射数据中心ICDDGrant - i n - Aid 基金项目98 - 10 ( ) 作者简介 : 方 亮1970 - , 男 , 湖北宜昌人 , 副研究员 , 博士 . ( ) 上接 49 页 Fl uorescence Interaction Sectrohotometric Studon thepp y between Eosi n Y and Bovi ne Serum Al bumi n LU Zhen , SONG Gon- wug )(430062 , Chi na Analsi s and Testi nCenter , Hubei Universit, Wuhan yg y () Ab stra ct : In a medium at H 2. 53 Eosi nY forms an adduct with bovi ne serum albumi n BSA, andp In the meanti me , there is no causes a red- shift of its maxi mum adsortion eak from 513 nm to 529 nm.pp deformation or shift of its excitation emission eaks.The maxi mum fluorescence emission of Eosi n Y at p ( ) 540 nmwith excitation wavelenth 308 nmcan be uenched uon the addition of BSA. The i ntensitof gqpy fluorescence uenchi nis directlroortional to BSA content. This uenchi nreaction can be used for qg y p pqg the raid and sensitive determi nation of BSA. The li near rane is 0, 2. 5 m/ L , while the correlationpgg ( σ) coefficient is 0. 999. The detection li mit is 2. 8 / L 3 . The tolerance towards i nterferi nsubstancesgg μ is satisfactor.y () Eosi n Y; Bovi ne serum albumi n BSA; Fluorescence sectraKe wo rd s : py