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韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究

2017-10-23 7页 doc 21KB 27阅读

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韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究 word格式论文 韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除 作用研究 作者,黄锁义 林丹英 尤婷婷 【摘要】 目的探讨韭菜总黄酮的提取、鉴别及对羟自由基的清除作用,以充分利用韭菜植物资源,避免资源的浪费。 方法 采用超声波乙醇浸提法从韭菜中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量,用韭菜总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.195 0 mg/ml,回收率为100%,其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是...
韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究
韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除作用研究 word格式论文 韭菜总黄酮的提取及对羟自由基的清除 作用研究 作者,黄锁义 林丹英 尤婷婷 【摘要】 目的探讨韭菜总黄酮的提取、鉴别及对羟自由基的清除作用,以充分利用韭菜植物资源,避免资源的浪费。 方法 采用超声波乙醇浸提法从韭菜中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量,用韭菜总黄酮对羟自由基清除作用进行试验。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.195 0 mg/ml,回收率为100%,其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取韭菜黄酮类物质的有效途径。韭菜总黄酮提取液对Fenton体系产生的?OH自由基有很好的清除作用。 【关键词】 超声波提取 韭菜 总黄酮 自由基 清除 word格式论文 Abstract,ObjectiveTo study the extraction of total flavanone of Chinese chives and its effect on hydroxyl radical. Methods The flavonoids were extracted from Chinese chives with ultrasonic wave and ethanol extraction.Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Chinese chives. The effect of extracts from Chinese chives on hydroxyl radicals was studied, ResultsBy this method the content of the total flavanone of Chinese chives was C=0.1950 mg/ml and the rate of recovery was100%. Conclusion This text provides the extraction and purifying methods to get the outcome and the purity of the flavanone is high .This method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Chinese chives. Total flavanone from Chinese chives have scavenging effects on hydroxyl radicals. Key words,Ultrasonic wave treatment, Chinese chive, Total flavanone, Hydroxyl radical, Scavenging 韭菜Chinese chives又叫长生韭、扁菜等,自古以来就受到国人的喜爱。 韭菜因营养丰富,又有温补肝肾、助阳固精作用,故在《 中国 药典》上有“起 阳草”之称。韭菜作为药用,最早见于梁?陶弘景 《名医别录》,谓其能“安五脏, 除胃中热”,1,。《食疗本草》说它能“利胸膈”。《本草拾遗》说它能“温中,下气, word格式论文 补虚,调和脏腑,令人能食,益阳,止泻白脓, 腹冷痛,并煮食之”。明代李时珍在《本草纲目》中写道,韭菜“补肝及命门,治小便频数,遗尿……”等,2,。韭菜味甘、辛,性温,有补肾助阳,温中开胃,散淤血等功效,药理 研究 发现其具有调节血脂、预防和 治疗 心血管疾病的作用,在肠内有消毒、灭菌的功能。临床上常用作治跌打损伤、噎膈、反胃、肠炎、吐血、鼻衄、 胸痛、阳痿、早泄、遗精、多尿、神经性皮炎等症。 现代 研究证明,韭菜含有挥发油硫化物、蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素、维生素B和C、纤维素、钙、磷、铁等,1,。 近年来,超声技术 应用 于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道,3,4,,表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的 影响 ,4,。但超声技术应用于提取韭菜中黄酮类物质的研究尚未见报道。为此,本文报道用超声波乙醇浸提法提取韭菜总黄酮、鉴别及提取物总黄酮对羟自由基的清除作用。 1 仪器与试剂 word格式论文 1.1 仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器,超声工作频率40KHz、江苏省昆山市超声仪器有限公司,,UV-755B紫外可见分光光度计,上海 分析 仪器总厂,,ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂),SHB-III循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司,。 1.2 试剂95%乙醇AR,亚硝酸钠AR,硝酸铝AR,氢氧化钠AR,三氯化铝AR,盐酸AR,氨水AR,冰醋酸AR,醋酸乙酯AR,乙酸镁AR,甲醇AR,镁粉AR,正丁醇AR,芦丁品,中国药品生物制品检定所,,双氧水AR,硫酸亚铁AR,水杨酸AR,新鲜韭菜采自广西百色市。 2 方法与结果 2.1 总黄酮成分提取取新鲜韭菜,烘干,粉碎。称取韭菜粉末6 g,加80 ml 95%乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml左右为止,放置250 ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。 2.2 测定方法依据以芦丁为对照品测定韭菜中总黄酮的含量,加入铝离 word格式论文 子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。 2.3 定量实验-总黄酮的含量测定 2.3.1 波长的选择取样品液适量,在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420,700 nm波长范围测定络合物的吸光度,络合物于510 nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。 2.3.2 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液,0.13 mg/ml,0.00,0.05,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00 ml于10.00 ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min,再加10%硝酸铝溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min,再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12 min,以试剂作空白,于510 nm处测吸光度。吸光度测定结果见表1。表1 紫外可见分光光度计测定吸光度结果,略, 2.3.3 提取物含量的测定精密吸取样品液0.50 ml,置10 ml容量瓶,按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.124,根据回归方程,A=3.619× word格式论文 10-3+12.34C, 计算 样品中总黄酮的含量C=0.195 0 mg/ml。 2.3.4 回收率实验精密量取样品液2.00 ml,加入标准芦丁对照品2.00 ml,0.13 mg/ml,,同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为100% 。 2.4 定性实验-总黄酮的鉴别 2.4.1 颜色反应 紫外光下呈色反应,取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。 浓氨水反应,取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏30 s,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点。 三氯化铝反应,取样品溶液点在滤纸上,滴加,,三氯化铝乙醇溶液,吹干。 word格式论文 在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。 乙酸镁反应,取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点。 盐酸-镁粉反应,取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴,1次加入,,在泡沫处呈紫红色。 2.4.2 纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇:醋酸:水=4:1:5,体积比,为展开剂,上行展开5h,取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。 2.5 总黄酮提取物对?OH的清除作用参照Fenton反应的 方法 建立反应体系模型,5,,利用H2O2与Fe2+ 混合产生?OH,但由于?OH具有很高的反应活性,存活时间短,若在反应体系中加入水杨酸,就能有效地捕捉?OH,并产生有色产物。反应式如下,H2O2+ Fe2+ ?Fe3++?OH+OH- word格式论文 该产物在510 nm处有强吸收,若在此反应体系中加入具有清除?OH功能的被测物,便会与水杨酸竞争?OH,从而使有色产物生成量减少,采用固定反应时间法,在相同体积的反应体系(8.8 mmol/L H2O21 ml,9 mmol/L Fe2+l ml,9 mmol/L 1 ml水杨酸-乙醇溶液)加入一系列不同浓度的韭菜总黄酮提取液,并以蒸馏水为参比,与试剂空白液比较,在510 nm处测量各浓度下的吸光度,便能测定被测物(总黄酮)对?OH的清除作用,其清除率 计算 公式,清除率(,)=A0-AxA0×100% 以实验的提取液总黄酮作为样品,分别取不同体积的样品定容到10 m1分别测其对?OH的清除作用。从图1中可看出,韭菜总黄酮提取液对由Fenton体系产生的?OH有一定的清除作用,随着韭菜总黄酮提取液浓度的增加,对?OH自由基的清除能力也增强,说明当黄酮类物质的浓度增加时,其清除率也增大。 3 讨论 实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为100%。利用本实验所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的 应用 前景。 word格式论文 黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值。在 自然 界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄,醇,、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等,6,。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能,消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、 治疗 骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用,7,8,。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目,韭菜分布广泛。本文实验结果表明,韭菜中含有较为丰富的黄酮,其提取物总黄酮对羟自由基具有很好的清除作用。因此,韭菜具有广泛的开发和利用价值,值得综合利用,加强资源开发。 【 参考 文献 】 .药用蔬菜—韭菜,J,. 家庭医药,2005,(5):54. ,1,李振琼 word格式论文 ,2,杨德俊.四季佳蔬良药,J,. 福建农业,2005,(5):38. ,3,刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方法 研究 ,J,. 云南化工,2003,30,1,,27. ,4,谢明杰,宋明,邹翠霞,等. 超声波提取大豆异黄酮,J,.大豆 科学 ,2004,23(1):75. ,5,李贵荣,杨胜圆,党参多糖的提取及其对活性氧自由基的清除作用,J,,化学世界,2001,42(8),42l. ,6,夏杏洲,张辉,魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究,J,.食品研究与开发,2002,23(5):35. ,7,黄锁义,黎海妮,余美料,等.益母草总黄酮的提取及鉴别,J,. 时珍国医国药,2005,16(5),398. ,8,黄锁义,覃成箭,姚小敏,等.洋葱总黄酮的提取及鉴别,J,. 时珍国医国药,2006,17(2):224.
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