高效液相色谱法与化学法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的比较与研究

高效液相色谱法与化学法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的比较与研究 高效液相色谱法与化学法测定蜂蜜中果糖、 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的比较与研究 -==J『26 2008年8月 第29卷第8期食品i拜究与拜发检测 高效液相色谱法与化学法测定蜂蜜中果糖, 葡萄糖,蔗糖,麦芽糖含量的比较与研究 田艳玲’.王浩.张曼玲’.陈婧 (1.北京市理化分析测试中心北京100089; 2.国家食品安全检测中心海淀区产品质量监督检验所北京100094) 摘要:利用高效液相色谱(HPLC)示差折光分析法测定蜂蜜中果糖,葡萄糖,蔗糖, 麦芽糖的含量.并与传统化学法比 较,改进和提高了蜂蜜中糖含量的测定方法,检测精度和效率.HPLC方法采用 AgilentCarbohydrate柱,该法具有样品 预处理简单,灵敏度高,分析时间短等优点,可用于蜂蜜样品的直接测定.而采用 化学法测定时间长,过程复杂,水解条 件,滴定条件不易掌握,因此建议蜂蜜中果糖,葡萄糖,蔗糖,麦芽糖含量的测定应 优选高效液相示差折光分析法. 关键词:高效液相色谱仪;蜂蜜;果糖;葡萄糖;蔗糖;麦芽糖 COMPARISONANDRESEARCHOFHIGH—PERFORMANCELIQUIDCHROMA TOGRAPHYANDCHEMICAL METHODDETERMINATIONHONEYTHEFRUCTOSE,GLUCOSE,SUCROSE,M ALTOSECONTENT TIANYan-ling,WANGHao,ZHANGMan-ling,CHENJing~ (1.Beijingphysicsandchemistryanalysistestcenter,Beijing100089,China; 2.HaidianDistrictInstituteofProductsQualitySupervisionandInspection,Beijing100094,China) Abstract:ThisarticleusestheHigh—performanceliquidchromatography(HPLC)refractiveindexdetection methoddeterminationhoneythefructose,theglucose,thesucrose,themaltosecontent.Andcomparedwiththe traditionalchemicalmethod,improvesandenhancedinthehoneythesugarcontentdetectionmethod,theexam- inationprecisionandtheefficiency.TheHPLCmethodusesAgilenttheCarbohydratecolumn.thismethodhas thesamplepretreatmenttobesimple,thesensitivityishigh,analysistimesh0rtandSOonmerits,mayuseinthe honeysampletheimmediatedeterminant.Butusesthechemicalmethoddeterminanttimet obelong,theprocess iscomplex,thehydrolisiscondition,thetitrateconditionarenoteasytograsp.Thereforeint hesuggestionhoney thefructose,theglucose,thesucrose,themaltosecontentdeterminationshouldtheoptimal High-performance liquidchromatography(HPLC)refractiveindexdetectionmethod. Keywords:HPLC;honey;fructose;glucose;SUCrOSe;maltose 蜂蜜是一种高度复杂的糖类过饱和混合物.亦食 作者简介:田艳玲(1966一),女(汉),师,本科,从事食品检验的实 验与研究工作. 亦药,深受国内外消费者的欢迎.蜂蜜的主要成分是碳 水化合物.它含有果糖,葡萄糖,蔗糖,麦芽糖,松二糖和 ,蜂蜜中的糖类占总成分的70%,80%. 糊精等20余种 蜂蜜中以单糖(果糖,葡萄糖)为主要成分,约占总成分 京:化学工业出版社,2000:253 [2]张桂青.菊花多糖提取分离及初步纯化研究[D].?肥:安徽农业 大学图书馆,2006:4-7 ,郭巧生,李彦农,等药用菊花不同栽培类型内在质量的 [3]徐文斌 比较研究[J]’中国中药杂志,2005,30(21):1645—1648 f4]纪丽莲.菊花脑茎叶挥发油的化学成分与抗霉菌活性的研究[J】. 94 食品科学,2005,26(10):91— [5]方军,陈建平,舒永红,等.ICP—MS法测定菊花茶中砷镉铜铅锌 fJ].理化检验一化学分册,2005,41(12):902—904 【6]于善凯,张英,吴晓琴航白菊营养成分及其生物活性的测定田. 中国食物与营养,2002,2:50—51 [7]黎国兰,王秀峰,杨葵华,等微波消解一FAAS法测定不同产地菊 花中金属元素[J】.绵阳师范学院学报,2007,26(2):70—73 收稿日期:2008—01一o4 检测分析食品研究与开发2008年8月第29卷第8期 的65%以上,其次是双糖,双糖中以蔗糖占绝对优势, 成熟的蜂蜜平均不超过5%(少数品种例外),而更多的 则在1%,3%左右.蜂蜜中的葡萄糖和果糖因为它具 有还原性,所以称之为还原糖,近年来蜂蜜造假猖獗, 《蜂蜜》国家中明确规定:蜂蜜中不得添加或混入 任何糖类,代糖类物质;不得添加或混入任何防腐剂, 澄清剂,增稠剂等异物,并且规定了对蜂蜜掺假的检 测方法和判定原则.以此为基本,我将新旧方法以及 相关标准作了广泛的研究和对比.测定蜂蜜中的糖及 其含量的方法很多,主要有基于氧化还原反应原理的 化学法和准确快捷的高效液相色谱法.国内检验部门 由于检验仪器设备所限,目前大多采用SN/T0852— 2000规定的化学法,用高效液相色谱法测定蜂蜜中 各种糖的报道比较少【l】.本文采用高效液相色谱法对 蜂蜜中果糖等4种糖进行测定,获得较满意的结果. 同时采用SN/T0852—2000法作了相应的比较,发现化 学法对蜂蜜中成分的测定可能偏高于实际含量5%, 10%左右【2】. 高效液相色谱法PHLC实验原理是:溶于流动相 (mobilephase)中的各组分经过固定相时,试样组分基 本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱,从 而实现分离目的.该方法将样品直接分离,处理过程简 单,分离度高,重现性好. 传统化学法主要依据各种糖的化学性质:葡萄糖, 果糖分子式都是C6H2O,葡萄糖CHOH(CHOH)4CHO 是一个多羟基醛,具有还原性;果糖结构简式:CH20一 是葡萄糖 HCHOHCHOHCHOHCOCH20H的多羟基酮, 的同分异构体,同样具有还原性.蔗糖和麦芽糖都属于 二糖,分子式都为CH0蔗糖分子中无一CHO,麦芽 糖分子中有一CHO.蔗糖水解得到一分子的葡萄糖和一 分子的果糖,而麦芽糖水解得到两分子的葡萄糖.反应 方程式书写如下: C12HOl1+H20—C6H12O6+C6H12O6 (蔗糖)(葡萄糖)(果糖) C12HOll+H20—2C6H12O6 (麦芽糖)(葡萄糖) 果糖,麦芽糖可以参加 由此可见4种糖中葡萄糖, 还原反应,果糖,蔗糖不参加还原反应,蔗糖,麦芽糖可 以参加水解,葡萄糖,果糖不能参加水解.因此在SN/ T0852—2000法中测定的还原糖不是简单的含有葡萄 糖,果糖,而应该加上麦芽糖,水解后的还原糖中也应 包含有麦芽糖的产物.这是葡萄糖还原糖,蔗糖含量偏 高的主要原因. 1实验部分 1.1实验仪器,试剂,样品 1.1.1仪器 Agilentl100型液相色谱仪(产地:美国),配示差折光 分析检测器,氨基柱,糖滴定管,1000W闭光电炉等. 1.1.2试剂 铁氰化钾,氢氧化纳,盐酸,亚甲基蓝,碘,碘化钾, 硫代硫酸钠,硫酸,淀粉(分析纯),蒸馏水,重蒸馏乙 腈:色谱纯水:高纯水果糖,葡萄糖,麦芽糖,蔗糖(含 量I>99.0%):北京拜尔迪生物公司. 1.1.3样品 蜂蜜:购自本地超市. 1.2实验操作 1.2.1色谱条件 色谱柱:AgilentCarbohydrate柱:5m,4.6mmx 250mm;流速:1.0mL/min;柱温:30oC;检测器池温度: 35oC;流动相:乙腈+水(75:25);进样量:15L. 1.2.2样品处理 称取1g-2g左右试样,精确至0.0001g.置于lOOmL 烧杯中,加入40mL水,用玻璃棒搅拌使试样完全溶 解,转移至100mL容量瓶中,然后再用10mL水洗烧 杯并转移至上述100mL容量瓶中,用乙腈定容至体 积,混匀.用0.45m滤膜将样液过滤后,进样15 进行色谱分析. 1.2.3定性定量方法 采用标准物质的保留时间对样品峰进行准确定 性,采用外标法以峰面积计算定量,配制不同浓度的果 以质量浓度(gin) 糖等4种糖的混和标准溶液进样分析, 为横坐标,以峰面积为纵坐标绘制标准曲线. 1.2.4化学法 采用出人境检验检疫行业标准SN/T0852—2000进 行实验. 2结果与讨论 2.1实验结果 2.1.1色谱条件的优化 比较了几种流动相,分别为乙腈+水(90:10),乙 腈+水(75:25),乙腈+水(50:50),发现乙腈+水(75: 25)条件下果糖等4种糖能达到较好的基线分离;在 0.2mL/min,2.0mL/min范围内改变流动相流速,发 现在流速为0.5mL/min时,四种糖出峰时间合适,峰形 较好;实验中发现,当进样量达到15时,峰形较好. 综合以上色谱条件的测定结果令人满意.此条件下加 标蜂蜜样品的色谱图见图1. 128 .. 298驾莽第卷第期趼嘲胃蹑检测分析 RID1A,RefractiveIndexSignal(TANG\07081001.D) nRIU 1OO000 80000 60000 40000 20000 O 毒兰I墨I{=,.I . 024681O12141618min 图1加标蜂蜜样品的色谱图 Fig.1plusthestandardsamplechromatogramchartofhoney 2.1.2标准曲线线性范围 将混溶的标准工作液进样l5L,测定结果经过 线性回归,结果如图1所示. 2.1.3方法检测限 进空白样,以基线3倍噪声值在标准曲线查得结 果计算,测得方法检出限:果糖,蔗糖,蔗糖,麦芽糖为 0.5%. 2.1.4方法的回收率和精密度 准确称取已知含量的同一样品3份,每份1g-2g 左右,分别加入不同量的果糖等4种糖对照品,按样品 制备方法制备后,进行测定,结果见2. ,线性范围及线性相关系数结果 表1回归方程 Table1Regressionequation,linearltyrangeandHnearcorrelationcoeffidentresult 样品果糖Fructose 123 葡萄糖Glucose 123 蔗糖Sucrose 123 麦芽糖Maltose 123 从表中可看出,样品加标回收率大于92.0%,平均 加标回收率为100.5%,平均相对标准偏差为5.33% (n=12).同时将一定浓度的标准样品重复测定5次 并取平均值计算精密度,测得平均变异系数5.07% (n=20). 2.1.5样品分析 取同样的样品3份,采用SN/T0852—2000测定还 原糖,葡萄糖,蔗糖,同时用HPLC法测定果糖,葡萄 糖,蔗糖,麦芽糖. 2.1.6两种方法测定结果及结果比较见表3,表4 表3两种方法测定结果 Table3Twomethodsdeterminationresults 表4结果比较 Table4ResultsComparison 2.1.7结果比较 2.2结果分析 从实验结果可以看出高效液相色谱法回收率稳定 可靠且重复性好,且在样品的制备和分析过程中没有 被任何试剂污染,处理过程简单,4种糖分离度高,结 果稳定.故所测含量可视为蜂蜜中各种糖的真实含量. 传统化学方法SN/T0852—2000依据还原糖可以被氧化 剂氧化来测定还原糖的含量,用碘量法滴定葡萄糖,二 者的差值为果糖含量,但它忽略了麦芽糖的存在,麦芽 糖含有醛基,具有还原性,麦芽糖是双糖又能参加水 解,因此采用化学法对蔗糖,葡萄糖成分的测定可能偏 高于实际含量的5%,10%左右. 食品保鲜晶硪究与并发2008年8月第29卷第8期 粘红酵母对水果采后病害 生物防治的研究进展 l29= 王雷’.张华2,张红印.,姜松.,冯志彬 (1.鲁东大学应用技术学院,山东烟台264025;2.烟台南山学院,山东烟台265706; 3.江苏大学食品与生物工程学院,江苏镇江212013;4.鲁东大学生命科学学院,山 东烟台264025) 摘要:粘红酵母作为一种用于生物防治的拮抗茵,具有拮抗效果好,不产生毒素, 可以和化学杀茵剂共同使用等优 点.对粘红酵-~:(Rhodotorulaglutinis)对水果采后病害生物防治的研究现状进行 了综述,其中包括防治效果,防治机 存在的问以及未来的研究方向等.还提出了使用生物技术改造 理,防治的优势, 粘红酵母从而提高其生物防治效 果,是现在应用粘红酵母对水果采后病害生物防治研究的最新领域. 关键词;水果;生物防治;水果采后病害;防治机理 :粘红酵母 RESEARCHADVANCES0NTHEB10L0GICALC0’I’R0L0’P0S’IHARVES’I’DISE ASES0FFRUl,IWn’H RHoD0ToRULAGLUTlNls WANGLei,ZHANGHua,ZHANGHong-yin,JIANGSong,FENGZhi-bin (1.CollegeofAppliedTechnology,LudongUniversity,Shandong,Yantai264025,Shandong,China; 2.YantaiNanshangUniversity,Yantai265706,Shandong,China;3.CollegeofFoodandBiologicalEngineering, JiangsuUniversity,Zhenjiang212013,Jiangsu,China;4.CollegeofLifeScience,LudongUniversity, Yantai264025,Shandong,China) Abstract:Rhodotorulaglutinis,theantagonistsusedforbiocontrol,hasbetterbiocontrolefficacyandproducing noantibiotics.Furthermore,theycanbeusedincombinationwithfungicide.Thispaperdiscussestheapproaches tothebiologicalcontrolofpostharvestdiseasesoffruitswithRhodotorulaglutinis,includingbiologicaleffec- tiveness,biologicalmechanism,predominanceandtherecentprobleminpostharvestbiocontro1.Thispaperalso suggestsnewideasforfutureresearch.Improvingthebiocontrolefficacybybiologicalengineeringistherecent researchfieldofbiocontrolofpostharvestdiseasesoffruitswithRhodotorulagl~tinis. Keywords:Rhodotorulaglutinis;fruits;biologicalcontrol;postharvestdiseasesoffruits;b iocontrolmechanism 新鲜水果采后因腐烂造成的损失十分巨大.据报 道,发达国家由此造成的损失为10%25%,而在缺乏 作者简介:王雷(1981一),男(汉),助教,硕士,主要从事水果采后病害 生物防治研究. 冷藏设施的发展中国家则高达40%一50%[1].水果采后 腐烂大多由真菌引起.长期以来,使用化学杀菌剂控制 水果的采后病害一直被认为是最有效的控制方法.然 而,随着病原菌抗药性的逐渐增加,以及人们对果品质 3结论 本文利用高效液相示差折光分析法测定蜂蜜中果 糖,葡萄糖[J],蔗糖,麦芽糖含量.该法样品预处理简 ,分析时间短,明显提高了检测效率,且其 单,分离度高 准确性和重复性好,是测定蜂蜜中糖含量的理想方法. 采用化学法测定时间长,过程复杂,水解条件,滴定条 件不易掌握,建议蜂蜜中果糖,葡萄糖,蔗糖,麦芽糖含 量的测定应优选高效液相示差折光分析法. 参考文献: …1林雁飞,何进,操丽丽,等.高效毛细管电泳法测定蜂蜜中的多 种糖叨.分析测试学报,2005,24(4):74—76 ,刘伟.HPLC内标法与化学法测定蜂蜜中糖含量的比较口l 【212吴艳华 应用科技,2001,28(8):55—59 01—03 收稿日期:2008—