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人工合成色素胭脂红的HPLC测定

2017-12-04 4页 doc 15KB 63阅读

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人工合成色素胭脂红的HPLC测定人工合成色素胭脂红的HPLC测定 人工合成色素胭脂红的HPLC测定 色素作为食品添加剂,可分为食用天然色素和人工合成色素两大类。前者一般较为安全,后者本身无营养价值,有些可能具有一定的毒性,但由于其成本低廉,色泽鲜艳,着色力强,配色方便,在食品生产加工行业中被广泛应用。胭脂红(ponceau4R)是目前我国使用最广泛、用量最大的一种单偶氮类人工合成色素。近年来,有报道指出,胭脂红与欧盟标准禁用的苏丹红?同属于偶氮类色素,偶氮化合物在体内可代谢生成致突变原前体———芳香胺类化合物,芳香胺被进一步代谢活化后成为亲电子产物与DNA...
人工合成色素胭脂红的HPLC测定
人工合成色素胭脂红的HPLC测定 人工合成色素胭脂红的HPLC测定 色素作为食品添加剂,可分为食用天然色素和人工合成色素两大类。前者一般较为安全,后者本身无营养价值,有些可能具有一定的毒性,但由于其成本低廉,色泽鲜艳,着色力强,配色方便,在食品生产加工行业中被广泛应用。胭脂红(ponceau4R)是目前我国使用最广泛、用量最大的一种单偶氮类人工合成色素。近年来,有报道指出,胭脂红与欧盟标准禁用的苏丹红?同属于偶氮类色素,偶氮化合物在体内可代谢生成致突变原前体———芳香胺类化合物,芳香胺被进一步代谢活化后成为亲电子产物与DNA和RNA结合形成加合物而诱发突变[1],它也可被氧化产生自由基,进而再与体内物质代谢产生一系列活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS),ROS 攻击DNA造成DNA氧化损伤[2]。胭脂红毒理学实验显示其具有一定的致癌和致突变作用[3-4]。美国、加拿大、挪威禁止在食品中添加胭脂红,中国、欧盟、日本等国允许使用,但对其使用范围和最高使用量都有严格规定。《中华人民共和国食品添加剂使用卫生标准GB2760—1996》(以下简称《卫生标准》)规定,胭脂红可严格限量用于果汁饮料、配制酒、糖果、冰淇淋等食品的着色,而不能用于红肠肠衣外的肉制品[5]。为保护食用者健康安全,了解市售食品中偶氮型人工合成色素胭脂红的含量水平,本文采用高效液相色谱法,结合溶剂提取的超声波震荡、摇床振摇、低温浓缩等前处理方法[6],对部分饮料类、肉制品类、糖果类等市售食品中人工合成色素胭脂红的含量进行了检测。 1 材料与方法 1.1 仪器与试剂 SHIMADZULC 2010A(HT)高效液相色谱(紫外检测器);UV 2450紫外 可见分光光度计;MILLI PORE纯水系统;DS 1高速组织捣碎机;CQ250超声波发生器;DHZ 032R变温摇床;SENCOR 205旋转蒸发浓缩装置;SHZ D(III)循环水式真空泵;W201D恒温水浴锅;0412 1离心机;Mettle电子天平。甲醇(迪马公司HPLC色谱纯);实验用水经纯水系统处理;胭脂红(上海试剂商店);以1?1(V/V)的甲醇与水混合物为溶剂配制1000mg/L胭脂红标准储备液。 1.2 采样与处理 2005年7月从上海市杨浦区某农贸市场及某大型超市随机采购多种有色食品作为样品。饮料类样品经0.45μm微孔滤膜过滤后进样[7]。其余样品分别称取25g,经高速组织捣碎机粉碎后放入装有以1?1(V/V)的甲醇与水混合物为溶剂的三角烧瓶内,超声波震荡30min,在50?摇床振摇30min,减压抽滤,反复提取3次,合并滤液经分液漏斗取出水层,低温浓缩,4000r/s离心后以1?1甲醇与水混合溶剂定容至25.00ml,样品滤液经0.45μm滤膜过滤后进行色谱测定。每一种食品做三个平行样。 1.3 条件与方法 1.3.1 选择λmax 用UV 2450紫外可见分光光度计对1.00mg/L胭脂红标准溶液在400,600nm区间进行吸光度全扫描,其UV吸收光谱见图1。最大吸收波长λmax为472nm,以此为HPLC检测波长。 1.3.2 HPLC分析条件 色谱柱:Shim PackVP ODS,250×4.6mmI.D.,5μm;柱温:40?;流动相:甲醇?水(7?3,V/V);流量:1.0ml/min;进样方式:自动;进样量:10μl;检测波长:472nm。 1.3.3 测定方法 以甲醇?水(1?1,V/V)混合溶剂稀释胭脂红标准储备液配1.00mg/L,5.00mg/L,10.0mg/L,50.0mg/L,100mg/L的系列标准溶液,每个浓度重复6次后,对特征峰面积积分,以峰面积对浓度绘制标准曲线并计算线性回归方程,y=1.38×104×-1.54×104,相关系数r=0.9998。选择各类食品样品分别进行加标回收试验,其回收率为94.1%,108.7%。重复测定1.00mg/L胭脂红标准溶液6次,检验方法的精密度,变异系数为5.67%。 2 结 果 标准品与样品中胭脂红的HPLC色谱图见图2、图3,其保留时间是2.4min。根据特征色谱峰保留时间定性,峰面积积分后对照标准曲线定量。每个样品重复测定3次,经计算样品中胭脂红含量见1。 3 讨 论 本实验采用溶剂提取的超声波震荡、摇床振摇、低温浓缩等前处理方法简便实用,提取率高。回收率和变异系数显示所设定的HPLC分析条件和检测方法准确度和精密度均较好。 实验结果显示,随机采集的5种不允许添加的肉制品中均检测出胭脂红,其使用超过规定范围,按卫生部规定属违法食品;在山楂片中胭脂红超出规定用量。这种人工合成偶氮类色素的滥用,一方面可能掩盖了劣质食品原料的外观,欺骗消费者,另一方面如果经常摄入,对消费者 将产生毒害作用。此类偶氮化合物在体内进行生物转化,可形成两种还原的芳香胺衍生物,其经N 羟基化和酯化后可转变成易与大分子核中心结合的终致癌物[8]。人工合成色素的滥用也暴露了质检、工商、卫监等部门在食品内成分和含量是否合格方面的监管缺位,对食品市场的管理不应仅限于查处假冒伪劣产品。 实验结果还显示,在本次随机采集的18种食品中有4种,葡萄酒、花雕酒、红肠肠衣、干玫瑰,胭脂红含量接近96年版卫生标准的最高允许使用量,按现行标准属合法合规。然而如果人们经常摄入多种此类食品,体内人工合成色素是否会蓄积,进而造成慢性危害是值得探讨的问题。我国目前允许使用的9种人工合成食用色素中有6种为偶氮类化合物(含胭脂红),它们在各国的允许使用情况和添加标准各不相同,尽管欧盟、日本等允许使用,但北美(含美国、加拿大)、北欧(丹麦、挪威)等国禁止在食品中使用。总的发展趋势是允许使用的人工合成色素特别是偶氮类数目减少,允许使用范围和最高允许使用量标准下调。国际上食品中用天然食用色素替代人工合成色素已成为一种绿色健康潮流。 为缩小国内标准与国际标准的距离,2004年底国家发展和改革委员会、农业部等九部门出台了食品国家标准的修订计划,将使采用国际标准的比例由23%提高到55%,其中包括我国现行的1996年版的食品添加剂使用卫生标准[5]。这就给我国食品卫生工作者提出了新的课题,完善人工合成色素尤其是偶氮类色素的卫生毒理学实验,为修订其在食品中添加范围及最高允许添加量的卫生标准提供科学依据。总之,各种食品有其本身应有的色泽,建议在挑选食品时,注意标签标示,不要被过于明艳的颜色迷惑,尽量选择不含或少含人工合成色素的食品。
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