周围型肺鳞癌、腺癌CT征象及OPN和VEGF-C表达的对照研究

周围型肺鳞癌、腺癌CT征象及OPN和VEGF-C表达的对照研究 周围型肺鳞癌、腺癌CT征象及OPN和VEGF-C表达的对 照研究 三峡大学 硕士学位论文 周围型肺鳞癌腺癌CT征象与OPN和VEGF-C表达的对照研究 姓名吴强 申请学位级别硕士 专业免疫学 指导教师谭光喜 20090301 , 内 容 摘 要 目的 研究周围型肺鳞癌腺癌中骨桥蛋白osteopontin OPN 和血管内皮生长因 子 C vascular endothelial growth factor C VEGF-C 的表达与其 CT computed tomography 征象的关系 方法 收集2003 年7 月至2007 年4 月在三峡大学第一临床医学院暨宜昌市中心人民 医院胸心外科行手术切除术前行胸部CT 扫描术后经病理诊断证实且术前未经任 何化疗放疗的周围型肺鳞腺癌患者42 例其中鳞癌32 例腺癌 10 例运用免 疫组织化学PV9000 二步法对42 例经病理证实的周围型肺鳞腺癌病理切片进行 染色检测其OPN 和VEGF-C 的表达其阳性表达与其CT 征象的关系 结果 ?在本组42 例肺癌中OPN 的阳性表达率为6905 2942VEGF-C 的阳性表 达率为7143 3042 ?OPN 与VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的阳性表达与肺癌的组 织类型分化程度无明显的统计学差异P,005但与有无纵隔淋巴结转移有显著 2 地统计学差异P,005OPN 与VEGF-C 的表达呈正相关χ 5893P,005 ?OPN 的表达与肿瘤的大小深分叶征棘状突起胸膜外脂肪线消失及肺门和或 纵隔淋巴结肿大等CT 征象有关P,005而与毛刺征空泡征及血管集束征无关 P,005?VEGF-C 的表达与肿瘤的大小深分叶征棘状突起血管集束征及 肺门和或纵隔淋巴结肿大等CT 征象有关P,005而与毛刺征空泡征及胸膜 外 脂肪线消失无关P,005 结论 OPN 和VEGF-C 的阳性表达与肺鳞癌腺癌的淋巴结转移密切相关二者可能 发挥协同作用OPN 和VEGF-C 的高表达可能是周围型肺癌具有深分叶征棘突征 和纵隔淋巴结肿大等CT 征象的分子生物学基础之一 关键词肺肿瘤肺癌 体层摄影术 X 线计算机 骨桥蛋白 血管内皮生 长因子C II , Abstract Objective To investigate the correlation between CT features and the expression of osteopontin OPN and vascular endothelial growth factor C VEGF-C in peripheral lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma Methods Forty two patients with peripheral lung cancer who consecutively underwent radical surgical resection at the Department of Cardio-Thoracic Surgery of first clinical medical college of China Three Gorges University from July 2003 to April 2007 and were examined with chest CT scan before operation and confirmed by pathology postoperatively were restrospectively studied No patient had received chemotherapy or radiotherapy before surgical resection The study samples consisted of 32 squamous cell carcinoma and 10 adenocarcinoma The expression of OPN and VEGF-C was assessed immunohistochemically with PV-9000 polymer detection system technique in 42 cases of peripheral lung carcinoma The relationship between the results and preoperative CT signs was analyzed Results ? The positive rate of OPN and VEGF-C expression in pulmonary carcinoma tissues was 6905 2942 and 7143 respectively 3042 ? The expression of OPN and VEGF-C in lung cancer tissues was not related to histological type and cell differentiation The positive expression of OPN 9130 and VEGF-C 8696 in lung carcinoma with pulmonary hilar andor mediastinal lymphous metastasis were much higher than without metastasis 4211 and 5263 respectively P ,005 There was 2 remarkably positive correlation between the expression of OPN and VEGF-C χ 5893 P ,005 ? The expression of OPN was related to the tumour size deep lobulation spinous protuberance disappearance of extrapleural fat line and intumescence of mediastinal lymph node ? The expression of VEGF-C was related to the tumour size deep lobulation spinous protuberance vascular convergence signs and intumescence of pulmonary hilar andor mediastinal lymph node But OPN and VEGF-C were not related speculation sign and vacuole sign Conclusion The positive expression of OPN and VEGF-C has been associated with pulmonary hilar andor mediastinal lymphatic metastasis in lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma The interrelationship of OPN and VEGF-C was coordinative with III , development and metastasis of lung carcinoma OPN and VEGF-C might be one of molecular biologic basis of the CT signs of peripheral lung carcinoma with deep lobulation spinous protuberance and intumescence of mediastinal lymph node and so on Key words lung neoplasmslung cancer Tomography X-ray computed OPN VEGF-C IV , 英文缩略词表 缩写 英文全称 中文全称 OPN osteopontin 骨桥蛋白 VEGF vascular endothelial growth factor 血管内皮生长因子 CT computed tomography 计算机断层扫描 PBS phosphate balance solution 磷酸盐缓冲液 RGD arginine-glycine-aspartic acid 精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 34 , 三峡大学学位论文原创性声明 本人郑重声明所呈交的学位论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作 所取得的成果除文中已经注明引用的外本论文不含任何其他个人或集体已经 发表或撰写过的作品成果对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明 确方式标明本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担 学位论文作者签名 日 期 I , 引 言 目前肺癌在全世界范围内已成为最常见的恶性肿瘤之一也是最主要的恶性肿 瘤死因肺癌具有侵袭性强转移早预后差5年生存率低等临床病理特点近年 来随着分子生物学技术的迅速发展通过检测肿瘤相关基因的存在分析肿瘤相关 基因的缺陷和表达情况及其与肿瘤分化浸润和转移之间的关系使我们对形成肺癌 多样性的组织病理特性的分子生物学机制的认识逐步深入分子生物学诊断技术在肺 癌的诊断及判断预后方面有着重要作用CT扫描技术特别是螺旋CT spiral CT SCT 由于具有扫描速度快分辨率高呼吸伪影少并可通过容积扫描三维重建数据采 集及任意层厚任意方向的重建技术使周围型肺癌瘤体内部结构边缘特征及 瘤体 与周围血管支气管的相互关系显示的更加清楚CT常表现出一些特殊的征象如深分 叶征棘突征毛刺征空泡征血管集束征淋巴结转移胸膜外脂肪线消失等 这些征象对肺癌的诊断分期预后判断及治疗方式选择等方面有重要参考价值现 在探讨肺癌浸润生长及转移的医学影像学表现与形成这种表现的病理组织分子生物 学特性之间相互联系是医学影像学病理学及肿瘤分子生物学领域的研究热点之一 肺癌的发生发展同其他恶性肿瘤一样是一个多因素多阶段和多基因异常的 过程浸润与转移是影响肺癌患者预后的重要因素骨桥蛋白OPN是一种分子量 [1] [2] 为34kDa 的细胞外基质蛋白系磷酸化酸性糖蛋白 具有骨矿化 细胞黏附化 [3] 学趋化细胞迁移和细胞转化免疫调节等多种功能 在肿瘤细胞巨噬细胞等多 种细胞中都有表达[4]OPN 虽然在结构上属于细胞外基质蛋白是一种黏蛋白但由 于含有一个保守的RGD arginine-glycine-aspartic acid氨基酸序列[256] 人们 更多地把它作为一种具有调节细胞迁移组织修复细胞骨架重塑介导细胞免疫的 多功能细胞因子在炎症进展及恶性肿瘤的转移过程中OPN 广泛参与其生理和病理 过程调节维持和重构组织完整性刺激细胞运动化学趋化和抑制细胞凋亡[7-11] [412] 与多种恶性肿瘤的发生发展转移和复发等有关 在人类多种肿瘤中骨桥蛋 [1314] [15] [16] [17] 白或基因表达水平是增高的包括乳腺癌 肺癌 前列腺癌 结肠癌 卵 巢癌[18] [19] 和胃癌 等提示骨桥蛋白可作为癌症治疗的一个特定靶点 血管内皮生长因子C VEGF-C是目前发现的唯一特异性促淋巴管内皮生 长因子 也是肿瘤血管生成标志物在肿瘤血管生成淋巴管生成及肿瘤转移中起着重 要作用 1 , 许多肿瘤细胞都表达 VEGF-C其表达水平与肿瘤血管生成及淋巴结转移呈正相关 [20] Li 等 对76 例非小细胞肺癌non-small cell lung carcinomaNSCLC 的研究发现 VEGF-C 的表达与VEGFR-3 的表达呈正相关而与肿瘤细胞的分化程度呈负相关 VEGF-C 和VEGFR-3 可增加肿瘤组织中淋巴管的密度促进淋巴管侵袭和淋巴结转 移VEGF-C 表达阳性患者的预后明显较阴性者差5 年生存率分别为 1272和 4275 表明VEGF-C 和VEGFR-3 可促进NSCLC 淋巴管生成参与了肺癌的发生 [21] 发展VEGF-C 可能是患者预后不良的有用指标之一Su 等 在59 例肺腺癌的研究 中发现VEGF-C 的表达和肿瘤组织中的淋巴管密度有密切关系提示VEGF-C 的表 达可促进肿瘤淋巴管生成 OPNVEGF-C 在NSCLC 中的表达和对肿瘤的生长转移及预后的生物学作用 已逐渐被人们所认识和肯定由于肿瘤的分子生物学特性决定其生长方式形态特征 恶性程度复发和转移而由肿瘤分子生物学特性所决定的病理组织大体形态改变是 CT 征象的基础肺癌组织的大体形态改变便成为连接肿瘤分子生物学特性与CT 表 现之间的纽带而且CT 检查又是评价肺癌形态和密度特征的最佳影像学手 段之一 但是目前人们对影响肺癌发生发展以及预后的一些特异性蛋白分子在肿瘤组织中 的阳性表达与肺癌CT 征象之间联系的认识仅只是一个开端因此我们选择骨桥蛋 白OPN 血管内皮生长因子C VEGF-C 在周围型肺鳞癌腺癌中的表达与CT 征象之间的关系进行对照研究旨在探讨周围型肺鳞癌腺癌的CT 征象形成的分子 生物学机制以期用无创的影像学手段为临床更加准确地评估周围性肺癌的恶性生物 学特性和制定更合适的治疗方式提供更多的帮助 2 , 1 周围型肺鳞腺癌CT 征象与OPN 和VEGF-C 表达的对照研究 11 材料与方法Materials and Methods com 材料 com1 标本来源及临床资料 本研究所采用的42例病理标本和CT 图像资料及其他临床资料均来自三峡大学第 一临床医学院暨宜昌市中心人民医院胸心外科2003 年7 月至2007 年4 月间术前拟诊 为周围型肺癌术后病理诊断证实为肺癌的住院病人入选标准必须同时具备下列 条件1患者术前在本院有胸部CT 检查图像资料且术前拟诊为周围型肺癌2术 前未做放射治疗或抗肿瘤化学药物治疗3在本院作手术行肿瘤切除且在本 院留存 有肿瘤组织标本及肺门和或纵隔淋巴结标本的患者4术后经病理或和免疫组化 结果证实且为非小细胞肺癌本组42 例肺癌患者中男33 例女9 例年龄28, 78 岁平均582 岁病理组织学类型鳞癌32 例腺癌10 例根据肿瘤分级标准 依据组织结构异型性及核分裂像等分为高中低分化组其中高分化10 例 中分化18 例低分化14 例 com2 主要试剂 1PV-9000 免疫组化检测试剂盒 由内源性过氧化物酶阻断剂3H O 去离子 2 2 水聚合物辅助剂Polymer Helper 试剂 1 及辣根酶标记羊抗兔小鼠IgG Poly Peroxide-anti-MouseRabbit IgG 试剂2 组成试剂1 及试剂2 均为即用型 2DAB 显色试剂盒试剂A 为缓冲液试剂B 为DAB 底物试剂C 为DAB 显色剂 3即用型骨桥蛋白 OPN 鼠抗人单克隆抗体克隆系OP3N 4即用型血管内皮生长因子-C VEGF-C 兔抗人多克隆抗体 以上试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司为美国GBI 公司产品 5抗原修复液枸橼酸缓冲液原液购自福州迈新生物技术开发公司 6其他粘片剂 APES二甲苯梯度稀释乙醇100 95 80 70001M PBSPH72-74苏木精双蒸水等由三峡大学医学院免疫组化实验室备用 com3 主要仪器及设备 GE Light Speed QXi CT 机4i 美国通用电气公司 Advantage Windows 40 GE 工作站 美国通用电气公司 3 , LeicaTP1020 自动脱水机 德国 Leica1125EG1150 包埋机 德国 MICROM HM340 切片机 英国 LZ TPJ 摊片烤片机 中国常州 Galanz 微波炉 中国 SZ-93 自动双重水蒸馏器 上海亚荣生化仪器厂 光学显微镜 日本Olympus 公司 家用冰箱 海尔公司 电热恒温鼓风干燥箱 GZX-GF-4045-S 型 上海跃进医疗器械厂 电子分析天平 Sartorius 公司 微量移液器 德国EPPENDORF 公司 Leica Qwin 多功能显微镜及图像分析系统DMR 型 德国 com 方法Methods com1 免疫组化检测实验步骤 1常规组织切片制作所有标本均经 10的中性福尔马林常规石蜡包埋用 英国产MICRO HM340E 型组织切片机将收集的用石蜡包埋的肺癌组织块切成 厚度5 μm 的薄片每个组织块切6-8 片载玻片预先涂以APES 粘片剂作防脱片处理 2 切片脱蜡和水化切片先入二甲苯脱蜡2 次10min次再入100乙醇2 次 95乙醇2 次10min次80和70乙醇各一次10min次最后置于蒸馏水中浸泡 1min 3抗原修复将组织切片置于切片架上放入盛有抗原修复液原液加双蒸水按 1100 比例稀释而成的烧杯中让抗原修复液浸没切片然后将烧杯放进微波炉 按以下设置行抗原修复先设置100?待温度升至100? 后在微波炉中放置5min 再将温度设置为 90? 待温度升至90? 后再在微波炉中放置 10min然后取出烧 杯让其自然冷却至室温再取出切片先用蒸馏水冲洗2 次随后用PBS 冲洗2 次 每次间隔3min 4在切片上滴加3H O 去离子水50 μl 片孵育10min以阻断内源性过氧化物酶 2 2 然后用PBS 冲洗3 次每次2min每次间隔3min 4 , 5滴加一抗37? 孵育2 小时然后PBS 冲洗2min×3 次 6滴加试剂137? 孵育 20min 然后PBS 冲洗2min×3 次 7滴加试剂237? 孵育 20min 然后PBS 冲洗2min×3 次 8应用DAB 溶液显色取蒸馏水1ml再取DAB 显色试剂盒中的ABC 液各一 滴按顺序加入蒸馏水中混匀后取50-100 μl 滴加到组织切片上等待显色 镜下 观察染色程度以控制反应时间约2-5min 之间然后用自来水充分冲洗以终止显 色反应 9用蒸馏水冲洗切片后再用苏木精复染约1 分钟左右再水洗 10脱水透明及封片组织切片经盐酸酒精脱水干燥二甲苯透明及中性树脂 胶封片 每批切片染色均设PBS 代替一抗作阴性对照用已知的阳性片作阳性对照另外 每份标本取一张片作HE 染色用作常规组织病理学观察和复核诊断 com2 CT 扫描方法 患者取仰卧位于CT 诊断床上双前臂交叉抱头头先进体位扫描范围从 肺尖至 膈顶一次屏气完成扫描层厚5mm间距5mm 肺窗观察肿瘤边缘征象及肺野变化 纵隔窗观察肿瘤边缘征象内部结构纵隔和肺门淋巴结情况 com3 免疫组化结果判断 OPNVEGF,C 阳性染色主要为细胞质内出现棕黄色颗粒每张片随机观察5 个 高倍视野每个视野计数100 个细胞计算阳性细胞数OPN 依据阳性染色细胞占癌 [22] 细胞总数的比例共分为4 级 阴性-无棕黄色染色或染色阳性细胞数,10 弱阳性阳性细胞数10-25中等阳性阳性细胞数25-50强阳性 [23] 阳性细胞数?50VEGF,C 阳性强度判断标准 癌细胞脉管内皮细胞质呈棕黄 色为染色阳性细胞肺癌细胞VEGF,C 表达强度按癌细胞免疫组化染色着色深浅计 分0 分为无色1 分为淡黄色2 分为棕黄色3 分为棕褐色按阳性细胞所占百分 比打分阴性为0 分阳性细胞,10为1 分阳性细胞数11-50为2 分阳性细胞 数,51为3 分染色强度与阳性细胞分比的乘积0-2 分为-3-4 分为5-7 分 8-9 分 com4 周围型肺癌CT 征象评定标准 5 , 深分叶征是指肿瘤边缘凹凸不平呈花瓣样突出弦距与弦长之比?04 棘突 征是指纵隔窗表现为自肿瘤边缘突向肺野形态介于分叶与毛刺之间呈尖角样的棘 状突起毛刺征表现为自肿瘤边缘向周围肺伸展呈放射状无分支的细短线条影 纵隔淋巴结肿大指纵隔淋巴结短径,10mm 或长径,15mm血管集束征指肺癌肿块与 肺内血管的关系包括以下三种CT 表现?肺血管进入肿块内或穿过肿块?肺血 管受牵拉向肿块移位?肺血管到达肿块边缘截断CT 征象判定采用双盲法由两 位副主任医师以上职称的放射科医师分别阅片对本组42 例周围型肺癌CT 征象逐一 分析并记录每一病例肿瘤大小深分叶征棘状突起毛刺征血管集束征空洞 胸膜外脂肪线消失纵隔淋巴结肿大等征象的有无意见不一致时由两位医师共同讨 论决定 com5 对免疫组织化学检测结果与CT 征象列表汇总 按照患者姓名将每一病例的免疫组化检测结果与CT 征象登记列表汇总以 便统计学分析 com 统计学方法 应用 2 χ检验wilcoxon 非参数秩和检验对数据进行处理P,005 表示有显著 差异 12 结果 Results com OPN 与VEGF-C 在肺鳞腺癌组织中的表达及与病理特征的关系 com1 OPN 在肺鳞腺癌组织中的表达 OPN 免疫组化染色呈棕黄色或棕褐色的片状和或颗粒状其表达定位于肺癌细 胞及邻近的巨噬细胞的胞浆内肺癌组织中OPN 的阳性表达率为69052942OPN 在肺鳞癌中的表达率为6563 2132 肺腺癌中的阳性表达率为80 810在有 肺门纵隔淋巴结转移组的阳性表达率为 9130 2123显著高于无淋巴结转移组 4211 819 见图1A-B com2 VEGF-C 在肺鳞腺癌组织中的表达 VEGF-C 在肺癌细胞的胞浆膜特异性高表达呈棕色片状或颗粒状在肺 癌组织 中的阳性表达率为7143 3042 其中在肺鳞癌的阳性率为6875 2232 肺腺癌 中的阳性表达率为80 810在有肺门纵隔淋巴结转移组的阳性表达率为8696 2023明显高于无淋巴结转移组5263 1019见图2A-B 6 , com3 OPN 与VEGF-C 在肺鳞腺癌组织中的表达与病理特征的关系 OPN 与VEGF-C 在肺鳞癌腺癌组织中的表达与其病理类型分化程度淋巴结 转移的关系见表 1112OPN 和VEGF-C 的阳性表达在肺癌不同组织类型间及不同 细胞分化程度间差异无显著统计学意义P,005但在有淋巴结转移组表达显著高 于无淋巴结转移组P,005 表11 OPN 表达与肺鳞腺癌病理特征的关系 OPN 2 例数 χ值 P 值 , ， 组织类型 鳞癌 32 11 21 0737 ,005 腺癌 10 2 8 分化程度 高分化 10 3 7 0089 ,005 中分化 18 6 12 低分化 14 4 10 淋巴结转移 有 23 2 21 11784 ,001 无 19 11 8 2 注χ检验 表12 VEGF-C 表达与肺鳞腺癌病理特征的关系 VEGF-C 2 例数 χ值 P 值 , ， 组织类型 鳞癌 32 10 22 0473 ,005 腺癌 10 2 8 分化程度 高分化 10 1 9 3096 ,005 中分化 18 5 13 低分化 14 6 8 淋巴结转移 有 23 3 20 6007 ,005 无 19 9 10 2 注χ检验 com 周围型肺鳞癌腺癌 CT 征象与 OPN 和VEGF-C 表达的关系 com1 周围型肺鳞癌腺癌 CT 征象与 OPN 表达的关系 在本组周围型肺鳞癌腺癌病例CT 征象中肿瘤大小直径,30cm深分叶征 棘突征胸膜外脂肪线消失及纵隔淋巴结肿大与OPN 的阳性表达均有显著统计学意义 P,005而毛刺征空泡征血管集束征与OPN 的阳性表达无统计学意义P, 005见表13 图3A-D图4A-D 7 , 表13 CT 征象与OPN 表达的关系 OPN , , CT 征象 例数 Z 值 P 值 - 肿瘤大小 ,30cm 32 9 8 7 8 2010 ,005 直径 ?30cm 10 5 4 1 0 深分叶征 有 25 4 6 8 7 2348 ,005 无 17 9 3 3 2 棘状突起 有 31 11 8 8 4 2043 ,005 无 11 2 1 3 5 毛刺征 有 25 6 6 6 7 1220 ,005 无 17 7 3 5 2 血管集束征 有 17 5 3 4 5 0676 ,005 无 25 8 6 7 4 胸膜外脂肪线消失 有 15 2 3 3 7 2582 ,005 无 27 11 6 8 2 空泡征 有 7 3 2 1 1 0245 ,005 无 35 10 7 10 8 肺门和或纵隔淋巴结 有 29 6 6 10 7 2028 ,005 肿大 无 13 7 3 1 2 注,wilcoxon 非参数秩和检验 com1 周围型肺鳞癌腺癌 CT 征象与 VEGF-C 表达的关系 VEGF-C 的阳性表达与肿瘤大小直径,30cm深分叶征棘突征血管集束 征及纵隔淋巴结肿大等CT 征象有显著统计学意义 P,005 而与毛刺征胸 膜外脂 肪线消失空泡征无统计学意义P,005见表14 图3A-D图4A-D 表14 CT 征象与VEGF-C 表达的关系 VEGF-C , , CT 征象 例数 Z 值 P 值 , 肿瘤大小 ,30cm 32 6 6 10 10 3531 ,005 直径 ?30cm 10 6 2 2 0 深分叶征 有 25 4 4 9 8 2453 ,005 无 17 8 4 3 2 棘状突起 有 31 7 4 11 9 2206 ,005 无 11 5 4 1 1 毛刺征 有 25 7 5 6 7 0385 ,005 无 17 5 3 6 3 血管集束征 有 17 2 2 7 6 2507 ,005 无 25 10 6 5 4 胸膜外脂肪线消失 有 15 5 1 5 4 0122 ,005 无 27 7 7 7 6 空泡征 有 7 2 2 1 2 0158 ,005 无 35 10 6 11 8 肺门和或纵隔淋巴结 有 29 7 3 10 9 2098 ,005 肿大 无 13 5 5 2 1 注,wilcoxon 非参数秩和检验 8 , com 肺鳞癌腺癌中OPN 与VEGF-C 表达的关系 本组42 例患者中OPN 阳性表达29 例其中VEGF-C 阳性表达24 例而 13 例 2 OPN 阴性的患者中VEGF-C 阳性表达6 例与VEGF-C 的表达呈正相关χ 5893P ,005见表15 表15 肺鳞癌腺癌中OPN 与VEGF-C 表达的关系 VEGF-C 2 OPN 合计 χ值 P 值 ， , ， 24 5 29 5893 P,005 , 6 7 13 合计 30 12 42 2 注χ检验 com 附图 图1A-1B OPN 分别在肺鳞癌腺癌中的阳性表达 棕黄色颗粒位于细胞浆免疫组化PV-9000 二步法×400 图2A-2B VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的阳性表达 棕黄色颗粒位于细胞浆免疫组化PV-9000 二步法×400 9 , 图3A-D 为同一病例左上肺鳞癌图3A 及图3B 分别为OPN VEGF-C 免疫组化染色 ×400 显示肿瘤细胞浆呈棕黄染色 图3C-D 为CT 肺窗和纵隔窗可见肿瘤血管集束 肿瘤边缘见毛刺棘突及胸膜外脂肪线消失且见空泡征 图4A-D 为同一病例右上肺鳞癌图4A-B 分别为OPNVEGF-C 免疫组化染色×400 的阳性表达 图4C-D 为CT 肺窗和纵隔窗示肿瘤呈深分叶边缘呈棘状突起和毛刺并 有纵隔淋巴结肿大 10 , 13 讨论 com 周围型肺鳞癌腺癌病理特征与OPN 和VEGF-C 表达的关系 大多数恶性肿瘤的发生发展和转移是多种因素和多种生物学因子共同单独作 用的结果各种生物学因子共同单独作用决定肿瘤的恶性生长方式生长速度形 态特征细胞分化程度转移和复发等生物学特性文献报道[22]OPN 作为一种细胞 外基质蛋白和细胞因子与非小细胞肺癌病理类型TNM 分期淋巴结转移密切相 关OPN 通过细胞粘附序列RGD 和非RGD 序列与细胞表面整合素受体如αVβ3 α β 和黏附分子CD44 6 结合参与细胞的粘附迁移和增殖促进恶性肿瘤的 V 5 V 发展使肿瘤发生浸润和转移[2425] OPN 与血管通透因子VPF 血管内皮因子 VEGF 发挥协同作用促进血管内皮细胞的增生诱使新血管生成有利于肿 [26] 瘤细胞生长和转移 VEGF-C 是VEGF 家族可特异性作用于淋巴管内皮的成员之一是最近 发现的 4 VEGFR-3 的配体VEGF-C 前体蛋白相对分子量61×10 通过蛋白裂解形成成 4 熟的VEGF-C 分子相对分子量4 ×10 而且与VEGFR-3 的亲和力提高了400 倍 两者结合后通过MEKERK 和PI3-激酶Akt 途径引起淋巴管内皮细胞增生在介导 肿瘤淋巴管生成促进肿瘤淋巴道转移过程中发挥重要作用同时还可与VEGFR-2 结合促进肿瘤蛋白合成肿瘤细胞生长抑制细胞凋亡以及肿瘤细胞的血行转移 生理或病理状态下VEGF 均以旁分泌方式促进血管通透性增加增强刺激因素对内 [27] 皮细胞的作用促进血浆蛋白的外渗形成新生血管的临时基质有利于血管生成 VEGF-C 在肿瘤转移的不同阶段都具有重要作用许多人类肿瘤细胞表达VEGF-C 大部分肿瘤中VEGF-C 表达上调并且其表达水平与肿瘤血管生成及淋巴结转移呈正 相关[2829] 本组对 42 例周围型肺癌 OPN VEGF-C 表达水平的检测结果表明OPN VEGF-C 的表达与周围型肺癌的组织类型细胞分化程度间差异均无明显统计学意 义P ,005 而与有无淋巴结转移有显著统计学意义P,005 这一结果中 OPN 与组织类型无明显相关性与目前大部分关于 OPN 与肺癌文献报道不尽一致 但与刘龙[30]等研究结果一致可能与本组病例主要为肺鳞癌腺癌病例偏少有关 OPN 与细胞分化程度淋巴结转移的关系与目前文献报道一致本组病例VEGF-C 11 , 的表达与组织类型分化程度及淋巴结转移的关系与目前相关文献报道基本一致 2 本组病例实验结果还显示出OPN 与VEGF-C 阳性呈明显的正相关χ 5893 P, 005提示OPN 与VEGF-C 在肺鳞癌腺癌的进展过程中可能发挥协同作用上 述结果表明OPNVEGF-C 可作为判断肺鳞癌腺癌淋巴结转移及预后的指标也 为研究周围型肺癌恶性生长特性与CT 征象的关系提供了理论基础 com 周围型肺鳞癌腺癌CT 征象与OPNVEGF-C 阳性表达的关系 CT 扫描由于具有较高的空间和密度分辨率因此在肺癌的诊断分期及评估预 后中有着重要作用目前已成为评价肺癌形态和密度特征的最佳影像学手段之一肺 癌CT 征象的成像基础是由肺癌生物学特性决定的病理组织的大体形态改变病理组 织大体形态改变犹如一座桥梁有机的把影像医学和分子医学联系起来从而使得探讨 [31] 肺癌的CT 表现与肿瘤分子生物学之间的内在联系成为可能 肺癌的发生发展同其他恶性肿瘤一样是一个多因素多阶段和多基因异常 的过程肿瘤的浸润和转移是影响肿瘤患者预后的重要因素Nowell[32]肿瘤细胞群 体进化理论认为肿瘤在30cm 大小时可能是其生物学特性发生转变的重要时期即肿 瘤直径,30cm 时可能是处于低度恶性向高度恶性转变的时期肿瘤的侵袭力更强 更易发生转移本研究结果显示在肿瘤直径,30cm 组OPNVEGF-C 的表达明 显高于直径?30cm 组提示周围型肺癌,30cm 时恶性程度更高侵袭和转移能力 更强 CT 征象的深分叶征是指肿瘤边缘凹凸不平呈花瓣样突出弦距与弦长之比 ?04有学者经病理对照研究发现分叶征是由于肿瘤多核发病及相互融合或瘤体各 部分生长速度不均衡而形成也与肿瘤生长过程中受肺的结缔组织间隔支气管 血管阻挡引起肿瘤生长局部受限有关表明位于肿瘤边沿分叶处的肿瘤细胞生长更 活跃增殖速度更快深分叶征对周围型肺癌的诊断有非常重要的价值棘突征是 指纵隔窗表现为自肿瘤边缘突向肺野形态介于分叶与毛刺之间呈尖角样的棘状突 起被认为是分叶的一部分是肿瘤发育的先端部位代表肿瘤细胞在血管周围的 结缔组织内浸润和沿淋巴管蔓延本研究显示有深分叶征棘突征的病例 OPN VEGF-C 的阳性表达显著增高提示有深分叶征和棘突征的周围型肺癌可能有更高 的恶性生长生物学特性 12 , 毛刺征 从肺窗观察毛刺征表现为自肿瘤边缘向周围肺伸展呈放射状无分 支的细短线条影常规 10mm 层厚 CT 扫描多表现为晕圈状或毛刷状高分辨 CT 扫描毛刺征检出率较高一般认为肺肿块周围见毛刺影高度提示恶性但本研究结 果未显示OPNVEGF-C 的表达与毛刺征的形成的相关性提示毛刺征并不能说明 肿瘤的恶行程度高Zwirewich[33]等报道毛刺征的病理基础主要是病变周围肺组织不 规则的纤维结缔组织的增生反应此表现也可见于炎症结核等肺内良性病变其 次才是肿瘤对周围血管淋巴管的浸润 血管集束征是指肺癌肿块与肺内血管的关系表现为一支或几支血管到达或穿过 肿块肺血管被牵拉向瘤体移位和血管到达瘤体边缘截断病理研究表明集束征由 增粗的血管组成近肺门侧的血管束多由血管支气管构成并常有血管壁的增厚远 肺门侧的血管束则由扩张的小静脉组成可能与静脉回流受阻有关本研究结果显示 OPN 与血管集束征无明显相关性但VEGF-C 与该征象形成有密切关系P, 005 胸膜外脂肪线消失 文献报道该征象诊断肺癌的准确度为77灵敏度为40 胸膜外脂肪线消失提示瘤细胞已浸润壁层胸膜其临床TNM 分期已达T3 期因而它 [34] 能为判断肺癌的恶性度及临床分期提供有价值的依据 本研究结果显示OPN 与胸 膜外脂肪线的消失有显著相关性而VEGF-C 的表达与此征象未显示明显相关性提 示OPN 高表达的肺癌更具侵袭性具有更高的恶性程度 空泡征 多见于瘤体直径,30cm 的周围型小肺癌 表现为瘤体中央区一个 CT 或多个点状或蜂窝状低密度影单个直径多为 1,2mm边界较清楚少数位于肿块 的边缘区该征形成多数由于肿块内部未受到肿瘤累及的肺支架结构如肺泡扩张扭 曲的细支气管少数为含粘液的腺腔结构一般多见于鳞腺癌细支气管肺泡癌及普 通型腺癌[35]而本研究结果未显示OPNVEGF-C 与空泡征形成的有相关性 纵隔淋巴结肿大 CT 扫描对纵隔肺门淋巴结肿大的诊断准确率较高有学者 [36]将淋巴结短径,10mm 或长径,15mm 作为判断淋巴结肿大的标准考虑有淋巴结 转移的可能其敏感性为 6785特异性为9629准确率达 8180本结果显示 有肺门和或纵隔淋巴结肿大组的OPNVEGF-C 的表达与高于无肺门和或纵隔淋巴 结肿大组两者有显著统计学意义提示OPNVEGF-C 两者在促进淋巴结转移过程 中发挥重要作用 13 , 14 结论 OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中表达与肿瘤的淋巴结转移密切相关二者可 能发挥协同作用OPN 和VEGF-C 均可作为判断肺癌淋巴转移及评估肿瘤患者预后 的有用指标 的阳性表达与周围型肺鳞癌腺癌的 征象的深分叶征棘突征 OPN CT 胸膜外脂肪线消失及肺门和或纵隔淋巴结肿大相关 与深分叶征棘突征 VEGF-C 血管集束征及肺门和或纵隔淋巴结肿大相关 均与毛刺征空泡征 OPN VEGF-C 无关提示 可能是深分叶征棘突征胸膜外脂肪线消失血 管集束 OPN VEGF-C 征纵隔淋巴结肿大等 征象形成的病理和分子生物学基础之一综合分析这 些因 CT 素对于提高周围型肺癌 诊断的准确性和临床制定适当的治疗及预后 评估提 CT 供有益的帮助 14 , 参 考 文 献 1Sorensen ES Hojruo PPetersen TE Posttranslational modifications of bovine osteopontinidentification of twenty-eight phosphorylation and three O-glycosylation Sites Protein Sci 199542040-9 2Butler WTThe nature and significance of osteopontinConnective tissue Res1989 23 123-136 3Patarca R Saavedra RA Cantor H Molecular and cellular basis of genetic resistance to bacterial infectionthe role of the early T-lymphocyte activation-1osteopontin geneCrit Rev immunol 199313225-246 4zhang J Takahashi K Takahashi F et al Differential osteopentin expression in lung cancercancer lett 2001171215-222 5Denhardt DT Chambers AF Senger DReditors Osteopontin role in cell signalling and adhesionAnn NY Acad sci 1995760388 6Denhardt DT Guo X Osteopontin a protein with diverse functionsFASEB J 1993 7 1475-1482 7 Sodek J Ganss B Mckee MD OsteopontinCrit Rev Oral Biol Med 20001279-303 8 Reinholt FP Hultenby KOldberg A et al Osteopontin a possible anchor of osteoclasts to bone Proc Natl Acad sci USA 1990874473-5 9Giachelli CM Steitz S Osteopontin a versatile regulator of inflammation and biomineralization Matrix Biol 200019615-22 10Shijubo N Uede T Kon S et al Vascular endothelial growth factor and osteopontin in tumor biologyCrit Rev Oncol 200011135-146 11Dehardt DT Noda M O Regan Aw et al Osteopontin as a means to cope with environmental insultsregulation of inflammation Tissue remodelling and cell survival J Clin Invest 20011071055-61 12HU Z Lind D et al Overexpression of osteopontin is associated with more aggression phenotypes in human non-small cell lung cancerClin Cancer Res 2005114646-4652 13Tuck AB O Malley FP Singhal H et alOsteopontinand P53 expression are associatiateal with tumor progression in a case of synchronous Bilateral Invasive mammary carcinomas Arch Pathol Lab Med 1997121578-84 14Tuck AB Chambers AF The role of osteopontin in breast cancerclinical and 15 , experimental studiesJ Mammary Gland Biol Neoplasia 20016419-29 15Chambers AFWilson SM Kerkvliet N et al Osteopontin expression in lung cancer Lung Cancer 199615311-23 16Thalmann GN sikes RA Devoll RE et al Osteopontinpossible role in prostate cancer progression Clin Cancer Res 199952271-7 17Agrawal D Chen T Irby R et al Osteopontin identified as lead marker of colon cancer progressionusing pooled sample expression profiling J Natl cancer inst 200294513-21 18Kim JH Skates SJ Uede T et al Osteopontin as a potential diagonstic biomarker for ovarian cancerJ Am Med Dir Assoc 20022871671-9 19Ue T Yokozaki H Kitadai Y et al Co-espression of osteopontin and CD44V9 in gastric cancer Int J Cancer 198879127-32 20Li Q Dong X Gu W et al Clinical significance of co2expression of VEGF-C and VEGFR-3 in no-nsmall cell lung cancer[J]Clin Med J 〔Engl 〕 2003116 5 727-730 21Su JL Shih JY Yen ML et al Cyclooxygenase-2 induces Ep12 and HER22neudependent vascular endothelial growth factor-C upregulationa noval mechanism of lymph angiogenesis in Lung adenocarcinoma [J] Cancer Res 200464 2 554-564 22 Wai PY Kuo PCThe role of osteopontin in tumour metastasis J Surg Res 2004121 2 228-241 23Tang R F Itakura J Aikawa T et al Overexpression of lymphangiogenic growth factor VEGF-C in human pancreatic cancer[J]Pancreas 200122 3 285-292 24 Denhardt DTGiachelli CMRittling SRRole of osteopontin in cellular signaling and toxicant injuryAnnu Rev Pharmacol Toxicol200141723-749 25Weber GF Ashkar SGlimcher MJet alReceptor-ligand interaction between CD44 and osteopontin Eta-1 Science1996271 5248 509-512 26Hirama MTakahashi kTakahashi Fet alOsteopontin overproduced by tumour cells acts as a potent angiogenic factor contributing to tumour growthCancer Lett2003198107- 117 27Ribatti D The crucial role of vascular permeability factorvascular endothelial growth factoring angiogenesisa histoical review[J]Br J Haematol2005128303-309 28董昕邱雪杉王恩华等血管内皮细胞生长因子C 及其受体 3 在非小细胞 肺癌 组织中的表达及意义[J]中华病理学杂志200332 2 128-132 29陆婉玲血管内皮生长因子C 与肺癌关系的研究进展[J]中国实用内科杂 志 16 , 200626 24 1982-1984 30刘龙郝波林艳骨桥蛋白和CD44v6 在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]现 代 医药卫生200723 14 2059-2061 31田建明郝强 加强基因水平上的影像医学研究[J]中华放射学杂志200034 10 653-654 32Nowell PC Mechanism of tumour progression[J]Cancer Res 1986 46 5 2203- 2207 33Zwirewich CVVedal S Miller RRet alSolitary pulmonary nodule high-resolution CT and radiologic-pathologic correlation[J]Radiology1991179 2 469-476 34Ratto GBPiacenza GFrola Cet al Chest wall involvement by lung cancerComputed tomographic detection and results of operation[J]Ann Thorac Surg 199151 2 182-188 35彭光明蔡祖龙祝庆孚空泡征的CT 病理再研究中华放射学杂志199630 392-395 com部CT[M]上海上海医科大学出版社199638-43 17 , 2 骨桥蛋白和血管内皮生长因子-C 在肺鳞癌腺癌中的表达与 临床意义 [摘要] 目的本研究旨在探讨骨桥蛋白OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达 水平与临床病理之间的联系以及相互关系方法运用免疫组化的方法对57 例肺癌 组织标本进行OPN 和VEGF-C 检测结果157 例肺鳞癌腺癌中OPN 和VEGF-C 的阳性表达率分别为61406667肺鳞癌组和腺癌组OPN 和VEGF-C 表达无差异 P,0052肺鳞癌腺癌中OPN 和 VEGF-C 表达与肿瘤淋巴结转移有关P ,005及肿瘤TNM 分期有关P,001而与患者的年龄性别吸烟及肿瘤细 胞分化程度无关P,0053 OPN 与VEGF-C 的表达呈正相关 2 χ 10697P ,001结论OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌的浸润进展和转移过程中起重要作 用而且可能发挥协同作用OPN 和VEGF-C 联合检测可作为判断肺癌患者预 后的 有用指标 关键词肺肿瘤 免疫组化 骨桥蛋白OPN VEGF-C [Abstract]ObjectiveThe aim of this study is to investigate the expression and role of osteopontin OPN and vascular endothelial growth factor C VEGF-C in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of lung and their correlationMethodsOPN and VEGF-C expression were detected in 57 lung cancer tissues by immunohistochemistryResultsThe positive rate of OPN and VEGF-C in squamous cell carcinoma and adenocarcinoma of lung was 6140 and 6667 respectivelyThe expression of OPN and VEGF-C was closely related to TNM stage P,001 and lymphatic metastasis P,005 there was a remarkably 2 10697P,001 positive correlation between the expression of OPN and VEGF-C χ ConclusionOPN and VEGF-C may play an important role in the progression of lung squamous cell carcinoma and adenocarcinomaThe interrelationship of OPN and VEGF-C was coordinative with development and metastasis of lung cancer It might be helpful to predict the lymphatic metastasis and prognosis of lung carcinomas keywords Lung neoplasms Immunohistochemistry OPN VEGF-C 18 , 肺癌是威胁人类身体健康和生命的主要恶性肿瘤已是人类位居首位的 肿瘤死 因近年来人们对影响肺癌发生发展侵袭和转移的分子机制的研究已逐渐深 入 但对骨桥蛋白Osteopontin OPN 在肺癌中表达的研究仍然相对较 少特别是骨桥 蛋白OPN 与血管内皮生长因子-C Vascular endothelial growth factor C VEGF-C 等单因素与肺癌发展侵袭和转移的关系虽有少量研究但将这两者结合综合分析目 前尚未见文献报道为此我们采用免疫组织化学的方法观察OPN 和VEGF-C 在肺鳞 癌腺癌中的表达情况和相关性探讨其与肺癌组织类型分期分级及淋巴转移之 间的关系 21 材料与方法 com 标本收集收集三峡大学第一临床医学院暨宜昌市中心人民医院胸心外科 2003 年7 月至2007 年4 月间手术切除的原发性肺鳞癌腺癌组织标本57 例所有 标本均常规取材甲醛固定常规石蜡包埋厚度5 μm 连续切片分别做HE 和免疫 组化染色 com 临床与病理资料本组共 57 例患者均经临床病理确诊术前均未经放疗 或化疗治疗其中男46 例女 11 例年龄28,71 岁平均573 岁鳞癌46 例 腺癌 11 例手术切除淋巴结病理证实有淋巴结转移者29 例病理分级高分化 16 例中分化24 例低分化17 例按照国际抗癌联盟UICC 1997 年修订的p-TNM 分期标准进行分期? ? ? 期13 例?期 ? ? 26 例? ?? 期13 例 a b a b a b ?期5 例吸烟吸烟指数,400 34 例 com 试剂鼠抗人OPN 单克隆抗体克隆系OP3N兔抗人VEGF-C 多克隆抗体及 PV-9000 二步法即用型试剂盒均从北京中杉金桥生物技术有限公司购买为 美国GBI 公司产品 com 方法免疫组化染色采用PV-9000 二步法按照说明书操作步骤如下?石蜡 切片常规脱蜡水化 ?用3H O 去离子水孵育 10min阻断内源性过氧化物酶 2 2 ?根据一抗要求用微波加热抗原修复?滴加一抗湿盒中37?两小时PBS 冲洗 2min×3 次?滴加试剂1室温孵育20minPBS 冲洗2min×3 次?滴加试剂2 室温孵育30minPBS 冲洗2min×3 次?用DAB 溶液显色?苏木精复染后脱水 透明封片用PBS 缓冲液代替一抗作阴性对照用已知阳性对照片作阳性对照 19 , com OPN 和VEGF-C 结果判定 OPNVEGF,C 阳性染色主要为细胞质内出现棕 黄色颗粒每张片随机观察 5 个高倍视野400 倍每个视野计数100 个细胞计 [1] 算阳性细胞数OPN 依据阳性染色细胞占癌细胞总数的比例共分为4 级 阴性- 无棕黄血染色或染色阳性细胞数,10弱阳性阳性细胞数10-25中等 阳性阳性细胞数25-50强阳性阳性细胞数?50VEGF,C 阳性 [2] 强度判断标准 癌细胞脉管内皮细胞质呈棕黄色为染色阳性细胞肺癌细胞 VEGF ,C 表达强度按癌细胞免疫组化染色着色深浅计分0 分为无色1 分为淡黄色2 分为棕黄色3 分为棕褐色按阳性细胞所占百分比打分阴性为0 分阳性细胞, 10为 1 分阳性细胞数 11-50为2 分阳性细胞数,51为3 分染色强度与阳性 细胞分比的乘积0-2 分为-3-4 分为5-7 分8-9 分 2 com 统计学方法 采用χ 检验以P,005 为差异有统计学意义 com com OPN 与VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达及与病理特征的关系 免疫组化染色 OPN 主要定位于肿瘤细胞和邻近巨噬细胞的胞浆内 VEGF-C 主要 定位于肿瘤细胞的细胞浆均呈棕黄色或褐色小片状或颗粒状在本组病例中 OPN 与VEGF-C 的阳性表达率分别为61406667其中在肺鳞癌的阳性率为5652 6087肺腺癌的阳性率为 81829091二者在肺鳞癌腺癌中的表达均无明 显地统计学差异P,005在不同的细胞分化程度之间OPN 和VEGF-C 的表达均无 明显地统计学差异P,005OPN 和 VEGF-C 在有淋巴结转移组的阳性率分别为 75868276显著高于无淋巴结转移组46435000 P,005见表21 com OPN 与VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达与临床特征的关系 OPN 和 VEGF-C 在肺癌中的阳性表达与患者的年龄性别及有无吸烟吸烟指数 ,400均无明显地相关性在? ?期组OPN 和 VEGF-C 的阳性率分别为 4872 5385在??期组分别为88899444OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表 达与肿瘤的临床分期有密切关系P,001见表22 20 , 表21 OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达与病理特征的关系 OPN 2 VEGF-C 2 病理特征 例数 χ值 P 值 χ值 P 值 , ， , ， 组织类型 鳞癌 46 20 26 2397 P,005 18 28 3605 P,005 腺癌 11 2 9 1 10 分化程度 高分化 16 5 11 0890 P,005 4 12 2129 P,005 中分化 24 9 15 7 17 低分化 17 8 9 8 9 淋巴结转移 无 28 15 13 5207 P,005 14 14 6879 P,005 有 29 7 22 5 24 2 注 χ检验 表22 OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达与临床特征的 关系 OPN 2 VEGF-C 2 临床指标 例数 χ 值 P 值 χ 值 P 值 , ， , ， 年龄 ?60 岁 35 14 21 0075 P,005 11 24 0148 P,005 ,60 岁 22 8 14 8 14 性别 男 46 18 28 0029 P,005 15 31 0014 P,005 女 11 4 7 4 7 吸烟 无 23 8 15 0237 P,005 7 16 1344 P,005 有 34 14 20 12 22 TNM 分期 ?期，?期 39 20 19 8386 P,001 18 21 9135 P,001 ?期，?期 18 2 16 1 17 2 注χ 检验 com OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中的表达的相互关系 57 例患者中OPN 阳性表达35 例其中VEGF-C 阳性表达29 例而22 例OP 2 阴性患者中有9 例VEGF-C 阳性表达OPN 与VEGF-C 的表达呈正相关χ 10697 P,001见表23 21 , 表23 OPN 和VEGF-C 在肺鳞癌腺癌中表达的相互关系 VEGF-C 2 OPN 合计 χ值 P 值 ， , ， 29 6 35 10697 P,001 , 9 13 22 合计 38 19 2 注χ检验 23 讨论 OPN 是一种分泌型的磷酸化糖蛋白具有细胞黏附化学趋化免疫调节信 号转导组织修复与重塑抑制细胞凋亡等多种生理功能后来随着人们对OPN 的 研究和认识的不断深入发现OPN 在人类许多肿瘤中呈高表达并证实了OPN 与肿 瘤的发生浸润进展和转移有较密切关系[34] [5] Zhang 等 对 50 例肺癌组织标本进行 免疫组化和North bolt 测定发现非小细胞肺癌中OPN 的表达率375 明显高于 小细胞肺癌的表达率111而在非小细胞肺癌中腺癌的阳性表达率688 又 [6] 明显高于鳞癌208 杨艳娟等 应用免疫组织化学方法对 78 例肺癌标本进行 OPN 检测发现65 例非小细胞肺癌NSCLC 阳性率为584613 例小细胞肺癌 SCLC的OPN 表达均为阴性OPN 表达率与患者TNM 分期及淋巴结转移有密切 关系 P 001 与细胞分化程度无明显关系P ,005 OPN 在有淋巴结转移的NSCLC 组织中表达增高提示OPN 在NSCLC 的转移中起重要作用Donati[7]等用免疫组织 化学检测207 例?-?A 期NSCLC 的OPN 表达水平并对这一组中有6 年以上随访 的163 例患者分析发现若OPN 高表达总生存期和无瘤生存期均显著减少而 且 OPN 的高表达与?期NSCLC 患者的总生存期和无瘤生存期减少有显着统计学差异 我们通过本组病例研究发现TNM 分期? ?期组与??组之间OPN 表达率差异有 显著统计学意义P,001表明OPN 在中晚期肺鳞癌腺癌的表达率更高与肺癌 的临床分期密切相关OPN 的表达与肺癌组织类型细胞分化程度以及年龄性别 吸烟等临床因素未显示出明显的统计学差异在有淋巴结转移组的阳性表达率明显高 于无淋巴结转移组P,005提示OPN 高表达的肺癌可能具有更高地转移能力 VEGF-C 是VEGF 家族成员之一是特异的促淋巴管内皮生长因子和肿瘤血管生 成标志物在促进肿瘤淋巴管和血管生成以及肿瘤转移起重要作用其受体有 22 , VEGFR-2 FLK-1 和VGEFR-3 flt-4 VEGF-C 对VEGFR-3 flt-4 有更高的亲 和力与之优先结合VEGF-C 与VEGFR-3 结合后通过MEKERK 和PI3-激酶Akt 途径引起淋巴管内皮细胞增生VEGF-C 蛋白水解后的成熟形式还可结合并激活 [8] VEGFR-2 作用于血管淋巴管内皮细胞 近年来许多研究表明多种人类肿瘤表达 [910 ] VEGF-C 大部分中VEGF-C 表达上调且与局部淋巴结转移有关 本研究显示 VEGF-C 的表达与淋巴结转移明显正相关P,005在有淋巴结转移组的表达率为 8276 2429 无淋巴结转移组为50 1428与肿瘤的临床分期有密切关系P ,001? ?期组与??组的阳性率分别为5385 21399444 1718 而与患者年龄性别吸烟等临床因素及肿瘤组织类型细胞分化程度无明显的相关 性结果表明越到肿瘤后期在VEGF-C 及受体VEGFR-3 的作用下肿瘤组织内部的 淋巴管数量明显增多管腔增粗淋巴管占据的面积增大使癌细胞有更多的机会接 触淋巴管进而侵袭淋巴管发生转移 Hirama 等[ 11]发现OPN 能上调血管通透因子VPFVEGF 的表达促进内皮细胞 [ 12] 的增生诱使新血管的形成有利于肿瘤细胞的生长与转移Shijubo 等 认为一系 列细胞生长因子调控肿瘤血管生成而OPN 能诱导内皮细胞迁移和上调VEGF 的效应 并用免疫组化的方法研究8