【doc】非特异光化学反应对人体血液白细胞的影响

【doc】非特异光化学反应对人体血液白细胞的影响 非特异光化学反应对人体血液白细胞的影 响 72《激~2oo2年第23卷第3期LASERJOURNAL(Vo1.23.No.32002) 24听力检到 放疗前患耳听力正常21倒(42%),传导性聋9例(18%). 混台性聋l3捌(26%),感音神经性聋7倒(14%);放疗后1年 患耳听力正常4倒(8%).传导性聋I5倒(3O%),混台性聋21 例(42%).感音神经性聋】O倒(2O%J;放疗后两年患耳听力正 常9倒(18%),传导性聋13例(26%),混合性聋16例(32%), 感音神经性聋12侧(24%.三组气骨导听阚差在8Kl-h有显 着性差异(F=10.I2P<0.0I). 癌放疗后耳部并发症应及时发现,及时活疗,首先应控制放疗 后引起的局部炎症反应.并发分泌性中耳炎,宜采取鼓腰穿刺 抽液,对顽固性分泌中耳炎,可行中耳置昔术,缓解症状.改 善听力.提高鼻咽癌患者的生存质量,对鼻咽癌患者的放疗剂 量,能否降低到最低有效限度,有待耳鼻喉科与肿瘤科医生共 同协作研究 3讨论【13 为提高鼻帼癌患者的生存率,鼻咽癌施行放射治疗能达到 良好的存活,他们的生插质量却在变坏,在放疗后鼻咽癌患者 昂常见和困扰人的问题之一是耳鸣,耳聋,耳闷胀,如何在鼻咽 癌患者中寻求生存和生活质量的平衡.Hsu…曾认为,咽鼓管和 炎症因素均能导致鼻咽癌患者放疗后分泌性中耳毙的蟛成,咽 鼓管功能的影响由放射剂量而定,鼻咽癌的最大放射剂量为 70C,y,井提出控制放射剂量和控制感染是鼻咽癌放疗后保存 咽鼓管功能和防止巾耳并发症的两项原脚.曾有作者提出分泌 性中耳炎的鼻晒癌患者行中耳置管术为效治疗J,后 来,Young_]长期随蹄不支持这种观点.认为中耳置管术不怛 目【漉中耳渗出掖,也能使感染灶扩散至中耳,加重中耳炎症. 鼻咽癌放疗后可引起听力损害J,放射的损害影响中耳,耳螭, 听觉6直干通路.早期症状可出现耳鸣,耳闷塞,耳部变化包括 中耳积液,兢膜纤维化,中耳声顺降低,负压增大;听力损害可 出现传导性聋,混合忭聋及感音神经性聋.本资料显示,放疗后 混合性聋和感音神经证聋比例增加,听力损害在8K损失晟 重.放疗剂量与耳部并发症的关系.已有作者报道".对鼻咽 参考文献 FLuMM.YoungY—H.LinKLEust~chinatobefunctic~ ofpatientswithna?1aynge龃rn.nm[j:AnnOtol Rhlr,olLaryng~l,I995,104:453—455 [2JWeiWI.Er~gze1]UcG,LainKH.etThee~ficacyof "ngDt.randVentilationtubejnsertninr~dddle—ea『 inpatients[hna?Dh?Edcardr,o~【JL gosc~epa】987.97:I295—1298 【3YoungY—H,~aeenTS.PrwerVationoftubalfunctionin patientsw】[hna~phzvyngealcarcinomapost—irradiatic~ 【j]AcmOtolaryngo](stockh)1998.118(2):2s0—283 【4I^uSK,WeiwI.S[mmJSTecychartgcsofaudito— rybraine*'okeares?nSeafterradiotherapyforna一 唧删carcir~rm—Apro~paetivestudyIJ]Journalof 【,aD【0andOtobgy1992,106:887—892 [5]杨新明卢永蔼.胨忠等电离辐射对中耳的迟发性损 害【J]中华耳鼻咽喉科杂志,1997,32:222—225 作者简介:李兵,男,33岁,主治医师,博士生,研究方 向:耳鼻咽喉疾病. 非特异光化学反应对人体血液白细胞的影响 熊鸿燕陈惠孙 (第三军医大学预防医学系流行病学教研室,第三军医大学大坪医院野战外科研究所,重庆400038) 提要为观察非特异光化学反应对血寝中白细胞的影响,我们采用NBT染料显色,间接免疫荧光流式细胞仪,Tunel法细胞 原位弼亡测定等技术观察了经010rtmoI/ml生1打靶标光蛾剂(TFO—P)和剂量为032,2】6J/cnl的长故觜外鼓(uvA,320, 380rim)照射后血液中性粒细胞的吞噬功能,细胞表面白介索一8受体抗原活性,以厦白细胞DNA降解等生物效应变化.研究结 】00J/cm时,中性粒细胞吞噬功能呈增强档势,果袅明,当UXTA照射剂量为0.54-- 显着高于对鼎组(P值均<005),继续增加 照射荆最,吞噬功能叉遥渐降低.照射剂量为I62J/时,吞噬功能与正常纽托近似,剂量为2.163/皿f时,吞噬功能显着低于对 j!{{纽(P<001J:在0,2.16J/咖:的照射剂量下.中性粒细胞膜II一8R的抗原话性一直呈下降趋势.白细胞DNA陴解不断增 强.分别在照射剂为100J/m和161J时蒋低于对照封1fP伉均<005)翻此认为.在灭病毒应用剂量下血液中性牲 细胞存噬功能正常或耵一定的增强;中十生粒细胞的免蹬性降低;白刿胞降蠲亡开始显着发生 探索血液段其制品中精蓐自}.:c『洼,直足墒血和mL披:物制品领域的研究热点和难点,四为怛要求病毒舳有效性, 还要求高教率保存血液生物舌性成分,遗使静血,常用的叫1化滴方法能逃到要求一近年来,幽内外研究者渐对光化学戈 毒教粜加以r重税,并进行r大缝的"=验日f究'.试圈逋过利1{I光化学的某些特殊机制.使所产生的系列反应q作用于青桩 嗽的病毒.尽彘硅少挣化处理过程对血踱细胞和生物插性成分的损害 《激光杂志)2O02年第23卷第3期LASERJOURNAL(VoI23.No.32002)73 我们曾并台成了一种生物靶标光敏剂(补骨脂素与病毒特异核酸片段连接物,TFO—P),其能与脂质胞膜的试验病毒核 酸特异性结台,并在一定波长和剂量的光照作用下高效率地灭活试验病毒,而这种 复台物与血液中自细胞核酸的结台是非特异性 的(另文报道).在有效话病毒的条件下(0lraflt~TFO—P.bWA照射剂量为1.00, 162J/).光化学效应对披处理血液 的凝血功能,红细胞膜ATP酶话性无显着影响,反而有使血液红细胞携氧能力改善, 枯附性降低,膜弹性增加的现象.这种结 果使我们对TFO—P及其光化学效应的深^研究及应用产生了槛大兴趣.于是继续 观察了其对血赦自细胞口影响.了解披处理 血细胞悬液发生的较全面的生物效应.为进一步的应用研究打下基础. 关键词:光化学反应,白细胞 TheeffectsofhumanwhitebloodeelIinducedbyNo11一specificphotochemicalreaction tI口,,C.henHuisun2 (Thed日?r呲ofepide~iology,ThirdMilitaryMicalUniver~ivy,Chor~qing.400038) Al~tract:Aterblo:~dhavebeentreatedbyb,o—plotmensit~er(TFO— P)attd0sabouc0.1nmol/mlandthanirradiatedby UVAacthedosesof0.32,216J/cm2.thea.~aysofn~tmphi[N盯 swallowing.theindirectofFCMandthe Tund'situapoF~tOslsofcellhavebeenusedt.examinetheswallowingfunctic~ofneutrophilt heantigenactivitiesoflL一8Randthe degradationofWBC—DNAinordertoknowtheeHedofnon—specificPho【mh哪 rmctioThetestresuhsshowedthat.withthein creofirradiat~doses,the 【functkmofn~au'opilrevealedthetendencyofraisingatmandthancuttingdownlaterWhe 『1 beirradiatedacthedosesof0.54,1.00J/cm2.thepositiverRteof盯 ~vallomngisenhanced,signifleanthigherthantheomtrol(P< 0.05).wh皿thech,abLit162J/on2.theracew孙dosedtothe? ncro1;wbenthedosmwincreased们2】6J/cm-',ther-0.te msIc~verthanthecontrolifica力t1(P<00【)|nam~ena~fiviti~of儿一 8Rrevealedthetendencyofdeere~-ingat{treated f,1lfdegr~datioaofW73C—DNAwasf耳gradually.?cnthen刊mc1ofUVAincreema!tol?一】62J/0=.theapol~- tovaluesrehigherthanthemntm[(P<005);AcmMir@toth?date,wecouldoan.4derthataftertrmt~bytheTFO—Pand UAirradiationacthedosesofinactivetheviresoompietely.theswa]IuwingfuncticnofneL】t0?mnorma[andhaalittleincreased; Tantigenactivities.fut御decr;1apopotosis.fWBC—DNAhappenedd—tIy Keywords:phd【0ch日nica]reaction,whitebloodo【 l材料与方法 正常血液(第三军医大学大坪医院输血科提供)用生理盐 水缓冲癌作适当稀释.使红细胞含量为1xl09/m]左右.加^ 脂质体(Boehri~erMaz~,eim公司产品)包裹的TFO—P,使 TFO—P终敞度为01nraoi/ml.混匀后置37?孵育4h,然后 将血液分别加入24孔细胞培养板中{20~01/G),在强度为 I800/呷的UVA下照射一定时问.照射期问人工定时摇 动,使照射均匀.在设定的不同照射时间取血样进行相关指标 试验迁设立正常对照组,除未加TFO—P和未经UVA 照射外,对照组样本的址理程序全部与试验组相同. TFO—P是针对鸭己肝病毒(DHBV)一DNA特定序列设 计的三螺旋结构寡棱苷酸,其人工合成及3'端的8一甲氧基朴 骨脂素(8一MOP)连接由美国Genn~-d~mthesis公司完成,经 HPLC分析,纯度太于95%}8一MOP标记串为100%,复台物 旅魔为0.5nmol【, 试验所用的紫外线灯(320,38Ohm)由北京光电源研究所 提供;紫外线强度测定仪由北京师范大学光电仪器厂提供. 在率试验中,l司一试验指标的试验用血均般自同一血袋, 避免抽样误差 {】中性粒细胞吞噬功靛变化 如Histopaque】119和Hi.opaque】(177(SignmIl锆)分离试 验样本的巾性粒细胞按常规巾性粒兰【i{胞吞噬活性洲定沾: 吸取巾性粒细胞层的细胞2fi,u1于清洁玻片J,加2滴N:-ff染 赦(磷酸缓冲渡Io0,?.2g,聚蔗糖20rag).37t'孵育 15min,棘片,干燥后E}1醇固定.用wht—Gietma液染色 光镜下计数100个细胞中有还原NB'F(呈紫色沉着物)的细胞 数=并试驻点均作5个平行样本. 12中性粒细胞表面自介素一8受件(IL一8R】功能的变化 采用间接免疫荧光流式细胞法测:取样品血100~d,加 红细胞裂解藏(Imll/10P[KS作用1,2rrdn,再加^12xPBS, 混匀.】,】000r/rain离心5min.PBS洗涤两次,谓细胞维度为 lxl0/ml,取细胞悬踱10%1于离心管中,加cdw128抗体{s. rm公司产品)100(工作维度10pg/m[),混匀,置4?球搭中 30min周含2%小牛血清,0】%NaN3的PBS洗椽三次, (1O00r/rrdn.5rain离心】,每管加FITC一二抗IaG(sgma公司 产品)l00?1(工作浓度1:100稀释),置4?珠褡中30rain,用音 2%/b牛血清,0.I%NaNz的PBS洗涤三次,(1000r/rain,5min 离心),祝靛细胞用0.5mlPBS悬浮,避光.在瘴式细胞倥(美国 CouherREaEliteESP磐司产品)上,选定中性粒细胞分布 区.测定5OO0十细胞.滤光片为525nm波长.计算阳性标记 细胞率厦荧光强度.每个试验点均作3十平行样本. 】3自细胞凋亡测定 在持检测样本中加红细胞裂解液,100r/rain离心5rain. PBS洗涤两次.埘细胞浓度为1xl0/ml待用,按Tun[法测定 他n细耙的捌亡fTt,rtl试剂盘l}]N~hfingerMannheinl蕾司 提供)试骑步骤按试剂盒说明1{进行:特制样品自细胞.膻涂 片.辛温Ff雠.PBS缓冲被洗片.封脚液#ll;q绑胞涂片(牢 嚣毓聋高嚣篇篆盏!87o693全 74(激光杂志》2册2年第23卷第3期LASERjOURNAL(Vo[.233.2002) 温,10mitt),洗片后加渗透液作用(4?.2rain).进一步洗片后加 ^n叶d反应液作用(37?,6Groin).洗片后室温下干燥.加^ DAB显色液显色.洗片.干燥后光镜下观察细胞显色情况,在 】5个不重复视野下计数阳性细胞数,取其平均值.试验设用 性试验样品<DNAseLI处理的白细胞)和阴性试验样品(Tund 反应液不古束端转移酶).每个试验J点均作5个试验样本. 本实验各指标的数据采用国际通用的计算机软件Micm ca【Origin294进行多因素方差分析. 2结果 21血莜中性粒细胞的功能变化 中性牡细胞吞噬功能测定结果显示(见表1),在光化学反 应中,当LrVA照射剂量为054--1OOJ/cm2时.中性粒细胞的 吞嚆显色反应阳性率呈增高趋势.分别为52%和53%,显 着高于对照组(P值均<005J;继续增加照射剂量,阳性卑卫 逐渐降低.当爆射剂量为1.62JAma2时.吞噬阳性卑为 %,与正常纽相近似.但照射剂量为216J止时.其吞噬率 为25%.显着低于对照组(P<001). 细胞膜IL一8R荧光含量攫i定显示(见表1,在光化反应 中.随着光量子剐量的增加.中性粒细胞膜袭面IL一8R的活性 一 直呈下降趋势.UVA照射10和l5rain时.细胞IL一8R荧 光强度分别为3.73,357.显着低于对照组(P值均<005) 表1中性粒细胞功能变化 TFO—P含量:01ntml/m1.UVA强度:l800~W/cmz *示与对照组相比有显着的差异(P<0.01) *示与对照组相比有非常显着的差异(P<0.0i) 22TFO—P趾理后白细胞的凋亡测试 Ttmel{击测定白细胞的捅亡结果显示(图】),在TFO—P 处理组中.当U,照射剂量为032,100J/cm2时细胞捌亡 阳性值无显着增高,但剂量达162J后阳性值显着高于对 照纽(P<0.01).说明此处理剂鬣时血液中自细咆降解橱亡开 始明 *与肘fl组棚比1止】ti.01) rFO—P含量:0Inrr~l/m1.UVA强度:1800~W/wn 圈1咀渡中自细胞的凋亡变化 3讨论 反卫棱艘技术为踩理的生物靶光敏反应在抗病毒和 挠肿蜘的应用耻础研究中艟H{活人的前罱".与传统的 法椰比其』有哦的靶标反,有效作n]剂量低,,聿物毒性 坻等优点,将成l为r一代的机瘸{拓,抗肿拄术但l址.光化学 敢应变他的复杂性也址研究种n【j共睹的日越.系统和细敦地 观蠕聃『探讨I太的出替对促进,I:物靶标光敏反应技术的槔^ 研究驶成j{jl耵打煎意义 国外研究卉的观察示.低荆繁(01J/ca1)UVA的光敏 作用有和于细胞的激活,可使细胞膜弹力增加.细胞运动力和 免疫功能增强;中等剂量(107/)的光敏作月I可降低细胞的 竹长速度和对抗原的反应性;高剂量(太于1.OJ/cm2)的光化作 川则0I起细胞的严重损伤,导致细胞的凋亡,如果损伤所囊的 突变严重,将导致癌变发生l_0"?】.本试验设计的TFO—P 与血液中自细胞DNA是一种非特异结合,试验结果与以上观 察规律基本一致,在不同的光照剂量下.白细胞吞噬功能变化 较为复杂.先场后抑;而中性粒细胞膜IL一8R蛋白的抗原活性 和细胞拨在光化学反应中则一直呈现下降和降解的趋势.但 所选择的灭病毒处理剂量下,自细胞的吞噬功能正常或有增 性趋势:】L一8R免疫话性降低,表明与IL一8R相关的免疫反 应如自细胞的免疫原性和炎性反应可能将有定的降低;部分 自细胞开始发生显着的稠亡这些现象均表明,处理血{戎中自 细胞的生物效应基本有利于牺床应用. 在血液及黼品灭病毒方挂研究中,一般不主张保存白细胞 及其功能(引起输血后免疫原性反应).而较多注重的是白细胞 的突韭效应.以防癌变发生.我们的试验结果显示,在所设计 的作用剂量下.UVA产生的光敏反应使血液中白细胞呈嗣亡 趋势.这正是治疗白血病的技术设计原理.当然.少数细胞是否 有突变发生的可能.还需要避行湃^探讨,我们曾朋多重PER 洼观察了自至lH胞1:'53基阁的5…678外显子编码区.这些域 是细胞突变的艟感区,仉均木垃现突变现象(文报道), 参考文献 ]SiAC..qorer~l!HC]inica.[Eo[er~lce.fnlethy[ene blue…irosinaetivat,~Jp[asnmAreaa&~mizx'dnTfn『 in12heakhyh『Ll『]tVox.【999,77(4) 《激光杂志~2002年第23卷第3期LASERJOURNAL(Vol23.No.32002)75 21O KekezMM.Satt~rSAAnewC~Ol3e—methodrvirLBin. activatie~:pre]imin~~L出PlaysM.d.Bio.1997,42 (11):2o27 W~gnefSJ.SklpchenkoA,RobinettoD,et.Facetsaf- ~c6agvirusphoto—inactivationbyaseriesofphoenoth— iaz~nedyesPhotochemP}娅Dbl,1998.67:343 高飞.熊鸿燕.僚.光量子效应对血液生物活性成 分的影响.第三军医大学.2001,23(2):208 钱玉昆主编:实用免疫学新技术.北京:北京医科大学,中 国和医科大学联合出版杜.1994.17 扬景山主编:眶学细胞化学与细胞生物学技术北京:北 京?科大学,中国和医科大学联告出版牡.1990.400 Giov~liCandHdeaeC:Prngre~indevelopmentsof triplex—basedsrratq蚂Antisc~nse—Nue]6c—Acid—Dev. 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J时帅N.n蛆】州h,Inn瞢ct如Jasefbleneb;r,g 1前言 个别前牙罔外伤,咬台础伤等原因造成坷.甜黄或灰赫色 外观在临床较常见.牙压处理此类变色牙时多以冠或贴面修 复加以掩饰.其美容救果仍可接受我科】998年以来 日{进AccuCure3001)缸离子激光牙诊窜由门投术(In一_)f— rice1rt~rthbier.thing).使作荷在处删这种变乜爿.叽i得以 麻州戏"I采激光漂挂术扩展到问nj赳内外同时进行处 理魁瞄变色牙.取得丁丰H劬实的治疗效果现总结立I!下: 2材料与方法 ?共收冶上下颁前牙牙髓坏死牙冠变色牙46倒,主要致 病原因是牙外伤.变色时^日J2—20年不等,完成撒充后2埘进 行镖白操作. ?激光机为AccuCure301XIJ】rM一[nc】缸离子激光, 主要峰值浊{圭48n几1,台Quk,kWhite々jIj溧套曲完成治 疗 ?治疗^l上:橡埠的准备需漂圩阿伽备多一扎为 直磨除变乜牙颤部1趟聆充垃村料.删扑QuickW]lite协液后 分别氍于变色牙的噼舌驶麓髓跨内,^.{动穑2光机.世定能艟 ??