【doc】 成熟与非成熟树突状细胞的表达与声门型喉鳞癌术后复发

【doc】 成熟与非成熟树突状细胞的达与声门型喉鳞癌术后复发 成熟与非成熟树突状细胞的表达与声门型 喉鳞癌术后复发 第26卷第3S期 2005年6月 中山大学(医学科学版) JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES, Vol-26No_3S Jun.2oo5 成熟与非成熟树突状细胞的表达与声门型喉鳞癌术后复发 陈文宽,陈福进,曾宗渊,伍国号,郭朱明,魏茂文,杨安奎,张诠,何洁华,候景辉 (中山大学肿瘤防治中心头颈科,广东广州510060) 摘要:【目的】探讨树突状细胞(dendriticcellDC)与声门型喉癌规范治疗后局部复发的关系.【】收集lll例有完整 病理资料及l临床随诊资料的声门型喉鳞癌病例,用免疫组化技术检测CD83标记成熟的DC,CD1a标记非成熟Dc的表达情 况;半定量癌组织中两种Dc的表达水平与声门型喉鳞癌患者规范治疗后局部复发的关系.【结果】lll例声门型喉鳞癌 组织中CD83+组(DC增多组)30.6%(34/1l1),CD83一组(DC减少组)69.4%(77/1l1).CDla+组(DC增多组)47.5%(53/1l1),CD1 组(DC减少组)52.5%(58/1l1).CD83+组与CD83一组的局部复发率分别为23.5%,25.9%.CDla+组与CD1a一组的局部复发率分 别为15.0%,34.5%.【结论】声门型喉鳞癌中,CDla标记树突状细胞阳性率高,浸润明显者,局部复发率较低.CD83标记Dc 在本组资料中与局部复发无关. 关键词:喉肿瘤;免疫组化:预后 中图分类号:R739.65文献标识码:A文章编号:1672—3554(2005)3S 一0205.03 树突状细胞(dendriticcell.DC)是最重要的抗原呈递细 胞(antigenpresentingcell,APC),可把抗原特异性地呈递给 T淋巴细胞而产生抗原特异性免疫反应.目前鉴定DC主要 用CD83,CDla两个共刺激分子.分别标记成熟与非成熟 DCE.既往对CD83,CDla的研究主要是集中在定性及定位 两方面,故我们拟通过对声门型喉癌组织中CDla,CD83标 记DC表达的半定量分析,了解声门型喉癌组织中的免疫 状况,探讨它与声门型喉鳞癌规范治疗后局部复发的关系. 1材料与方法 1.1研究对象 收集中山大学肿瘤医院头颈科1987年至1997年间收 治的111例术前未经任何抗肿瘤治疗(化疗和/或放疗)的 病例.随访时间至少5年以上,随访资料及病理资料完整. 其中男108例,女3例;年龄34,78岁,中位年龄60岁.T 分期T.31例,T136例,T320例,T24例;N分期N089例, N14例,N:8例;M分期所有病例均为M..临床分期I期 31例,?期27例,?期21例,?期32例;组织学分级:高, 中,低分化者分别为77例,25例,9例.所有病例均按本中 心的喉癌单病种治疗常规处理,根据病情分别行喉部分切 除(包括声带切除,水平半喉切除,垂直半喉切除等术式), 喉全切除术.无失访病例,随访率100%. 1.2试剂和材料 CD83单克隆抗体ffIB15a).购于Santa—Cruz公司,编号 sc一19677.CDla单克隆抗体(1CA04),购于北京中山生物技 术有限公司,编号ZM一0027.SP试剂盒(二抗,三抗试剂), 购于福建迈新生物有限公司,编号Kit-0305/0310. 1.3免疫组化检测 所有病理组织标本均用福尔马林固定,常规石蜡包埋. 对符合上述标准的病例标本进行切片,切片厚度为4m. 免疫组化法染色(SABC法):石蜡切片脱蜡,依次浸泡于 不同浓度的乙醇中,蒸馏水洗涤;体积分数3%H!室温孵 育10min以消除内源性过氧化氢酶;蒸馏水冲洗,PBS液浸 泡5min;微波抗原修复:0.01mol/L柠檬酸钠缓冲液(pH6.0) 作为抗原修复液,置切片于上述抗原修复液中,于微波炉中 加热至沸腾处理10min.取出室温下冷却,PBS液洗3次; 正常山羊血清工作液封闭外源性过氧化氢酶.室温孵育20 min;倾去血清,分别滴加适当浓度一抗50(S-100:1: 80),4qc冰箱中过夜;PBS液洗3次;滴加SP试剂盒中的1: 200SP复合物,37qc孵育20min;PBS液洗3次;滴加DAB— H!O:液显色,显微镜下控制显色时间;苏木素复染,封片. 1.4统计学方法 统计分析采用SPSS10.0统计软件包中的相关软件进 行,取P<0.05认为有统计学意义.主要为检验. 2结果 CDla+及CD83+细胞均染色呈棕黄色.阳性细胞散在 分布于癌巢内,肿瘤周边及正常组织之间.阳性细胞染色以 细胞浆为主,部分细胞核及胞膜也有染色.阳性细胞中以 DC为主,可见胞体形状不规则,向外伸出长短不等的突起, 伸入到癌巢当中和瘤周结缔组织中.部分周边神经细胞或 淋巴细胞也有染色.CDla+DC主要分布在癌巢中(图1),而 CD83+DC主要分布在癌周组织中(图2).在癌巢及癌周组 织几乎每一个高倍视野下都可以检测到阳性细胞.经确认 的DC从IPrtPF(高倍视野)到20/HPF不等. 分别于每一切片取阳性细胞数最多区域观察,共观察 30个高倍视野(×400HPF),观察计数DC,计算每个HPF 的DC平均数. CDla指标根据每个HPF中DC的数目进行分组:小于 10/HPF者为DC减少组.大于或等于10/HPF者为DC增多组. 收稿日期:2005—03-08 作者简介:陈文宽(1972一),男,广东肇庆人,硕士,主治医师.E—maihchenwenkuan@163.corn 206中山大学(医学科学版)第26卷 图1CDla+DC免疫组化染色(SABC.x400) 图2CD83+DC免疫组化染色(SABC.><400) 根据以上标准,可以得:~112组数据:DC减少组;DC增多组. DC减少组定为阴性(一),DC增多组定为阳性(+)121.CD83 按同样方法,将标准调整为3/HPF,DC增多组定为阳性 (+),DC减少组定为阴性(一)121.所有切片都采用双盲法由2 位病理科医生阅片.2人结论一致则结果.如果有争议 则请第3位病理科医生阅片,以两个相同意见为准.按照前 面所述的判断标准,CD83+组为30.7%(34/1l1),CDla+组为 47.5%(53/1l1). 2.1CD83+DC与声门型喉癌患者肿瘤局部复发的关系 CD83+组与CD83一组的局部复发率分别为23.5%, 25.9%.=1.952,P>0.5,详见表1. 2.2CDla+DC与声门型喉癌患者肿瘤局部复发的关系 CDla+组与CDla一组的局部复发率分别为15.1%, 34.5%.x=142.2,P<0.005,详见表2. 表1CD83+DC与肿瘤局部复发关系的4格表资料 3讨论 在抗肿瘤免疫中.细胞免疫是主要的形式,只要机体产 生有效的抗肿瘤细胞免疫应答,肿瘤的发展就更容易控制, 局部复发的机会就相对较低.树突状细胞是一种重要的抗 原递呈细胞l引,介导着机体的细胞免疫,进而抑制肿瘤的发 表2CDIa+DC与肿瘤局部复发关系的4格表资料 展和/或肿瘤复发转移. CDla+DC是CD34+造血祖细胞(Hematopoietic progenitorcellHPC)在GM—CSF和TNF—d作用下分化出来 的前体DC.CD83是一种相对分子质量约为43000的膜糖 蛋白,属于免疫球蛋白超家族成员.目前,CD83的功能还不 是很清楚,但其表达方式和结构特点提示它在抗原呈递和 细胞间反应中有重要作用14,51. 本研究中,免疫组化的表达情况是,CD83+组为30.6% (34/1l1),CDla+组为47.5%(53/1l1).CD83+组与CD83一组的 局部复发率分别为23.5%,25.9%.CDla+组与CDla一组的 局部复发率分别为15.1%,34.5%.由上述结果可看出,非成 熟DC高表达时,机体的局部细胞免疫功能良好,机体抗肿 瘤的潜能储备较多.肿瘤局部控制良好,局部复发率较低. 成熟DC的表达指标CD83的表达情况在本研究中未 能体现出与肿瘤局部复发的关系,这可能与以下两方面的 原因有关.首先,在本实验中,CD83的总体表达水平较低为 30.6%(34/1l1),再分组可能是统计偏倚而影响结果的原因 之一.另外,成熟DC与非成熟DC是DC演变的过程的两 个阶段,朗格罕氏细胞(Langerhanscells,LC)是未成熟的 DC,具有一定的吞噬功能.LC摄取局部抗原后表型发生变 化.通过淋巴途径向淋巴结迁移,在迁移过程中LC逐渐失 去摄取抗原功能而抗原递呈功能增强.最后发育成为成熟 的DCt61.肿瘤抗原的存在,诱导抗肿瘤免疫启动的,刺激机 体的骨髓相应地产生更多的DC,而处于增生活跃期的DC 系.理应以非成熟的形态学为主,这可能是CDla在本组数 据中对肿瘤局部复发情况更有说服力的原因. 肿瘤局部复发受多方面的原因影响,无论如何,接受统 一 标准的规范化手术后复发,局部的免疫状况应该是重要 的原因之一.肿瘤的局部免疫功能同样也受到众多因素的 左右.CDla及CD83这两个指标目前较多的研究仍是以局 部分布及半定量分析为主,有关的结果仍有待进一步的精 细分析及临床应用的检验. 参考文献 [1] 【2] [3] [4] 曹华,张锐,裴雪涛.树突状细胞的生物学特性及临床 应用[J1.基础医学与临床,2000,20(6):485—7. 1wamotoM,ShinoharaH,MiyamotoA,eto1.Prognosticvalue oftumor-infiltratingdendriticcellsespressingCD83inhuman breastcarcinomas.fJ】.Cancer,2003,】04(】):92—7. RidgeJP,FuchsEJ,MatzingerP.Neonataltolerancerevisited: turningonnew-bornTcellswithdendriticcellsfJ1.Science, 1996.271f5256):1723—6. surface Zhoukl,Schwa~ingR,SmithHM,eto1.Anovelcell— 第3S期中山大学(医学科学版)207 【5]5 moleculeespressedbyhumaninterdigitingreticulumcells, Langerhans,cellsandactivedlymphocytesisanewmemberof theimmunoglobinsuperfamily【J】JImmunol,1992,149(2):735- 42. KozlowEJ,WilsonGL,FoxCH,et以SubtractivecDNAcloning ofanovelmemberoftheIggenesuperfamilyexpressedat highlevelsinactivatedBlymphocytes【J】.Blood,1993,81(2) :454-61. 【6】AdemaGJ,HartgersF,VerstratenR,et以Adendricfic--cell— derivedehemokinethatpreferentiallyattractsnativeTceils[J]. Nature,1997,387(6634):713-7. 慢性心力衰竭患者贫血现象的初步临床分析 袁桂仪.,伍卫.,李益清,周淑娴t,方昶t (中山大学附属第二医院1.心内科,2.血液内科,广东广州510120) (编辑黄小延) 摘要:【目的】探讨慢性心力衰竭患者的贫血现象及其影响因素.【方法】回顾性分析276例慢性心力衰竭患者的临床 资料,其中男151例,女125例;NYHA心功能?及?级l15例(41.7%);平均年龄(69.2~11.O)岁.观察慢性心力衰竭患者的贫 血现象及其影响因素.【结果】?276例患者中,81例(29.4%)诊断为贫血(血红蛋白101.5g/L~13.0g,L);?贫血患者中以女 性,NYHAm或?级者居多(l<O.05),血清肌酐水平较高(尸<0.01), 血清白蛋白及低密度脂蛋白胆固醇水平较低(l<O.O1);? NYHA分级与血红蛋白浓度呈弱负相关;?年龄,基础心脏病,是否合并糖尿病,左室射血分数以及左室舒张末内径在贫血与 非贫血患者之间的差异无统计学意义.【结论】慢性心力衰竭合并贫血的现象在临床上较为常见.以女性患者多见.心功能及 肾功能损害均较严重,同时存在血白蛋白,低密度脂蛋白胆固醇水平偏低等营养不良的表现. 关键词:心力衰竭,充血性:贫血 中国分类号:R541.6;R556文献标识码:A文章编号:1672—3554(2005)3S.02o7.O3 众所周知,贫血在许多慢性疾病中十分常见,但慢性心 力衰竭合并贫血的现象却没得到临床的充分重视.有研究 发现,贫血在慢性心力衰竭患者中有一定的发病率.由于各 研究中心对诊断慢性心力衰竭所合并的贫血暂无统一标 准,所研究的对象病情严重程度亦不同,故已经报道的慢性 心力衰竭合并贫血的发病率波动较大(9.9%,55.6%)[11.本 文了276例在我院住院的慢性心力衰竭患者的贫血情 况,为临床重视这一问题提供依据. 1对象与方法 1.1对象 2003年1月至2004年12月在中山大学附属第二医 院心血管内科住院的连续病例共276例.人选标准:?首次 确诊慢性心力衰竭(NYHA分级?级或以上);?年龄?14 岁;?排除各种原因引起的单纯性右心衰竭;?排除妊娠. 根据我国贫血的定义,以成年男性血红蛋白<120g几,成年 女性(非妊娠)血红蛋白<110g,L为标准分为贫血组与非 贫血组,其中贫血组人选81例,非贫血组人选195例. 1.2观察指标 患者的一般情况(包括年龄,性别),基础心脏病,是否 合并糖尿病,心功能分级,心率,平均动脉压[(收缩压+2x舒 张压),3],血常规,血生化及超声心动图结果. 1.3统计学分析 计量资料用均数?标准差表示.计数资料以百分率表 示.采用t检验,检验,直线相关分析,P<O.O5认为差异 有统计学意义. 2结果 2.1一般临床特点 2.1.1一般情况年龄为18—92岁.其中男151例 (54.7%),女125例(45.3%). 2.1.2纽约心脏学会(NYHA)心功能分级276例中. NYHAII级58.3%(161例),III级27.9%(77例),IV级13.8% (38例). 2.1.3基础心脏病冠心病77.9%(215例).心瓣膜病8.O% (22例),扩张型心肌病6.1%(17例).其余8.0%(22例)包 括肥厚型心肌病,高血压性心脏病,先天性心脏病及甲亢性 心脏病. 2.1.4超声心动图左室舒张末内径(52.2~10.0)mm.左室 射血分数为56.4%?12.9%. 2.1.5血红蛋白浓度276例血红蛋白(124.8~19.8)g/L,其 中81例诊断为贫血,占29.4%.在贫血病例中,11例 (13.6%)怀疑或诊断为缺铁性贫血,18例(22.2%)合并肾功 能损害,2例诊断为晚期恶性肿瘤.1例诊断为铁粒幼细胞 性贫血,而其余49例(60.5%)贫血原因未明确. 2.2贫血患者的临床特点 收稿日期:2005.04.06 作者简介:袁桂仪(1976一),女,广东广州人,医师,硕士生;伍卫,教授,通 讯作者.E.mail:wu.wei@medmail.cora.en.