[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩
苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12)
RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷,
盐酸巴马iT盐酸小檗碱的含量
胡春丽,王冬梅,张鹏,许晓丹,赵怀清
(沈阳药科大学药学院,沈阳110016)
摘要目的:建立同时测定当归龙荟片中黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的RP—HPLC法.方法:以当归龙荟片为研
究对象,采用DiamonsilC.柱(200amx4.6mm,5m)分离,流动相为乙腈一甲醇一0.05tool?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺
(25:7:76:0.23,磷酸凋pH3.1),流速1.0mL?min,,检测波长26511I/1,柱温35?.结果:黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱
浓度分别在0.91,18.16mg?L(r:0.9994,/7,=5),0.16—3.14mg?L(r=0.9999,rt=5),0.47,9.40mg?L(,=
0.9999,=5)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率(=9)分别为100.3%,99.3%,99.2%.结论:本测定方法
简便,快捷,准确,为当归龙荟片质量评价提供依据.
关键词:当归龙荟片;黄芩苷;盐酸巴马汀;盐酸小檗碱;反相高效液相
色谱法
中图分类号:R917文献标识码:A文章编
号:0254—1793(2008)12—2011—04
RP—HPLCsimultaneousdeterminationofbaicalin,palmatine
hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets
HUChun—li,WANGDong—mei,ZHANGPeng,XUXiao—dan,ZHAOH
uai—qing
(ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China)
AbstractObjective:TodevelopanRP—HPLCmethodforsimultaneousdete
rminationofbaicalin,palmatine
hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets.Methods:DiamonsilC18(200lnln×4.6am,
5txm)wasused,themobilephasewasacetonitrile—methanol一0.05mol?L
一.sodiumdihydrogenphosphatesolu—
tion—triethylamine(25:7:76:0.23,adjustpH3.1withphosphoricacid)ataflowrateof1.0mL?min,.The
UVdetectionwavelengthwas265nm,andthecolumntemperaturewas35?.
Results:Thelinearrangeswere0.91
—
18.16mg?L一(r=0.9994,n=5)forbaicalin,0.16—3.14mg?L一
(r=0.9999,n=5)forpalmatinehydro—
chloride,0.47—9.40mg?L一
(r=0.9999,=5)forberberinehydrochloride.Theaveragerecoveries(n=9)of
baicalin,palmatinehydrochlorideandberberinehydrochloridewere100.3%,99.3%,99.2%,respectively.Con-
clusions:Themethodisfoundtobesimple,accurateandreliableforsimultaneousanalysisofbaicalin,palmatine
hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets.
Keywords:Dangguilonghuitablets;baicalin;palmatinehydrochloride;berberinehydrochloride;RP—HPLC
当归龙荟片收载于卫生部药品
中药成方制
剂(WS3一B一1924—95),由芦荟,龙胆,黄芩,黄
连,黄柏等l0余味药材经提取,精制而成,具有清肝
明目,泻火通便的功效.现行标准仅对当归龙荟片
进行常规检查,无含量测定项目;文献报道中也仅有
当归龙荟片中大黄素单一成分的含量测定』,但由
于复方中药药效的发挥是多味药多种组分共同作用
通讯作者Tel:(024)23986250;E—mail:zhaohq1955@126.COIn
的结果,复方中药各味药的剂量和比例会影响其药
效,故以上方法均不能有效地控制药品的内在质
量.本文建立了当归龙荟片中黄芩,黄连和黄柏中
的黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱3种指标成分
同时测定的RP,HPLC方法.中药制剂中黄芩苷,
盐酸巴马汀,盐酸小檗碱的含量测定已分别有报
道,而三组分同时测定的文献尚未见报道.结
-?——
2012?-——药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12)
果
明,该方法简便,快速,灵敏度高,为该药的质量
控制提供了依据.
1仪器与试药
LC一10AT型高效液相输液泵(日本Shimadzu
公司),SPD一10A型紫外检测器(日本Shimadzu公
司),2010色谱工作站(浙江大学),BS一124S电子
分析天平(北京Sartorius仪器系统有限公司),KQ一
50B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司).
甲醇,乙腈均为色谱纯,磷酸二氢钠,三乙胺和
磷酸均为分析纯;黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱
对照品(均购自中国药品生物制品检定所,批号分
另lJ为110715—200514,110732—200506,110713—
200208);当归龙荟片(吉林省某药业股份有限公
司,批号分别为20060601,20060901,20061201),阴
性样品(自制),二次重蒸水(自制).
2方法与结果
2.1溶液制备
2.1.1对照品储备液分别取对照品黄芩苷,盐酸
巴马汀和盐酸小檗碱适量,精密称定,置25mL量瓶
中,用甲醇一水一0.1mol?L盐酸水溶液(50:50
:1)溶解,稀释至刻度,摇匀,制得质量浓度分别为
18.16,3.32,9.40mg?L的对照品储备液.
2.1.2供试品溶液取当归龙荟片10片,精密称
定,研细.称取约0.2g,加入甲醇一水一0.1tool?
L盐酸溶液(50:50:1)8mL,超声(功率90w,频
率59kHz)提取35rain,离心15rain(3000r?
rain),吸取上清液于25mL量瓶内.残渣用甲醇
一
0.1tool?L盐酸溶液(99:1)8mL,再超声(功
率9OW,频率59kHz)提取35min,离心15inin
(3000r?rain),合并上清液,用上述甲醇一水一
0.1tool?L盐酸溶液(50:50:1)定容至25mL,摇
匀,用0.45Ixm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得.
2.1.3阴性对照溶液按处方比例分别称取除黄
芩,黄连和黄柏以外的其余药味,依照当归龙荟片的
制备
制成相应的阴性样品,再按”2.1.2”项下
操作,制成黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱阴性对
照溶液.
2.2色谱条件和系统适用性试验色谱柱:Dia—
monsilC18(200inlll×4.6mm,5Ixm);流动相:乙腈
一
甲醇一0.05tool?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺
(25:7:76:0.23,以磷酸调pH3.1),流速:1.0mL?
rain’.,检测波长:265nm,柱温:35?,进样量:20
L.在上述色谱条件下,三组分色谱峰与相邻其他
色谱峰的分离度均大于1.5,理论塔板数按黄芩苷
计算大于7000,按盐酸巴马汀计算大于8000,按盐
酸小檗碱计算大于9000,阴性对照对样品测定无干
扰.对照品,阴性对照与样品的色谱图见图1.
1O2O010
图1黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的HPLC色谱图
FlHPLCchromatogramsofbaicalin,palmatinehydrochlorideand
berberinehydrochloride
A.对照品(standard)B.当归龙荟片样品(sample)C.缺黄芩阴性
样品(negativesamplewithoutRadixScutellariae)D.缺黄连和黄柏阴
性样(negativesamplewithoutRhizomaCoptidisorCortexPheltodendri
Chinensis)
1.黄芩苷(baicalin)2.盐酸巴马汀(palmatinehydrochloride)3.盐
酸小檗碱(berberinehydrochloride)
2.3线性关系考察依次精密吸取对照品储备液
0.5,2.5,5,7.5,10mL于10mL量瓶中,用甲醇一
水一0.1mol?L..盐酸水溶液(50:50:1)稀释至刻
度,摇匀,得系列质量浓度的对照品混合溶液,进样
分析,记录色谱峰面积.以对照品浓度(mg?
L)为横坐标,色谱峰面积l,为纵坐标绘制标准曲
线.结果表明,黄芩苷的质量浓度在0.91,18.16
mg?L内与峰面积线性关系良好,回归方程为:
l,:5.268×10X一23.53r:0.9994
盐酸巴马汀的质量浓度在0.16,3.14mg?L内
与峰面积线性关系良好,回归方程为:
Y=6.630×10X一9.59r=0.9999
盐酸小檗碱的质量浓度在0.47,9.40mg?L内
峰面积与质量浓度线性关系良好,回归方程为:
y:7.589×10X一31.78r=0.9999
2.4精密度试验将对照品储备液稀释1倍,在上
述色谱条件下重复进样6次,黄芩苷,盐酸巴马汀和
盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.O%,0.2%,
0.6%.
2.5重复性试验取同一批样品,按”2.1.2”项下
操作,平行制备6份供试品溶液,在上述色谱条件下
进样分析,黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量平
均值分别为2.33,0.38,1.15mg?片,;RSD分别
药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12)一2013一
为1.5%,1.3%,0.7%.
2.6回收率试验分别称取已知含量的样品(批
号:20060601)0.Ig,共9份,按低,中,高质量浓度
分别精密加人黄芩苷(相当于4.54,9.02,13.62
g),盐酸巴马汀(相当于0.78,1.57,2.35Izg),盐
酸小檗碱(相当于2.35,4.70,7.05g)对照品储备
液,按”2.1.2”项下方法操作,每一质量浓度制备3
份,依照上述色谱条件测定.黄花苷低,中,高回收
率(RSD)分别为99.8%(0.2%),102.1%(0.1%),
102.0%(0.3%);盐酸巴马丁低,中,高回收率
(RSD)分另IJ为98.3%(0.3%),99.2%(0.3%),
100.2%(0.2%);盐酸小檗碱的低,中,高回收率
(RSD)分别为98.4%(0.2%),98.2%(0.1%),
101.1%(1.3%).
2.7供试品溶液稳定性试验取同一份供试品溶
液,室温下静置,分别于0,2,4,8,12h按上述色谱
条件进样分析.黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱
峰面积的RSD分别为0.3%,0.3%,0.2%.结果表
明供试品溶液在12h内稳定性良好.
2.8样品测定取3批样品,每批取3份,按
“2.1.2”项方法制备供试品溶液,取20,注入高
效液相色谱仪,记录色谱峰面积,外标一点法计算各
个组分质量分数.测定结果见表1.
表1含量测定结果(=3)
Tab1Resultsofcontenttests
3讨论
3.1提取方法和提取溶剂的选择
由于黄芩苷在酸性条件下易析出及其相对
不稳定性,2次提取所用试剂有所变化.实验中
考察了2次提取溶剂中不同浓度的甲醇溶液及0.1
mol?L盐酸溶液的用量:(I)甲醇,甲醇;(?)甲
醇一水(50:50),甲醇一0.1mol?L盐酸溶液(99
:1);(?)甲醇一水一0.1tool?L盐酸溶液(50:
50:1),甲醇一0.1tool?L盐酸溶液(99:1);(?)
甲醇一水(50:50),甲醇一水(50:50).
结果表明提取溶剂(I)对3个组分的提取率
最高,(1lI)提取率略高于(II),而(IV)最低.但提
取溶剂(I)中的甲醇在黄芩苷样品峰处出现倒峰,
干扰测定,故最终选择(1lI)为提取溶剂.同时对提
取时问(25,35,45min)进行了考察比较,结果表明
超声35min3种指标成分即能够提取完全.因此,
选择用提取溶剂(?)超声35nfin处理样品,回收率
结果表明本提取方法符合分析方法的要求.
3.2测定波长的选择紫外图谱显示盐酸小檗碱,
盐酸巴马汀在350,265,230rim处,黄芩苷在
276,324nm处有最大吸收.为了保证各指标成
分都具有适宜的灵敏度,经实验比较,在265lqm波
长下3个组分均有较强吸收.
3.3流动相的选择
曾分别选用乙腈一水,乙腈一0.05mol?L磷
酸二氢钠溶液一三乙胺一磷酸,乙腈一甲醇一水,乙
腈一甲醇一0.05mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙
胺和乙腈一甲醇一0.05mol?L磷酸二氢钠溶液
一
三乙胺一磷酸作为流动相,结果以乙腈一甲醇一
0.05mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺一磷酸为
最佳.
实验比较了乙腈,甲醇,三乙胺不同用量和流动
相不同pH对3个组分保留时间及其相邻峰分离度
的影响,发现使用少量三乙胺可抑制盐酸巴马汀和
盐酸小檗碱拖尾,且3个组分对pH均较敏感,不同
pH保留时问差别较大.实验以乙腈一甲醇一0.05
mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺(25:7:76:
0.23)(以磷酸调pH3.1)为流动相时,各组分保留时
间适当且分离效果好.
参考文献
1CHENRui(陈睿),WANGYa—juan(王亚娟).HPLCdetermina-
tionofemodineontentinDangguilonghuitablets(HPLC法测定当归
龙荟片中大黄素的含量).Northwest”一.,(西北药学杂志),
2006,21(6):247
2LIYan—rong(李艳荣),JIANGYe(蒋晔),HAOFu(郝福),et
a1.Determinationofgenpioside,baicalinandberbefinehydrochloride
inGonglaoqnhuotabletssimultaneouslybyRP—HPLC(RP—HPLC
同时测定功劳去火片中栀子苷,黄芩苷及盐酸小檗碱的含量).
ChinTraditPatMed(中成药),2006,28(8):1126
3LIJian—xun(李建勋),ZHANGLiang(张亮),WANGShu—zhen
(王淑珍).Simultaneousdeterminationofberberinehydrochloride
一
2014一药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12)
andbaicalininsanhuangtabletsbyHPLC(HPLC法同时测定三黄
片中盐酸小檗碱与黄芩苷的含量).ChinaPharm(中国药师),
2005,8(6):479
4QIQiu,peug(戚秋鹏),WANGZhong—yan(王中彦),LtUTian
—
fu(刘天富).Determinationofthecontentsofberberinehydrochlo—
rideandbaicalininWanshiNiuhuangQingxinpelletsbyHPLC
(HI?LC法测定万氏牛黄清心微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含
量).JShenyangPharm(沈阳药科大学),2003,2O(5):
352
5ZHANGGuo—qing(张国庆),YANGGeng—liang(杨更亮),LI
Zhi—wei(李志伟),eta1.Determinationofbaiealinandberberine
hydrochlorideinangongNiuhuangcapsulesbyHPLC(安宫牛黄胶
囊中的黄芩苷和盐酸小檗碱的HPLC测定).Chin-,Pharm(中国
医药工业杂志),2005,36(3):176
6J1NPei—fen(金佩芬),MIUHua—rong(缪华荣),QIANYa—
ping(钱亚萍),eta1.Determinationofberberiuehydrochlorideand
palmatinehydroehlorideinWujipillsbyHPLC(HPLC测定戊己丸
中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量).ChinTraditPatMed(中成
药),2001,23(1):’4
7HUANGJie(黄捷),SANGTong(桑彤),TANHong—ping(覃红
萍).Determinationofpalmalinehydrochlorideandberberinehydro—
chlorideinJinjicapsulesbyRP—HPLC(反相高效液相色谱法测
定金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量).Chin,Hosp
Pharm(中国医院药学杂志),2002,22(12):723
8L1Yi(李奕),XOXu(许旭).Detemfinationofbaicalin,rheinand
berberineinYiqingcapsulebyHPLC(HPLC同时测定一清胶囊中
黄芩苷,大黄酸和小檗碱的含量).Ch/nTraditPatMed(中成
药),2005,27(2):155
9SHEN]Jan—hui(申兰慧),SHITao(石涛),ZOUAi—feng(邹爱
峰),et.Determinationofgentiopicrin,pabnatinehydrochlorideand
berberinehydmchlorideinErtongIIoralLiquidbyRP—HPLCwi出
gradientelution(RP—HPLC梯度洗脱法测定儿童?号口服液中
龙胆苦苷,盐酸巴马汀,盐酸小檗碱).ChinTraditPatMed(中成
药),2004,26(4):284
(本文于2007年7月9日收到)
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2008年11月】1日,12日,全国药品检测车应用经验交流会在马鞍山市召开.参加会议的有国家
食品药品监管局(以下简称国家局)药品市场监督司司长王立丰,马鞍山市副市长王晓焱,安徽省食品
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报告.报告中介绍了国际上药品打假的新动向,目前国际上药品打假
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好用活药品检测车,推进药品快检技术的研究和应用做了深入的交流和探讨,并结合交流内容参观检测
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(来自WWW.nicpbp.org.Oil)