免疫胶体金稀释液的五原则

免疫胶体金稀释液的五原则 制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现原则如下: 1、合适的离子种类和强度 免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应用时还要面对千差万别的样品，原则上需要稀释在合适PH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有Tris和PB，也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时，有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因2+为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制，例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用，教科式的NaCl调试最适标记条件就是例子。 2、大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架 这个其实是冻干工艺的理论基础，适用于胶体金干燥工艺，对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个热力学吸热过程，实验表明免疫胶体金的真空干燥是一个先冷冻再升华的过程，十分类似冻干。无纺布的工艺由于干燥过程快，多数采用烤干的工艺，但是大分子的骨架作用仍然是对产品的释放速度和比率有很大帮助。常用大分子物质如PEG4000、PEG20000、PVP等，建议尽量从中选择一种添加使用。 3、小分子物质对蛋白活性保护 蛋白储存常用的甘油、蔗糖、海藻糖、各类低聚糖等，对产品的储存稳定性有帮助，忽略这部分物质的添加可能限制产品从实验室走生产和市场。这类物质也是冻干细胞常用的。 4、惰性蛋白 这类物质的功能就更复杂。首先还是保护目的蛋白的活性，也维持胶体金的胶体稳定，它们是消除非特异性的封闭物质，也起着有分散胶体金颗粒的骨架作用。常用有BSA、OVA、Casein，其他廉价蛋白似乎不太好找，脱脂奶粉个人建议不用，质量太难控制了，当然如果大家已经在用而且效果不错，也没有必要过于担心。 5、表面活性剂 这个东西在这个产业里可是万万不能缺少，但是吸附材料已经用表面活性预处理的，也可以不拘泥于添加在免疫胶体金稀释液里。一般情况下，Tween20就可以了，其实蛋白质复性常用的非离子型表面活性剂都可以一试，前一段时间某位高人说TritonX-100等可能会干扰蛋白的N末端建议不要用，我听了不是很理解，在这里请高人指点。 6、其它 产品种类千差万别，以上5类物质外，传说还有一些可以“提高产品敏感性”、“提高产品检测线性范围”、“强制转换毒品检测最佳cut-off范围”、“HAMA效应抑制”和”线条时间深度变化终止“等神秘添加物，从理论上不排除存在的可能，但是往往一种“神物”有效的范围十分狭窄，也就是说一种“神物”可能只适用于一个公司一种抗体的一个产品，换个环境就无效了。寻找神物的工作往往是研发型的大公司的资深技术人员，而对神物的控制往往也是如同企业一级机密。