过氧化物酶测定[新版]

过氧化物酶测定[新版] 过氧化物酶活性的测定 仪器药品 721型分光光度计、离心机、秒、天平、研钵、磁力搅拌器、20mmol/LKH2PO4、愈创木酚、30%过氧化氢、100mmol/L磷酸缓冲液(PH6.0) 反应混合液:100mmol/L磷酸缓冲液50ml与烧杯中,加入愈创木酚28ul，于磁力搅拌器上加热搅拌，直至溶解，带溶液冷却后，加入30%过氧化氢19ul，混和均匀，保存于冰箱中。 操作 1( 称取植物材料1g，加20mmol/LKH2PO45ml，于研钵中研磨成 匀浆，以4000r/min离心15分钟，倾出上清夜保存在冷处，残渣 在用KH2PO4溶液提取一次，合并两次上清夜，处于冷处备用。 2( 取光径1cm比色杯2只，于1只中加入反应混合液3ml， KH2PO41ml，作为校零对照，另1只中加入反应混合液3ml，上 述酶液1ml，立即开启秒表记录时间，于分光光度计上测量吸光度 值，每隔1分钟读数一次，读数于波长470nm下进行。 3( 以每分钟吸光度变化值表示酶活性大小，即以ΔA470/min.mg 鲜重表示之。 4( 植物样品中过氧化物酶活性的测定:采用粗天平称取剪碎、混 匀的植株叶片1g,于研钵中加入少许蒸馏水及约0.2gCaCO3,研磨 成匀浆状.转移全部匀浆至100mL容量瓶中并补充体积至刻度,摇 匀.取25mL悬浮液注入50mL量瓶中,用10%硝酸钙溶液稀释至刻 度,摇匀,在定期摇动下浸泡30-40min.经过滤后,采用愈创木酚法测 定过氧化物酶活性[4]. 叶面积测量法 单叶表面积的估算采用坐标纸描绘法,即先随意挑取48片叶描绘在坐标纸上,计算出面积,然后以长(,)×宽(,)为变量,叶面积为依变量进行线性回归,方程式为:,=0.87,,-0.21 ,2=0.98。单叶面积依此公式将叶长、叶宽换算而得。特殊叶面积为单叶面积与单叶重量的比值。单株总叶面积为叶重和特殊叶面积的乘积。叶面积率为单株总叶面积与植株总重的比值。 根形态测定法