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[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量

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[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量 RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩 苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量 药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12) RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷, 盐酸巴马iT盐酸小檗碱的含量 胡春丽,王冬梅,张鹏,许晓丹,赵怀清 (沈阳药科大学药学院,沈阳110016) 摘要目的:建立同时测定当归龙荟片中黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的RP—HPLC法.方法:以当归龙荟片为研 究对象,采用Dia...
[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量
[doc格式] RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量 RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩 苷、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量 药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12) RP—HPLC法同时测定当归龙荟片中黄芩苷, 盐酸巴马iT盐酸小檗碱的含量 胡春丽,王冬梅,张鹏,许晓丹,赵怀清 (沈阳药科大学药学院,沈阳110016) 摘要目的:建立同时测定当归龙荟片中黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量的RP—HPLC法.方法:以当归龙荟片为研 究对象,采用DiamonsilC.柱(200amx4.6mm,5m)分离,流动相为乙腈一甲醇一0.05tool?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺 (25:7:76:0.23,磷酸凋pH3.1),流速1.0mL?min,,检测波长26511I/1,柱温35?.结果:黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱 浓度分别在0.91,18.16mg?L(r:0.9994,/7,=5),0.16—3.14mg?L(r=0.9999,rt=5),0.47,9.40mg?L(,= 0.9999,=5)范围内与峰面积呈良好线性关系;平均加样回收率(=9)分别为100.3%,99.3%,99.2%.结论:本测定方法 简便,快捷,准确,为当归龙荟片质量评价提供依据. 关键词:当归龙荟片;黄芩苷;盐酸巴马汀;盐酸小檗碱;反相高效液相 色谱法 中图分类号:R917文献标识码:A文章编 号:0254—1793(2008)12—2011—04 RP—HPLCsimultaneousdeterminationofbaicalin,palmatine hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets HUChun—li,WANGDong—mei,ZHANGPeng,XUXiao—dan,ZHAOH uai—qing (ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China) AbstractObjective:TodevelopanRP—HPLCmethodforsimultaneousdete rminationofbaicalin,palmatine hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets.Methods:DiamonsilC18(200lnln×4.6am, 5txm)wasused,themobilephasewasacetonitrile—methanol一0.05mol?L 一.sodiumdihydrogenphosphatesolu— tion—triethylamine(25:7:76:0.23,adjustpH3.1withphosphoricacid)ataflowrateof1.0mL?min,.The UVdetectionwavelengthwas265nm,andthecolumntemperaturewas35?. Results:Thelinearrangeswere0.91 — 18.16mg?L一(r=0.9994,n=5)forbaicalin,0.16—3.14mg?L一 (r=0.9999,n=5)forpalmatinehydro— chloride,0.47—9.40mg?L一 (r=0.9999,=5)forberberinehydrochloride.Theaveragerecoveries(n=9)of baicalin,palmatinehydrochlorideandberberinehydrochloridewere100.3%,99.3%,99.2%,respectively.Con- clusions:Themethodisfoundtobesimple,accurateandreliableforsimultaneousanalysisofbaicalin,palmatine hydrochlorideandberberinehydrochlorideinDangguilonghuitablets. Keywords:Dangguilonghuitablets;baicalin;palmatinehydrochloride;berberinehydrochloride;RP—HPLC 当归龙荟片收载于卫生部药品中药成方制 剂(WS3一B一1924—95),由芦荟,龙胆,黄芩,黄 连,黄柏等l0余味药材经提取,精制而成,具有清肝 明目,泻火通便的功效.现行标准仅对当归龙荟片 进行常规检查,无含量测定项目;文献报道中也仅有 当归龙荟片中大黄素单一成分的含量测定』,但由 于复方中药药效的发挥是多味药多种组分共同作用 通讯作者Tel:(024)23986250;E—mail:zhaohq1955@126.COIn 的结果,复方中药各味药的剂量和比例会影响其药 效,故以上方法均不能有效地控制药品的内在质 量.本文建立了当归龙荟片中黄芩,黄连和黄柏中 的黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱3种指标成分 同时测定的RP,HPLC方法.中药制剂中黄芩苷, 盐酸巴马汀,盐酸小檗碱的含量测定已分别有报 道,而三组分同时测定的文献尚未见报道.结 -?—— 2012?-——药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12) 果明,该方法简便,快速,灵敏度高,为该药的质量 控制提供了依据. 1仪器与试药 LC一10AT型高效液相输液泵(日本Shimadzu 公司),SPD一10A型紫外检测器(日本Shimadzu公 司),2010色谱工作站(浙江大学),BS一124S电子 分析天平(北京Sartorius仪器系统有限公司),KQ一 50B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司). 甲醇,乙腈均为色谱纯,磷酸二氢钠,三乙胺和 磷酸均为分析纯;黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱 对照品(均购自中国药品生物制品检定所,批号分 另lJ为110715—200514,110732—200506,110713— 200208);当归龙荟片(吉林省某药业股份有限公 司,批号分别为20060601,20060901,20061201),阴 性样品(自制),二次重蒸水(自制). 2方法与结果 2.1溶液制备 2.1.1对照品储备液分别取对照品黄芩苷,盐酸 巴马汀和盐酸小檗碱适量,精密称定,置25mL量瓶 中,用甲醇一水一0.1mol?L盐酸水溶液(50:50 :1)溶解,稀释至刻度,摇匀,制得质量浓度分别为 18.16,3.32,9.40mg?L的对照品储备液. 2.1.2供试品溶液取当归龙荟片10片,精密称 定,研细.称取约0.2g,加入甲醇一水一0.1tool? L盐酸溶液(50:50:1)8mL,超声(功率90w,频 率59kHz)提取35rain,离心15rain(3000r? rain),吸取上清液于25mL量瓶内.残渣用甲醇 一 0.1tool?L盐酸溶液(99:1)8mL,再超声(功 率9OW,频率59kHz)提取35min,离心15inin (3000r?rain),合并上清液,用上述甲醇一水一 0.1tool?L盐酸溶液(50:50:1)定容至25mL,摇 匀,用0.45Ixm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得. 2.1.3阴性对照溶液按处方比例分别称取除黄 芩,黄连和黄柏以外的其余药味,依照当归龙荟片的 制备制成相应的阴性样品,再按”2.1.2”项下 操作,制成黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱阴性对 照溶液. 2.2色谱条件和系统适用性试验色谱柱:Dia— monsilC18(200inlll×4.6mm,5Ixm);流动相:乙腈 一 甲醇一0.05tool?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺 (25:7:76:0.23,以磷酸调pH3.1),流速:1.0mL? rain’.,检测波长:265nm,柱温:35?,进样量:20 L.在上述色谱条件下,三组分色谱峰与相邻其他 色谱峰的分离度均大于1.5,理论塔板数按黄芩苷 计算大于7000,按盐酸巴马汀计算大于8000,按盐 酸小檗碱计算大于9000,阴性对照对样品测定无干 扰.对照品,阴性对照与样品的色谱图见图1. 1O2O010 图1黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的HPLC色谱图 FlHPLCchromatogramsofbaicalin,palmatinehydrochlorideand berberinehydrochloride A.对照品(standard)B.当归龙荟片样品(sample)C.缺黄芩阴性 样品(negativesamplewithoutRadixScutellariae)D.缺黄连和黄柏阴 性样(negativesamplewithoutRhizomaCoptidisorCortexPheltodendri Chinensis) 1.黄芩苷(baicalin)2.盐酸巴马汀(palmatinehydrochloride)3.盐 酸小檗碱(berberinehydrochloride) 2.3线性关系考察依次精密吸取对照品储备液 0.5,2.5,5,7.5,10mL于10mL量瓶中,用甲醇一 水一0.1mol?L..盐酸水溶液(50:50:1)稀释至刻 度,摇匀,得系列质量浓度的对照品混合溶液,进样 分析,记录色谱峰面积.以对照品浓度(mg? L)为横坐标,色谱峰面积l,为纵坐标绘制标准曲 线.结果表明,黄芩苷的质量浓度在0.91,18.16 mg?L内与峰面积线性关系良好,回归方程为: l,:5.268×10X一23.53r:0.9994 盐酸巴马汀的质量浓度在0.16,3.14mg?L内 与峰面积线性关系良好,回归方程为: Y=6.630×10X一9.59r=0.9999 盐酸小檗碱的质量浓度在0.47,9.40mg?L内 峰面积与质量浓度线性关系良好,回归方程为: y:7.589×10X一31.78r=0.9999 2.4精密度试验将对照品储备液稀释1倍,在上 述色谱条件下重复进样6次,黄芩苷,盐酸巴马汀和 盐酸小檗碱峰面积的RSD分别为1.O%,0.2%, 0.6%. 2.5重复性试验取同一批样品,按”2.1.2”项下 操作,平行制备6份供试品溶液,在上述色谱条件下 进样分析,黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱含量平 均值分别为2.33,0.38,1.15mg?片,;RSD分别 药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12)一2013一 为1.5%,1.3%,0.7%. 2.6回收率试验分别称取已知含量的样品(批 号:20060601)0.Ig,共9份,按低,中,高质量浓度 分别精密加人黄芩苷(相当于4.54,9.02,13.62 g),盐酸巴马汀(相当于0.78,1.57,2.35Izg),盐 酸小檗碱(相当于2.35,4.70,7.05g)对照品储备 液,按”2.1.2”项下方法操作,每一质量浓度制备3 份,依照上述色谱条件测定.黄花苷低,中,高回收 率(RSD)分别为99.8%(0.2%),102.1%(0.1%), 102.0%(0.3%);盐酸巴马丁低,中,高回收率 (RSD)分另IJ为98.3%(0.3%),99.2%(0.3%), 100.2%(0.2%);盐酸小檗碱的低,中,高回收率 (RSD)分别为98.4%(0.2%),98.2%(0.1%), 101.1%(1.3%). 2.7供试品溶液稳定性试验取同一份供试品溶 液,室温下静置,分别于0,2,4,8,12h按上述色谱 条件进样分析.黄芩苷,盐酸巴马汀和盐酸小檗碱 峰面积的RSD分别为0.3%,0.3%,0.2%.结果表 明供试品溶液在12h内稳定性良好. 2.8样品测定取3批样品,每批取3份,按 “2.1.2”项方法制备供试品溶液,取20,注入高 效液相色谱仪,记录色谱峰面积,外标一点法计算各 个组分质量分数.测定结果见表1. 表1含量测定结果(=3) Tab1Resultsofcontenttests 3讨论 3.1提取方法和提取溶剂的选择 由于黄芩苷在酸性条件下易析出及其相对 不稳定性,2次提取所用试剂有所变化.实验中 考察了2次提取溶剂中不同浓度的甲醇溶液及0.1 mol?L盐酸溶液的用量:(I)甲醇,甲醇;(?)甲 醇一水(50:50),甲醇一0.1mol?L盐酸溶液(99 :1);(?)甲醇一水一0.1tool?L盐酸溶液(50: 50:1),甲醇一0.1tool?L盐酸溶液(99:1);(?) 甲醇一水(50:50),甲醇一水(50:50). 结果表明提取溶剂(I)对3个组分的提取率 最高,(1lI)提取率略高于(II),而(IV)最低.但提 取溶剂(I)中的甲醇在黄芩苷样品峰处出现倒峰, 干扰测定,故最终选择(1lI)为提取溶剂.同时对提 取时问(25,35,45min)进行了考察比较,结果表明 超声35min3种指标成分即能够提取完全.因此, 选择用提取溶剂(?)超声35nfin处理样品,回收率 结果表明本提取方法符合分析方法的要求. 3.2测定波长的选择紫外图谱显示盐酸小檗碱, 盐酸巴马汀在350,265,230rim处,黄芩苷在 276,324nm处有最大吸收.为了保证各指标成 分都具有适宜的灵敏度,经实验比较,在265lqm波 长下3个组分均有较强吸收. 3.3流动相的选择 曾分别选用乙腈一水,乙腈一0.05mol?L磷 酸二氢钠溶液一三乙胺一磷酸,乙腈一甲醇一水,乙 腈一甲醇一0.05mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙 胺和乙腈一甲醇一0.05mol?L磷酸二氢钠溶液 一 三乙胺一磷酸作为流动相,结果以乙腈一甲醇一 0.05mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺一磷酸为 最佳. 实验比较了乙腈,甲醇,三乙胺不同用量和流动 相不同pH对3个组分保留时间及其相邻峰分离度 的影响,发现使用少量三乙胺可抑制盐酸巴马汀和 盐酸小檗碱拖尾,且3个组分对pH均较敏感,不同 pH保留时问差别较大.实验以乙腈一甲醇一0.05 mol?L磷酸二氢钠溶液一三乙胺(25:7:76: 0.23)(以磷酸调pH3.1)为流动相时,各组分保留时 间适当且分离效果好. 参考文献 1CHENRui(陈睿),WANGYa—juan(王亚娟).HPLCdetermina- tionofemodineontentinDangguilonghuitablets(HPLC法测定当归 龙荟片中大黄素的含量).Northwest”一.,(西北药学杂志), 2006,21(6):247 2LIYan—rong(李艳荣),JIANGYe(蒋晔),HAOFu(郝福),et a1.Determinationofgenpioside,baicalinandberbefinehydrochloride inGonglaoqnhuotabletssimultaneouslybyRP—HPLC(RP—HPLC 同时测定功劳去火片中栀子苷,黄芩苷及盐酸小檗碱的含量). ChinTraditPatMed(中成药),2006,28(8):1126 3LIJian—xun(李建勋),ZHANGLiang(张亮),WANGShu—zhen (王淑珍).Simultaneousdeterminationofberberinehydrochloride 一 2014一药物分析杂志ChinJPharmAnal2008,28(12) andbaicalininsanhuangtabletsbyHPLC(HPLC法同时测定三黄 片中盐酸小檗碱与黄芩苷的含量).ChinaPharm(中国药师), 2005,8(6):479 4QIQiu,peug(戚秋鹏),WANGZhong—yan(王中彦),LtUTian — fu(刘天富).Determinationofthecontentsofberberinehydrochlo— rideandbaicalininWanshiNiuhuangQingxinpelletsbyHPLC (HI?LC法测定万氏牛黄清心微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含 量).JShenyangPharm(沈阳药科大学),2003,2O(5): 352 5ZHANGGuo—qing(张国庆),YANGGeng—liang(杨更亮),LI Zhi—wei(李志伟),eta1.Determinationofbaiealinandberberine hydrochlorideinangongNiuhuangcapsulesbyHPLC(安宫牛黄胶 囊中的黄芩苷和盐酸小檗碱的HPLC测定).Chin-,Pharm(中国 医药工业杂志),2005,36(3):176 6J1NPei—fen(金佩芬),MIUHua—rong(缪华荣),QIANYa— ping(钱亚萍),eta1.Determinationofberberiuehydrochlorideand palmatinehydroehlorideinWujipillsbyHPLC(HPLC测定戊己丸 中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量).ChinTraditPatMed(中成 药),2001,23(1):’4 7HUANGJie(黄捷),SANGTong(桑彤),TANHong—ping(覃红 萍).Determinationofpalmalinehydrochlorideandberberinehydro— chlorideinJinjicapsulesbyRP—HPLC(反相高效液相色谱法测 定金鸡胶囊中盐酸巴马汀及盐酸小檗碱的含量).Chin,Hosp Pharm(中国医院药学杂志),2002,22(12):723 8L1Yi(李奕),XOXu(许旭).Detemfinationofbaicalin,rheinand berberineinYiqingcapsulebyHPLC(HPLC同时测定一清胶囊中 黄芩苷,大黄酸和小檗碱的含量).Ch/nTraditPatMed(中成 药),2005,27(2):155 9SHEN]Jan—hui(申兰慧),SHITao(石涛),ZOUAi—feng(邹爱 峰),et.Determinationofgentiopicrin,pabnatinehydrochlorideand berberinehydmchlorideinErtongIIoralLiquidbyRP—HPLCwi出 gradientelution(RP—HPLC梯度洗脱法测定儿童?号口服液中 龙胆苦苷,盐酸巴马汀,盐酸小檗碱).ChinTraditPatMed(中成 药),2004,26(4):284 (本文于2007年7月9日收到) ?????????’?一????????1?I?-??????????????????? 以药品检测车为平台全面提升药品快检技术水平 2008年11月】1日,12日,全国药品检测车应用经验交流会在马鞍山市召开.参加会议的有国家 食品药品监管局(以下简称国家局)药品市场监督司司长王立丰,马鞍山市副市长王晓焱,安徽省食品 药品监管局局长刘自林,中国药品生物制品检定所(以下简称中检所)常务副所长金少鸿及来自国家局 药品市场监督司,中检所及全国各省(区,市)食品药品监管部门及(食品)药品检验所的代表. 王立丰司长在讲话中指出,药品检测车作为一项新生事物,运行几年来有效提升了药品稽查打击假 劣药品的能力,也有许多待的经验和做法.今后,在加大对高风险药品的检查力度.发现并控制风 险苗头等重点工作中,药品检测车还将发挥出更大的作用. 金少鸿研究员做了《药品快检技术的最新研究进展暨药品检测车工作情况介绍(2007,2008)》的 报告.报告中介绍了国际上药品打假的新动向,目前国际上药品打假 的主要手段,我国药品检测车管理 与技术开发的新进展以及对我国药品检测车进一步发挥作用的建议. 安徽省,河南省,湖北省,广西区和广东省(食品)药品检验所在会上做了发言.与会代表就如何用 好用活药品检测车,推进药品快检技术的研究和应用做了深入的交流和探讨,并结合交流内容参观检测 车应用演示. (来自WWW.nicpbp.org.Oil)
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