【word】 α-内收蛋白基因多态性与大动脉弹性相关性研究

【word】 α-内收蛋白基因多态性与大动脉弹性相关性研究 α-内收蛋白基因多态性与大动脉弹性相关 性研究 2l4MolecularCardiolog)ofChina .August2007,Vo1.7No.4(SerialNo.35 . 基础研究. OL一内收蛋白基因多态性与大动脉弹性相关性研究 王丛孙刚丁燕程闫旭龙吴国霞赵玉环冯美云 【摘要】目的探讨d一内收蛋白基变异(Gly460Trp)与大动脉弹性相关性研究.方法(1) 采用CompliorSP脉搏波速度测定仪测量股一颈动脉PwV(C-FPwV),共319例,其中C-FPWV异常组 204例,对照组115例;(2)采用聚合酶链反应和限制性酶切的片段长度多态方法检测一内收蛋 白基因变异(Gly460Trp).结果(1)C-FPwV升高组收缩压(SBP),舒张压(DBP)均显着高于对旦{{ 组(P<0.05);(2)C—FPWV升高组ww,w等位基冈频率显着高于对照组(P<0.05);(3)ww基冈 型与WG+GG基型比较C—FtwV,收缩压,舒张压差异有显着性(P<0.05);(4)Ix~gistic同归结果 显示:d一内收蛋白460WW基因型与大动脉弹性有密切相关性 (P=0.001,OR=3.234,95%CI1.655— 6.320).结论ot一内收蛋白基变异(G1y460Trp)与大动脉弹性有密切 相关性,ww型是大动脉弹性 减退的敏感基型. 【关键词】ot一内收蛋白;基多态性;限制性片段长度;大动脉弹性 Theassociationbeween-AdducinGenepolymorphismandbigarteryelasticityWANGCong,SUN Gang,DINGYanCheag,Y4NILong,WUGaoXia,ZHAOnlHuan,FENGMeiYun.DepartmentofCar— diolog~,thesecond4ffiliatedHospital,BaotouMedicalU,nversity.intlermotlgulia.014030Ch,n Correspolwlingauthor:WANGCong,.Email:wangcoag65@126.corn 【Abstract】 ObjectiveToassesstheassociationbeween—AdducinGenepobmorphismand bigar— teryelasticity.Methods(1)Bigarteryelasticit~wasnleasuredwithCompliorSPautomaticpulsewave nleasurenlentsstemofpulsewavevelocit?(PWV)in319subjects,including204subjectswithanabnornlal C—FPWVand115nornlalcontrols.f21Thegenetypesweredeterminedwithpol?merasechainreactionandal— lele-specificreal’tionenzyDieana1 . ~sis.ResMt(1)SBPandDBPinabnormalCFPWVweresignificantly higherthaninllO1lllalCFPWV(P<0.05).(2)ThefrequenciesofWalleleandWWgenotypesinabnormal C—FPWVgroupweresignificantlyhigherthanincontrolgroup(P<0.05).(3)C-FPWV,SBPandDBPin WWgenotypeweresignifk’antlydifferentfromthatinWG+GC,(P<0.05).(4)Logisticregressionanalysis revealedthatWWgenot)peswereasso~?iatedwithabnornlalC—FPWV((P: 0.001,OR=3.234,95%CI 1.655~5.320).ConclusionThend—AdducinGenepn1)morphismisassocia tedwithbigarielTelasti(ity. WWgenotypeisasensitivegenot)pereflectingtileabnornlalityofbigarterialcompliance 【Keyword】 Adducin;Genepolymorphism;Restrictionfrogmentlength;AteriolesElasticity 动脉顺应性又称动脉弹性,是反映亚临床血管 病变的指标.研究结果表明动脉弹性是收缩压,舒 张压和脉压水平的重要决定因素,而日.相当程度上 反映了动脉内皮功能状态?.动脉弹性减退已经成 为心血管危险的重要标’己之一.引起大动脉弹性 减退的危险【六』素很多,如高m,高胆固醇血症,吸 炯,大量饮酒,超重,糖尿病,胰岛素抵抗及炎症等, 但其遗传机制尚不清楚.高血压病的侯选基因 基金项日:内蒙古Fj然基金资助项日(200508010916) 作者单他:014030内蒙包头医学院第附属医院心内科 通讯作旨:工丛Emall:wag(0g65@『26.coin Ot一内收蛋白基因(Gly460Tvp)多态性可引起遗传性 排钠障碍,与盐敏感有关,是心脑血管疾病的独立危 险L大J素.本研究旨存探讨.内收蛋白基凶 (Gly460Trp)多态性是否与大动脉弹性减退具有相 关性. 1研究对象和方法 1.1对象:选择内蒙卉科技大学第二附属医院 心内科门诊健康体检及住院病例319例.年龄35, 69岁之间.按颈一股动脉脉搏波速度(C—FPwV)1>9 nr/s为界值分为两组.其中c—FPWV正常组共 国分子心脏病学杂志2007年月!鲞筮塑f垫笠 115例,男性65例,女性50例,年龄(48.05? 8.037)岁;C—FPwV升高组204例,其中男111例, 女93例,年龄(49.89?8.744)岁.所有入选人群, 均要求无药物治疗的影响,无冠心病,脑卒中,无糖 尿病,肝肾疾病史,排除继发性高血压. 1.2方法: 1.2.1PwV的测量:应用法国Artech—Medical公 司研制生产的脉搏波速度测定仪一专家型康普乐 (CompliorSP)同时测定颈一桡动脉,颈一股动脉的 PWV.入选者取仰卧位,颈部垫枕,头转向被检查侧 的对侧,将压力感受器置于左侧颈动脉,桡动脉,股 动脉搏动最明显处.连续16个脉搏波传导速 度值,去掉3个最大值及3个最小值后,取平均值作 为最后的测定值.PwV及身高,体重,腰罔和臀罔 的测量由高血压研究室的同一个研究人员完成. 1.2.2血压的测定:入选者在休息10min后,应 用的袖带式台式水银血压计,测量右上肢血压, 间隔2min测一次,测三次取平均值.Korotoff第一 音及第五音为收缩压和舒张压. 1.2.3DNA提取:空腹12h静脉抽血,0.5mot/ LEDTA—Na,,30min内以3000r/min离心分离血浆, 基因组DNA提取采取常规盐析法. 1.2.4PCR扩增及酶切:基因型分析采用聚合 酶链反应(PCR)和限制性片段内切酶的方法.目的 DNA片段扩增:引物均由上海生工生物T程技术服 务有限公司合成. ADD1G460W:上游引物5’一CTCCTTFGCTAGT— GACGGTGATFC一3’,下游引物5’一GACTFGGGACT— GCTFCCATFCGGCC一3’.在上游引物的3’端原序列 上改动一个碱基,通过PCR引人了限制性内切酶 Asu1的酶切位点.反应体系为50l,DNA2 l,双蒸水34Ixl,Buffer4l,dNTP4Ixl,Mgcl24Ixl, 上游引物0.8Ixl,下游引物0.8l,Taq聚合酶0.4 l,混匀,离心.预变性94~C4min,然后94~C1min, 57o【=1min,72~C1min,进行35个循环,最后延伸5 min.扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,紫 外灯下观察结果.取10I.zlPCR产物,限制性内切 酶Asul1Ixl,10Buffer1.5l,灭菌去离子双蒸水2.5 l,反应总体系15l,混匀后,离心30S,37电热 恒水温箱孵育过夜,产物用2.5%琼脂糖凝胶电泳, 稳压电泳50v电压,电泳60min.EB染色,紫外灯 下判定基因型.基因型分别为460ww纯合型 (147bp);460GW杂合型(147,122和25bp);460GG 纯合型(122和25bp)(图1). 图1460WW(147bp);460GW(147,122和25bp】;460GG【122 和25bp) 1.3统计方法:用SPSS12.0统计软件处理,基 因型,等位基因频率和组间记数资料间比较采用x 检验,两组均数问比较采用t检验.计量资料数据 采用均数标准差(?).P<0.05为差异有显着 性.相关关系用Logistic回归分析.两组的基因型 分布经x检验符合Hardy—Weinberg平衡,表明所选 样本具有群体代表性. 2结果 2.1两组临床特征比较(表1):C—FPwV升高组 收缩压(SBP),舒张压(DBP)显着高于对照组(P< 0.05),两组问性别,年龄,血糖(BG),总胆固醇 (TC),甘油三脂(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL— C),BMI差异无统计学意义. 2.2两组间o【一内收蛋白(G460W)基因型及等位 基因频率(表2):o【一内收蛋白(G460W)基因型及等 位基因频率在两组中的分布有显着性差异(P< 0.05),C—FPwV升高组ww基因型及w等位基因 高于对照组(P<0.05). 2.3o【一内收蛋白G460W的WW与GW+GG基因 型的临床资料比较(表3):G460W的ww基凶型的 SBP,DBP,C—FPWV显着高于G460W的WG+GG基 因型(P<0.05);年龄,性别,BMI,TG,TC,HDL,LDL, BG与其他基因型比较差异无显着性(P>0.05). 2.4Logistic回归分析:大动脉弹性作为因变量, o【一内收蛋白基因型,年龄,性别,血糖(BG),BMI,总 胆固醇(TC),甘油j脂(TG),高密度脂蛋白胆固醇 (HDL—C),低密度脂蛋白胆固醇(LDL—C)作为自变 量行Logistic回归分析.结果显示:排除血压水平的 影响后,o【一内收蛋白460WW基因型(P=0.001, OR=3.234,95%CI1.655-6.320)仍是动脉弹性减退 的危险因素. 2l6 表1C—FPwV升高组和对照组的一般临床资料比较(?s) 表2两组间一内收蛋白基因型及等位基因频率 表3d一内收蛋白C,460W的ww与GW+GG的基冈型的临床资料比较 3讨论 动脉顺应性取决于动脉腔径大小和管壁硬度. 大动脉弹性反映近端弹性腔即大动脉的顺应性.大 动脉弹性减退通常发生在长期内皮功能障碍引起粥 样斑块,胶原增多,弹力纤维断裂等结构性改变.环 境因素对大动脉弹性的影响,国内外已有大量报道, 而遗传因素对它的作用及机制尚未见报道. Or.一adducin是一种细胞膜骨架蛋白,首先于1986 年从人的红细胞中被分离纯化,并且存在多种组织 中,含有多个功能位点,参与细胞连接,信号转导及 离子转运,尤其与钠离子转运密切相关j.人类一 adduein基因位于染色体4p16.3,全长85Kb,有17 个外显子和16个内含子,第10外显子存在 G614T点突变,使氨基酸序列第460位的甘氨酸 (Gly)被色氨酸(Trp)取代.携带460Trp等位基因 在钠摄入增加,利尿治疗时血压变化较大,凶此认为 该基因与高血压有关,尤其是盐敏感性’. 中国分子心脏病学杂志2007年8月第7卷第4期(总第35期 本研究发现,C—FPwV升高组与对照组比较血 压水平,d.内收蛋白460WW基因型频率,W等位基 因频率方面差异有显着性;进一步Logistic回归分析 仍得出同样的结论.说明血压升高,d一内收蛋白基 因变异是大动脉弹性减退的危险因素.其可能的机 制是亚基上氨基酸替换(GlyTrp)的结果可能影响 内收蛋白组装或其稳定性,从而改变了细胞膜骨架 结构和钠离子跨膜转运,引起近端肾小管钠离子重 吸收增加,水钠出潴留,循环血流量增加,表现为血 压水平增高.同时血浆肾素活性降低,循环肾素血 管紧张素系统受到影响,血管紧张素1I1型和2型 受体上调,组织或局部的肾素血管紧张素系统通过 自分泌和旁分泌产生血管紧张素?与两种上调受体 结合,导致血管平滑肌细胞增殖,肥大,从而引起血 管壁变厚,顺应性降低. 综上所述,大动脉弹性降低,僵硬度增加是包括 环境和遗传因素共同导致的早期血管功能改变,本 实验通过对高血压患者d一内收蛋白基因变异 (Gly460Trp)与大动脉弹性相关性研究,从分子水平 调节一adducin的表达和功能的方法,纠正水钠储留, 为改善大动脉弹性,预防1,2血管并发症以及开发针 2l7 对改善内皮功能和动脉弹性的新药提供重要的临床 依据. 参考文献 1CohnJN.Vascularwallfunetionasariskmarkerforcardiovascular disease.JHypeaens,1999,17(Suppl5):s41一$44. 2CohnJN.Arterialcompliancetostratifycardiovascularrisk:more precisionintherapeuticdecisionmaking.AmJHypertens,2001,14: 258S一263S. 3中国医学基金会血管病变防治.中国血管病变早期检测技术应 甩指南.中国民康医学杂志,2006,18:323-331. 4MatsonkaY,HughesCA,BennettV.Adducinregulation[J].JBiol chem,1996,271:25157—25166. 5LinB,NasirJ,McdonaldH,eta1.Genomicorganizationofthehuman — adducingeneanditsaltematelysplicealisoforms.Genomic,1995, 99. 25:92— 6CusiD,BarlassinaC,AzzaziT,eta1.Polymorphismsof—adducin andsaltsensitivetyinpatientswithessentialhypertension.Lancet, 1997,349:1353—1357. 7BarlassinaC,SchorkNJ,Mamutalt’,eta1.Synergisticeffectofalpha— adducionandACEgenescausesbloodpressurechangwithbodysodi— umandvolumeexpressiongkidneyint,2000,57:1083—1090.