RP-HPLC测定十二味百消胶囊中大黄素和大黄酚的含量

RP-HPLC测定十二味百消胶囊中大黄素和大黄酚的含量 RP-HPLC测定十二味百消胶囊中大黄素和 大黄酚的含量 W 华西 C 药学 ~ 杂 P 志 S2O06.21(3):284,285?), RP—HPLC测定十二味百消胶囊中大黄素和大黄酚的含量 陈湘宏 (青海医学院,青海西宁810001) 摘要:目的建立测定藏成药十二味百消胶囊中大黄素和大黄酚含量的方法.方法样品用甲醇回流提取后加硫酸水解, 采用RP—HPLC法测定.色谱柱为HypemilODS2Cl8(250mill×4.6mill,5ttm),流动相为甲醇一0.1%磷酸溶液(85:15),检测波 长254?n.结果大黄素在1.78.4V-g,大黄酚在1.68.2范围内线性关系良好.平均回收率大黄素为99.3%,RSD= 0.8%;大黄酚为99.3%,RSD=0.9%.结论该方法灵敏,准确,专属性强,可用于十二味百消胶囊的含量测定. 关键词:十二味百消胶囊;大黄索;大黄酚;反相高效液相色谱 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—0103(2006)03—0284—02 DererminationofemodinandchrysophanolinShierweiBaixiaocapsulebyRP—-HPLC CHENXiang——hong (Qi~haiMedicalColleg~,X/n/rig810001,China) Abstract:OBJECYIVEToestablishamethodfordeterminationofemodinandchrysophanol inShierweiBaixiaocapsules.MEn10Ds 111esampleswereextractedbysupersonicwithmethano1.RP—HPLCanalysiswascarriedoutonHypersilODS2C18eolmnnandthemixtureof methanol一0.1%P04(85:15)wasused髂themobilephase.Thedetectionwavelengthwasat254Bin.R跚】I111estandardcurve邺 linearwithintherl~lgeof1.7—8.4foremodinand1.6—8.2腭f0rehrysophano1.1heaveragerecoveryofemodinWaS99.3%with脚 0f0.8%.withthatofehrysophanolwas99.3%with船D0f0.9%.O0】|IIs10N111emethodissemitive,accurateandspecificandvail beusedforthedeterminationofemodinandchrysopanolinShieI1veiBaixiaocapsule. Keywords:ShierweiBaixiaocapsule;Emodin;Chrysophanol;RP一眦 CInmnber:R927.2Documentcode:AArticlem:1006—0103(2OO6)03—0284—02 十二味百消胶囊由土木香,小叶莲,诃子,大黄, 碱花等藏药精制而成,具有化淤行血,通经祛斑的功 效,临床常用于治疗妇科疾病及更年期综合症等…. 大黄为其有效药味之一.大黄含蒽醌苷类及游离蒽 醌衍生物,其中大黄素,大黄酚为单糖苷,是大黄的 主要活性成分I2_2.现参考文献【3,4j,根据十二味百 消胶囊处方及制法的特点,采用HPLC测定其中大 黄素,大黄酚的含量,方法简便,准确,重复性好. 1实验部分 1.1仪器与试药 1100液相色谱仪包括11130紫外可见光检测仪, 1100色谱工作站(Agilent公司).大黄素和大黄酚 对照品(中国药品生物制品检定所);十二味百消胶 囊样品,缺大黄阴性对样品制剂(青海省格拉丹东药 业有限责任公司,批号:20010423,20010617, 20010721,20010812,20010906);甲醇为色谱纯,其余 试剂为分析纯. 1.2方法与结果 1.2.1提取条件的选择实验中以甲醇为溶剂. 分别回流提取15,30,45,60min后,测得大黄素含量 分别为每粒9.025,8.976,9.010,9.145,9.198mg;大 黄酚的含量分别为每粒9.025,8.976,9.101,9.145, 9.198mg.结果表明,甲醇回流时间对大黄素,大黄 酚含量测定影响较小,故选择30min为提取时间. 1.2.2色谱条件采用Hypersil—ODS2C18柱(4.6 millx250film,5ttm);甲醇一0.1%磷酸溶液(85:15) 为流动相;检测波长为254nm;柱温为室温,流速为 1ml?min;理论板数按大黄素峰计算应不低于 1.5X103. 1.2.3溶液的制备按处方组成,取除大黄外的其 余药物按制备工艺制成不含大黄的十二味百消胶 1.2.9"项下方法制备阴性对照溶液. 囊,再按" 精密称取大黄素对照品8.434mg,大黄酚对照 品8.167mg,分别置两个l0ml量瓶中,用甲醇定 容,摇匀,作为对照品溶液. 1.2.4对线性关系的考察精密吸取对照品溶液 2.0,4.0,6.0,8.0,10.0l,分别进样,按"1.2.2"项 下条件,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,大黄素和 大黄酚对照品的为横坐标,绘制曲线,回归方程 为:y大黄素=96.43X一20.88(r=0.9992,n=5); y大蘸酚=119.59X一16.42(r=0.9969,n=5).结果 作者简介:陈湘宏(1968一),男,湖北,实验师,从事中,藏药的研究开发工作. 第3期陈湘宏,等.RP—HPLC测定十二味百消胶囊中大黄素和大黄酚的含量 表明:大黄素在1.7—8.4,大黄酚在1.6,8.2g 范围内有良好的线性关系. 1.2.6重复性试验分别取同一批号的样品5份, 按"1.2.9"项下方法测定供试品中大黄素,大黄酚的 含量.每片中大黄索分别为8.9,9.2,9.2,9.1mg, RSD=1.3%,大黄酚分别为9.8,l0.0,10.1,10.1, l0.2mg,RSD=1.3%,结果表明,方法精密度较好. 1.2.7稳定性试验取"1.2.9"项下供试品溶液,l0 表1大黄素和大黄酚的回收率试验(n=5) Table1Resultsofrecoverytestforemodinandchrysopand(n=5) h内每隔2h进样1次,测定峰面积.大黄素峰平均 峰面积为1.074×103,RSD=1.25%;大黄酚峰平均为 1.251×103,RSD=1.08%.实验表明,供试品溶液在 10h内较稳定. 1.2.8加样回收试验取已知含量的样品5份,分 别精密加入大黄素,大黄酚对照品,再按"1.2.9"项 的方法测定,结果见表1. 1.2.9样品的测定取样品内容物约2g,精密称 定,置5Ornl锥形瓶中,精密加甲醇25rnl后称定重 量,加热回流30min,放冷.用甲醇补足减失重量, 摇匀,滤过,精密量取续滤液5rnl,置50rnl圆底烧瓶 中,挥去甲醇,加2.5mol-L硫酸溶液l0rnl,超声 处理5min,再加氯仿l0rnl,加热回流1h,冷却,转 移至分液漏斗中,用少量氯仿洗涤溶器,洗液并入分 液漏斗中,振摇萃取后分取氯仿层,酸液用氯仿提取 (8ml×2),合并氯仿液,以无水硫酸钠脱水,氯仿液 移至100ml锥形瓶中,挥去氯仿,残渣精密加甲醇 l0rnl,称定重量,置水浴中微热溶解残渣,放冷后, 用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液作为 表2样品的测定(n=5) Table2Determinationresultsofsamples(n=5) 供试品溶液.按"1.2.2"项条件,分别取供试品溶液 和对照品溶液各l0l进样,按外标法计算样品大黄 素,大黄酚的含量(表2). 2讨论 十二味百消胶囊为藏药复方制剂,由于各种成 分相互干扰,目前多采用显微,薄层扫描等检验方 法.为了提高藏药的检测水平,我们采用HPLC测 定了有效成分之一大黄中所含活性成分大黄素,大 黄酚的含量.建立的方法分离效果好,且阴性对照 无干扰,可用于控制十二味百消胶囊的质量. 参考文献: [1]徐国钧,生药学[M].北京:人民卫生出版社,1995.128. [2]中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[s].一部.北京: 化学工业出版社,2OO0.18. [3]杨林,徐铤,唐尧.RP—HPLC测定首乌藤中大黄素的含量 [J].华西药学杂志,2005,20(6):554—555. [4]邓晓鸿,董林,尹靖先.等.I-IPLC测定回生口服液中大黄素和 大黄酚的含量[J].华西药学杂志,2005,20(4):349—351. 收稿日期:2005—05