癌症肿瘤学：中药蝼蛄提取物对肿瘤细胞的抑制作用初报

癌症肿瘤学：中药蝼蛄提取物对肿瘤细胞的抑制作用初报 中药蝼蛄提取物对肿瘤细胞的抑制作用初报 1122魏道智，宁书菊，陈磊，范尚坦 (1(福建农林大学生命科学院，福州 350002;2(南京军区福州总医院药剂科，福州，350025) 摘要:目的:研究蝼蛄提取物对肿瘤细胞的抑制作用。方法:采用结晶紫染色法和MTT法。 结果:以QGY7703细胞作为受试细胞，与阳性对照相比，12个提取物部分中的第7和第11 部分初筛抑制效果达显著水平;运用HL-60细胞对第7和第11部分的抑制效果进一步实验， 二者均具有显著的抑制作用，第7部分大于第11部分。结论:蝼蛄的提取物第7部分具有 显著的抗肿瘤活性。 关键词:蝼蛄，肿瘤细胞，抑制作用 中图分类号:285.5 文献标识码:A 文章编号: First report of inhibition effect of Lougu(G.orientalis) extracts to cancer cell 1122 WEI Dao-zhi,NING SHu-ju,CHEN Lei,FAN Shang-tan (1 School of life sciences, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, Fujian China.2. Department of pharmacy,Fuzhou General Hospital of Nanjing Military Region,Fuzhou 350025,Fujian China) [Abstract] Objective:To study the inhibition effect of the Louguo(G. orientalis) extract to cancer cell.METH- ODS: The crystal violet decoration method and MTT method were adopted .RESULTS: The QGY7703 cell was to be experimental cell ,comparing with positive control ,the seventh and the eleventh have marked inhibition effect to QGY7703 cell. The HL-60 cell was to be experimental cell for further test, the seventh and the eleventh part have marked inhibition effect to HL-60 cell, the inhibition effect of the seventh part more than that of the eleventh part. CONCULATION: The seventh part of the Louguo(G. orientalis)extract has remarkable inhibition activity to cancer cell . [Key words] Louguo(G. orientalis), Cancer cell, Inhibition effect [1,5,7]蝼蛄的传统功效是消除各类水肿、利两便、除恶疮、消炎等，近年来在 [6][8,12]临床上有新的药用用途发现，如治疗肝癌后期的腹水、尿潴留,泌尿系统结 [13,14][15]石、消化系统肿瘤等。本实验以QGY7703和HL-60细胞为受试细胞，对蝼 蛄提取物的抑制肿瘤细胞作用进行了初步的研究。 【基金项目】福建省自然科学基金项目(C0410014)，福建省教育厅资助项目(JA04188) 【作者简介】魏道智(1960,)，河北景县人，教授，从事药用植物的教学、科研工作。Tel:0591,83788305， Email:wbyning@sina.com 1材料和方法 1.1材料 1.1.1药物和试剂 药物分别用无水乙醇配制成贮液，临用前用RPMI1640培养液稀释。MTT为Serva产品，用PBS溶解成5mg/ml，过滤除菌。10,异丙醇溶液: (w/v)。 异丙醇用PBS稀释 1.1.1.1结晶紫染色液:结晶紫0.5g，40,甲醛8ml，NaCl 0.17g，乙醇2.3ml，加水至100ml，溶解后混匀备用。 1.1.1.2 结晶紫提取液:柠檬酸三钠0.897g，12N HCl 162.5,l，无水乙醇47.5ml，加水至100ml，溶解后混匀备用。 1.1.1.3 阳性对照:(Sigma公司产品)精确称取7.9888g秋水仙碱用重蒸水溶解，定容至50ml，浓度为0.4mol/L，然后用水稀释为400mmol/L溶液。 1.1.2细胞培养 人白血病HL-60细胞、QGY7703肝癌细胞(联合基因公司提供)。细胞用含有10,新生牛血清(NCS，杭州四季青生物工程材料研究所)的RPMI1640培养液(Sigma公司)传代培养。 1.1.3仪器 DG3022型酶联免疫测定仪(第四军医大学和国营华东电子管厂联营制造)。 1.2方法 1.2.1受试样品:东方蝼蛄和华北蝼蛄的95,的醇提取液、东方蝼蛄95,醇提取液的石油醚萃取部分、醋酸乙酯萃取部分、正丁醇萃取部分、石油醚部分的初分部分以及单体部分等12个部分进行药理学活性筛选。 1.2.2对QGY7703细胞的抑制作用(结晶紫染色法) 4 96孔细胞培养板每孔加入QGY7703细胞(1，10个)，在37:C CO孵箱中孵育224 h。加入药物48小时后，结晶紫染色液染色0.5h，洗涤后加入结晶紫提取液100ul，混匀，然后用酶联免疫测定仪测定吸收度值A。 595 1.2.3对HL-60细胞的抑制作用(MTT法) 4 96孔细胞培养板每孔加入100 ,l HL-60细胞(5，10个)，然后加入100,l系列稀释的药物，每一药物浓度为三复孔，实验对照为无药培养液(含药物最大 浓度时的相应溶剂量)。细胞在37:C CO孵箱中孵育48 h后，用MTT法测定细胞2 数，即结束培养前4 h加入MTT 10 ,l，然后将细胞培养上清液弃去，加入10 % 2 异丙醇溶液100 ,l避光放置30 min后，测定吸收度值A值。 570 表1 QGY7703细胞毒理初筛实验结果 Tab 1 Results of cytotoxity experiment on QGY7703 Experimental Concentration CytotoxityA595 drug (µg/ml) (,) Solvent 1 0.750?0.010 1 30 0.735?0.007 2.00 2 30 0.743?0.027 0.90 3 30 0.750?0.013 0.00 Solvent 2 0.471?0.017 4 30 0.450?0.072 4.46 5 30 0.467?0.031 0.85 6 30 0.480?0.035 -1.88 Solvent 3 0.767?0.042 *7 30 0.690?0.031 10.04 8 30 0.751?0.087 2.09 9 30 0.733?0.032 4.43 Solvent 4 1.187?0.047 10 30 1.143?0.146 3.71 *11 30 1.063?0.081 10.47 12 30 1.167?0.057 1.68 **Colchicine 6.4 0.500?0.026 57.88 Note:*P<0.05，**P<0.01 1.2.4 计算 按公式:细胞毒,,A ,A/ A ×100 ,计算细胞毒,。 溶剂药物溶剂 表2 HL-60细胞毒理实验结果 Tab 2 Results of cytotoxity experiment on HL-60 Experimental Concentration Cytotoxity, A 570drugs (µg/ml) Control 0.390?0.035 8.0 0.367?0.023 7.692 40.0 0.340?0.026 12.821 7 ** 200.0 46.154 0.210?0.017 1.6 0.373?0.015 4.359 * 40.0 20.513 11 0.310?0.010 ** 1000.0 41.026 0.230?0.020 ** Colchicine 1.60 43.590 0.220?0.017 Note:*P<0.05，**P<0.01 3 2结果 实验结果见表1，表2。 选取东方蝼蛄和华北蝼蛄的提取物以及各个萃取部分、初分部分进行药理学 实验，体外QGY7703细胞毒理实验的结果表明，受试药物7和11部分有显著的 细胞毒理效果，其余部分无显著作用。以HL-60细胞为受试细胞，对上述两部分 进一步进行多浓度的重复筛选实验，表2的实验结果表明，7和11部分对HL-60 细胞具有显著的细胞毒作用，7部分的细胞毒性大于11部分。7为11部分的进 一步分离、纯化物，对于第7部分的进一步纯化、鉴定工作正在进行。 REFERENCE: [1] Li S Z.Compendium of materia medicine.The last of two volume ,checked book， volume. Beijing:31People’s medical publishing house 1982，2315,2317 [2] Wu W Z.Observation of curative effects on 17 cases of edema treated with Lougu [J]. Jiangsu Journal of Traditional Chinese Medicine(江苏中医)，1961，(1):19,22 [3] Xiyuan hospital Research institute of Traditional Chinese Medicine.Treating experiences of the Zhao Xi-wu. Beijing:Peopole’s medical publishing house(人 民卫生出版社)，1980 [4] Zhang S，Heng B Q，Zhang X L. Toxicity and diuresis effect experiments of the Lougu [J]. Journal of New Traditional Chinese Medicine(新中医药)，1958，9(4):22 [5] Meng J C. Treatment on cirrhosis and abdominal dropsy[J]，Jiangsu Journal of Traditional Chinese Medicine (江苏中医)，1995，16(9):21 [6] Xie D Y.Metacheirisis on children acute neohritis 36 cases with the Lougu [J]. Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine (浙江中医杂志)，1994，29(4):162 [7] Shen H M,LinJQ，Yiang B Z，et al.Treatment on 8 cases retention with herbal medicine and powder of Lougu and amber [J]. Chinese Journal of Integrative Medicine on (中西医结合应用临床急救)，1996，3(1):32 clinical treatment [8] Huang Z M.A complete collection of application of chinese medicinal herb on external cure in practice(实用中草药外治法大全)[M].Fuzhou:Fujian science and technology press，1992 4 [9] Zai J F. Treatment on 36 cases retention after the production with the Lougu [J]. Jiangsu Journal of Traditional Chinese Medicine(江苏中医)，1977，18(7):13 [10]Song C C，Li S Y. Treatment on 30 cases retention of urine with the Lougu [J].Chinese folk therapy(中国民间疗法)，1999，7(7):45 [11] Lu C S，Li C Q. Treatment on retention of urine that caused of blood stasis after the production with the gold flower, angelica sinensis and Lougu [J].New Traditional Chinese Medicine (新中医)， 1996，28(2):63 [12]Wang J X. Clinical observation of treatment on 100 cases stone in urinary system with dissolving stone ball [J]. Hubei Journal of Traditional Chinese Medicine(湖 北中医杂志)，1986，(3):16,18 [13] Luo X H. Clinical summarize of treatment on 39 cases stone in urinary system with Lougu mixture [J]. Hunan Journal of Medicine(湖南医药杂志)，1984，(5):30, 32 [15]Chang Y M. Anticancer Chinese medicine [M]. Spending holiday press. Taibei: 78 Minguo 5