【word】 正交试验优化复方紫草油的提取工艺

【word】 正交试验优化复方紫草油的提取工艺 正交试验优化复方紫草油的提取工艺 ? 1632?现代中西医结合杂志 ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2010 May,19(13) 正交试验优化复方紫草油的提取工艺 孙相民,刘新泳 (1.齐鲁石化医院集团中心医院,山东淄博255400;2.山东大学药学院,山东济南250014) [摘要]目的优选复方紫草油的最佳提取工艺.方法采用(3)正交试验法优化提取条件,以左旋紫草素 的含量为工艺考察指标.结果最佳提取工艺为AlB2C2D2,即选用新疆软紫草,加5倍芝麻油,温度为120?,加热1 h.结论用高效液相色谱法测定左旋紫草素的含量准确可靠,采用优选的提取工艺能有效提高复方紫草油中左旋紫 草素的含量,提高制剂的质量. [关键词]复方紫草油;正交实验法;高效液相色谱;左旋紫草素;含量测定 [中图分类号]R284.2[文献标识码]B[文章编号]1008—8849(2010)13—1632—03 复方紫草油为我院制剂室自制的中药制剂,其处方组成 为紫草,金银花,白芷,冰片,麻油,用于外治皮炎,湿疹,水火 烫伤,痈肿,瘙痒等.紫草的主要抗菌有效成分左旋紫草素 (cH6O5)为羟基萘醌类色素,受热不稳定,而且在制备过程 中也受到紫草种类,提取温度,提取时间,提取油量等因素的 影响,故笔者采用四因素三水平,用(3)正交试验法来选 择最佳的提取方法以提高制剂的质量.现将结果报道如下. I仪器与试药 1.1仪器与设备电子天平:MA240D,上海第二天平仪器 厂;高效液相色谱仪:大连依利特分析仪器有限公司;UV230+ 紫外一可见检测器:大连依利特分析仪器有限公司;色谱柱: HyperODS2C18,4.6mm×250ram;超声振荡器:HS3120,大 连依利特分析仪器有限公司. 1.2药品与试剂药品:左旋紫草素,批号20060219,中国 药品生物制品检定所;甲醇:色谱纯,天津市科密欧化学试剂 有限公司;乙腈:色谱纯,天津市科密欧化学试剂有限公司; 水:双蒸水.复方紫草油:齐鲁石化医院集团中心医院制剂室 自制. 2实验方法 2.1正交实验设计根据制备工艺,选择可能影响该制剂质 量的4个因素:紫草种类,提取温度,提取时间,提取油量,以 左旋紫草素的含量为指标,采用四因素三水平,用k(3)正 交试验法优选提取工艺.因素水平安排见表1. 表1正交试验因素水平表 2.2样品的制备根据k(3)正交试验设计,取金银花,白 芷加规定量麻油(D)浸渍12h后直火加热,先用大火将麻油 升温至规定温度(B),改用文火维持此温度,并不断搅拌,至 白芷焦黄,加入用水湿润的紫草(A),继续用文火加热规定的 时间(C),趁热以3,4层纱布滤过,待冷至50?左右,加入研 细的冰片,搅拌至室温,即得. 2.3左旋紫草素的含量测定 2.3.1色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;以甲醇一 0.025mol/L磷酸(85:15)为流动相.进样量10L,流速1.0 mL/min,柱温20?,检测波长516nm. 2.3.2对照品溶液的制备精密称取左旋紫草素对照品 5.18mg,置25mL容量瓶中,加入甲醇适量溶解,稀释至刻 度,摇匀,配制成浓度为207.2mg/L的溶液,即得.色谱图见 图1. 图1对照品溶液高效液相色谱图 2.3.3供试品溶液的制备精密吸取2.2项下制备的样品 各10mL,置于分液漏斗中,加入0.25mol/L氢氧化钠溶液提 取3次,每次2OmL,至萃取液无色,合并碱液,加入0.5mol/ L硫酸溶液调pH值至5.0,加入氯仿提取4次(3O,30,20,2O mL).合并氯仿液,水浴蒸干,残渣加甲醇溶液溶解并转移至 50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,即得供试品溶液.色谱图见 图2. 2.3.4阴性样品溶液的制备除不加紫草外,其余制备及处 理方法同供试品溶液.样品中左旋紫草素色谱峰与其他峰分 离良好,可用于样品的含量测定.色谱图见图3. 2.3.5曲线的制备精密吸取左旋紫草素对照品溶液 2,5,7,10,13,l5L,依次进样,按2.3.1项下条件测定峰面 积,以峰面积为纵坐标(y),以左旋紫草素的含量为横坐标 OOO?湖. 现代中西医结合杂志 ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2010 May,19(13).1633? 图2供试品溶液高效液相色谱图 图3阴性样品溶液高效液相色谱图 (x),进行线性回归统计,得回归方程为Y=383.4X 12.716(r=0.9995).结果表明,左旋紫草素在进样0.414, 3.108g范围内与峰面积具有良好的线性关系. 2.3.6精密度考察精密吸取同一批供试品溶液l0L,重 复进样5次,RSD为0.36%,表明仪器的精密度良好. 2.3.7稳定性考察精密吸取同一批供试品溶液,分别在配 制完毕0,1,4,8,24h进样测定,RSD值为0.98%,结果表明 供试品溶液在室温下放置24h稳定. 2.3.8重现性试验按供试品溶液制备方法处理同一批样 品5份,依次测定左旋紫草素的含量,RSD值为0.58%(,z= 5),结果表明方法重现性良好. 2.3.9回收率试验精密量取已知含量的同一样品6份,每 份约0.5mL,分别精密加入207.2mg/L的左旋紫草素对照 品溶液1.0,1.5,2.0mL各2份,按供试品溶液制备方法制备 加样回收供试品溶液,测定左旋紫草素的含量,结果见表2. 表2左旋紫草素的回收率试验(=6) 2.3.10样品的含量测定取正交试验的9个样品,依法制 备供试品溶液,分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 L,注入高效液相色谱仪,照上述方法测定,结果换算为100 mL复方紫草油中左旋紫草素的含量,见表3. 表3复方紫草油水提工艺正交实验结果 2.3.11左旋紫草素含量方差分析见表4. 表4左旋紫草素的含量方差分析 注:F005(2,2)=19.00,F0o1(2,2):99.00,Fo10(2,2)=9.O0. 3正交实验结果分析 3.1直观分析对表3数据进行直观分析可知,极差(R)的 最大值为D因素,其次分别为A因素,C因素,B因素,说明对 复方紫草油中左旋紫草素含量影响最大的为提取油量,其7欠 分别为紫草种类,提取时间和提取温度,大小顺序为D>A> C>B. 3.2方差分析左旋紫草素含量方差分析显示,因素A,D 对指标影响显着,因素B,C的影响不显着.从经济实效角度 考虑,综合评判,确定较佳提取工艺为A1,B2,(22,D2,即选用 新疆软紫草,加5倍芝麻油,温度为120?,加热1h. 从正交试验结果可知,紫草的种类不同,其左旋紫草素的 含量相差很大,有报道软紫草中紫草素含量为2.13%, 6.73%,而硬紫草为0.39%,1.80%…,因此,购买紫草时要 注意其种类,选择质量较好的紫草.紫草素呈紫色片状结晶 或结晶性粉末,熔点147,149?,不溶于水,溶于乙醇,有机 溶剂和植物油.有报道称紫草提取温度可达180?_2;亦有 报道当温度高于150?时,其色泽会迅速变淡_3J.根据本试 验研究结果,在提取紫草油时应严格控制温度,不断搅拌,防 止局部过热,提取温度为120?时含量最高,为最佳提取温 度,从而保证复方紫草油的质量. 4讨论 紫草性甘,咸,寒,为该方君药.现代药理研究表明紫草 姗.?湖. ‘ 1634’现代中西医结合杂志 ModernJournalofIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicine2010 May.19(13) 含有乙酰紫草素,紫草素等多种萘醌色素,为抗炎抗菌有效成 分_4J.《本草纲目》认为紫草”苦寒无毒”,主治”心腹邪气,五 疸,补中益气,利九窍,通水道,疗肿胀满痛,以合膏治疗小儿 疮及面治恶疮顽癣,斑疹痘毒,活血凉血之”_5J.据《本草备 要》述”血热则毒闭,得紫草凉之,则血行而毒出”6J,说明紫草 有凉血,活血,解毒透疹之功效.金银花性甘,寒,有清热,解 毒,消炎的功效,主要抗菌有效成分为绿原酸,异绿原酸,对革 兰阳性,阴性菌均有一定的抑制作用,对多种皮肤真菌及呼吸 道病毒有抑制作用,既能抑制炎性渗出,又能抑制炎性增生, 还有能进白细胞的吞噬.白芷性辛,温,具有散结消肿,排脓 生肌之功,常外用于治疗痈肿疮毒,烧烫伤,毒蛇咬伤,皮肤瘙 痒等.《本经》:”所谓白芷长肌肤而润泽颜色者,以温养为 义……可长肌肉.”主要成分为挥发油和香豆素,其中具有活 性作用的欧前胡素能产生镇痛和广谱抗菌作用,能抑制大肠 杆菌,绿脓杆菌及变形杆菌,奥杜盎氏小芽胞癣菌等致病真菌 生长.冰片性苦凉,有散郁火,消肿止痛,防腐生肌之功效. 主要含多种萜类成分,可止痛,防腐.芝麻油润燥,软化痂皮, 解毒,生肌,用于疮肿,溃疡,疥癣.诸药配伍,有清热解毒,凉 血消肿,止痛,防腐生肌的功效,具有广谱抗菌及抗炎作用,主 要用于各种烧伤,烫伤,褥疮等,临床疗效显着.本研究显示, 采用四因素三水平,用k(3)正交试验法优选提取工艺能有 效提高复方紫草油制剂的质量. [参考文献】 [1]傅善林,尚天民,肖培根.几种国产药用紫草中萘醌色素的分析 [J].药学,1984,19(12):921 [2]程东升,唐启令,姜霁芳复方紫草油的制备与质量控制[J].中 国药业,2004,13(7):5O [3]张继平,蔡丽云,香卫红正交试验优选紫草油提取工艺的研究 [J].中成药,2002,24(1):l1 [4]《全国中草药汇编》编写组全国中草药汇编(上册)[M].北京: 人民卫生出版社,1996:867 [5]李时珍.本草纲目[M]3版.北京:人民卫生出版社,1986:26 [6]汪昂辑.本草备要[M].2版北京:人民卫生出版社,1987:37 [收稿日期】2009—10—21 气相色谱法测定拨云散眼药中冰片的含量 韩月芝,王岳,苏平菊 (河北以岭医药集团,河北石家庄050035) [摘要]目的建立测定拨云散眼药中冰片含量的方法.方法采用固定液为100%二甲基聚硅氧烷石英毛细 管柱(30mx0.25mD1×0.25m),程序升温.进样口温度180?;检测器:FID,250?,分流比20:1;氢气流速30roLl min,空气流速400mL/min;载气:高纯氮气脱氧1.4mL/min.结果龙脑在0.105,1.68g/L浓度范围内,异龙脑在 0.106,1.70g/L浓度范围内呈良好的线性关系.龙脑平均回收率为98.92%,RSD=1.26%;异龙脑平均回收率为 98.23%,RSD=0.99%(r/:9).结论该法操作简便,准确,专属性强,可作为拨云散眼药中冰片的质量控制方法. [关键词]拨云散眼药;冰片;含量测定;气相色谱法 [中图分类号]R927,11[文献标识码]B 拨云散眼药由牛黄,麝香,冰片,朱砂,琥珀,硇砂,硼砂, 炉甘石等组成,具有清热消炎,明目退翳功效,用于暴发火眼, 眼边赤烂,云翳遮睛.本方收载于1990年中药成方制剂标 准,原标准中无冰片含量测定方法,处方中冰片主要成分为龙 脑和异龙脑.笔者采用气相色谱法对本品冰片的含量测定进 行了研究,现报道如下. 1仪器与试药 1.1仪器GC—l12A气相色谱仪,ChromStation色谱工作站. 1.2试药龙脑,异龙脑对照品(供含量测定用),由中国药 品生物制品检定所提供,批号:110881—200503,111512— 200201;萘,无水乙醇为分析纯. 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱:HP一1NNOWAX,石英毛细管柱 (固定液为100%二甲基聚硅氧烷,30m×0.25lTlm×0.25 m).程序升温:初始温度100?,以每分钟1O?的速率升温 至200?,保持5rain;进样口温度180?;检测器:FID,250 ?,分流比20:1;氢气流速30mL/min,空气流速400mL/ [文章编号】1008—8849(2010)13—1634—03 min;载气:高纯氮气脱氧1.4mL/min,进样量2L. 2.2溶液的制备内标溶液的制备:取萘适量,精密称定,加 无水乙醇制成每1mL含5mg的溶液,作为内标溶液.对照品 溶液的制备:精密称取龙脑,异龙脑对照品各10nag,精密称定, 加无水乙醇25mL和内标溶液2mL,溶解,摇匀,即得. 2.3系统适用性试验取龙脑,异龙脑对照品溶液和内标溶 液各2L,注入气相色谱仪,测定,异龙脑,龙脑与内标的保留 时间分别为8.3,8.6,9.2min,三者之间分离良好,龙脑与异 龙脑分离度为1.93,萘与龙脑分离度为4.39,理论板数均不 低干5000. 2.4样品溶液制备条件的选择取本品4份,每份约60 mg,精密称定,置锥形瓶中,精密加无水乙醇25mL和内标溶 液2mL,分别超声处理(功率300W,频率25kHz)10,20,30, 40min,放冷,无水乙醇补足量,滤过,进样测定.结果见表1. 依据结果确定样品超声处理20min.因此,供试品溶液的制 备条件为:取本品约60mg,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密 加无水乙醇25mL和内标溶液2mL,密塞,称定质量,超声处