CD34^＋细胞在致敏小鼠气道浸润的研究

CD34^＋细胞在致敏小鼠气道浸润的研究 [标签:标题] ? 378?2003年6月第26卷第6期ChinJTubercRespirDis,June2003~Vo1.26,No.6 组的AM中STAT.活化的相对值为(4.2?1.8)×10,,而 IPF组STAT.活化的相对值为(78.6?7.2)×10,,两组比 较差异有显着性(P<0.O1).(3)相关分析:AM中STAT一 活化与BALF中细胞总数呈正相关,相关系数=0.926,P< 0.O1. 讨论STAT是一类新型细胞内信号传导和基因达调 控因子家族,在介导细胞因子的信号传导过程中起关键作 用,它由STAT1,6共9个成员构成.STAT.是STAT家族 中最早被发现并克隆的成员,广泛参与多种细胞因子的应 答,尤其与免疫性疾病和炎症性疾病的发生,发展有关.例 如Alzheimer大脑炎及支气管哮喘均与STAT.的异常活化有 关?.2].本研究通过BALF获得AM,提取核蛋白后用免疫斑 点法分析结果显示:与健康对照组比较,IPF组AM内存在 STAT.的异常活化,其活化机制不十分明确.本研究结果还 显示:AM内STAT.活化与BALF中细胞总数呈正相关,提示 STAT.异常活化与IPF肺泡炎的发生发展有关,但具体机制 cD细胞在致敏小鼠气道浸润的研究 万欢英周敏 过敏性哮喘是由多种炎性细胞和炎性介质参与的慢性 气道炎症,最近研究发现,抗原刺激气道后可引起骨髓中祖 细胞(cD细胞)扩增,分化,形成成熟的炎性细胞,这些成 熟炎性细胞从骨髓池释放到外周并募集到气道局部,介导了 速发性和迟发性哮喘反应,由抗原引起骨髓发生的上述变化 称为骨髓反应.cD细胞是多潜能干细胞,在健康人主要存 在于骨髓中,有学者发现,在过敏性哮喘外周血内cD互细胞 增多,提示骨髓释放的不仅有成熟细胞,同时还有祖细胞等, 这也预示了气道局部可能存在着祖细胞的浸润及其向成熟 细胞的分化,因此我们观察了抗原激发引起气道局部祖细胞 的变化过程. 材料与方法(1)12周龄的BABL/c野生型小鼠34只 (加拿大McMaster大学的EthicsBoard动物研究中心提供), 雌雄各半,体重(2O?2)g,按数字表法随机分为空白对照组 (A组)15只:用生理盐水替代卵蛋白(OVA)致敏和气道激 发.OVA组(B组)19只:按Zhang等方法建立哮喘模型, 第1,11天腹腔注射0.05%OVA和10%硫酸铝钾共200 (pH=6.5),第19,2O天从鼻腔注入0.4%OVA25气道 激发.(2)支气管肺泡灌洗(BAL):在气道激发后24h用 250PBS液灌洗2次,各组回收率比较差异无显着性.然 后将支气管肺泡灌洗液(BALF)在5~C,1300r/min,离心 10min,计总细胞数后将浓度调至1×10/ml制备细胞涂片, 作者单位:200025上海,第--N科大学附属瑞金医院肺科 尚不十分明确,尚需进一步研究. 参考文献 1SamoathD.CastroM,LookDC,etaLConstitutiveactivationofall eDithelialsignaltransducerandactivatoroftranscription(STAT) Dathwayinasthma.JClinInvest,1999,103:1353—1361. 2范贤明,张玲,李振华.STAT蛋白与疾病.细胞与分子免疫学 杂志,2001,17(增刊):33-35. 3中华医学会呼吸病学分会.特发性肺(间质)纤维化诊断和治疗 指南(草案).中华结核和呼吸杂志,2002,25:387-389. 4刘凌志,宗志红,李振华,等.肺间质病患者肺泡巨噬细胞蛋白 激酶C活性的变化.中华结核和呼吸杂志,2000,23:397-399. 5SchreiberE.MatthiasP,MullerMM,eta1.Rapiddetectionof octamerbindingproteinswith”mini—extracts”,preparedfromasmall numberofcells.NucleicAcidsResearch,1989,17:6419. 6LookDC,RoswitWT,FrickAG,etakDirectsuppressionofstatl functionduringadenovir~infection.Immunity,1998,9:871-880. (收稿日期:2002-07-25) (本文编辑:韩锟) 用Diff-Quik染色进行细胞分类.(3)肺组织用PBS液冲洗 后浸入含透明质酸酶,胶原酶和Dnase的液体内,剪碎后在 CO培养箱培养,然后过滤,洗涤,离心,计总细胞数,然后用 anti-CD45一FITC和anti—cD刍一PE或anti?IgG2-PE(美国Becton Dickinson公司)染色后上机检测. 统计学处理:所有数据用?s表示,两组比较采用团体 t检验,数据处理用SAS软件包. 结果cD细胞检测:经流式细胞检测B组每1O个 白细胞中有初始祖细胞(cD五CDlow)(4094.79? 2147.95)个,与A组的(1911.2O?1111.23)个比较明显增 多;B组嗜酸粒细胞系每1O个白细胞中有祖细胞(cDIL一 5R)(7.89?1.51)个,A组为(0.56?0.19)个,两组比较 差异有显着性(P<0.O1).提示抗原激发导致气道局部初 始祖细胞和定向祖细胞浸润均增加. BALF的细胞总数和分类:A组小鼠BALF中细胞总数 为(6.24?1.51)×10/L,嗜酸粒细胞为0.0017? 0.0013,中性粒细胞为0.076?0.005,淋巴细胞为0.004? 0.004,B组BALF中细胞总数为(26.78?4.87)×10/L; 嗜酸粒细胞为0.533?0.065,中性粒细胞为0.195?0.178, 淋巴细胞为0.055?0.052,两组炎性细胞数比较差异有显着 性(P<0.05).说明抗原激发导致气道局部细胞总数及分 类均明显增多. 讨论cD刍是一种糖蛋白分子,在骨髓中可表达于各系 祖细胞的细胞表面,而CD低度表达是炎性细胞祖细胞的 2003年6月第26卷第6期ChinJTubercRespirDis,Jun曼3.. 标志,结合两者可祛除污染的红细胞,血小板和成熟的白细 胞,因此在实验中我们将cD五CDlow作为炎性细胞祖细胞 的标志.在过敏性哮喘患者血和骨髓中炎性祖细胞数都有 所增加,提示过敏性哮喘慢性气道炎症形成的同时,存在着 骨髓的相应改变,但气道局部的炎性细胞浸润是单纯由于骨 髓中成熟的炎性细胞趋化而来,还是由局部祖细胞分化成熟 的过程参与还未明确.我们在抗原激发的急性期(24h)进 行了支气管肺泡灌洗和气道浸润细胞的分离培养,结果发现 抗原激发小鼠BALF中细胞总数和炎性细胞比例均升高,气 道浸润的炎性祖细胞和嗜酸系祖细胞的数量都明显增多. Sehmi等发现表达IL-5Rc~的cD去细胞对促血细胞生长因 子IL一5的反应性增加,可显示出向成熟嗜酸粒细胞分化的 特性.我们的结果显示,骨髓反应后不仅存在着成熟炎性细 胞从骨髓池释放到气道的过程,还存在着炎性祖细胞向气道 的浸润J,气道嗜酸粒细胞系中祖细胞的增加,也预示着在 气道局部可能存在着祖细胞向成熟嗜酸粒细胞分化的过程, ? 379? 而此过程可能与气道局部的炎性介质(如白细胞介素5)等 有关,其机制还有待进一步探讨. 志谢DavidSoutham,JenniferWattle,RussEllis,MarkDInman, RomaSehmi,PaulMOByrne在实验中给予了大力支持和帮助 参考文献 lSehmiR,HowieK,SutllerlandDR,etaLIncreasedLevelsofcD矗 hemopoietieprogenitorceilsinatopicsubjects.AmJRespirCeuMol Bio1.1996,15:645-654. 2WANHY,SouthamD,WattleJ,etat.Tramcofeosinophil—lineage committedprogenitorstothelungtissueofsensitisedmicefollowing allergenchallenge.JAllergyClinImmunol,2002,l:298. 3ZhangY.LammWJ.AlbertRK.eta1.Influenceoftllerouteof allergenadministrationandgeneticbackgroundonthemurineallergic pulmonaryresponse.AmJRespirCritCareMed,1997,155: 661-669. 蛋白激酶C对慢性缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞电压门控 钾通道的作用 张永昶倪望甄国华张珍祥徐永健 蛋白激酶c(PKC)在缺氧性肺动脉高压的发病机制中 起着重要的作用.但PKC对正常和慢性缺氧肺动脉平滑肌 细胞(PASMC)上电压门控钾离子通道(Kv通道)的影响尚 少报道.我们的研究旨在探讨PKC对慢性缺氧PASMC膜 上Kv通道的作用,以进一步阐明缺氧性肺动脉高压的发病 机制. 材料与方法雄性Wistar大鼠20只(华中科技大学同 济医学院实验动物中心提供),体重250,300g,用随机数字 表法分为正常对照组(A组)和慢性缺氧组(B组),每组各 10只.B组每天缺氧8h连续4周,建立慢性缺氧肺动脉高 压大鼠模型?.采用急性酶分离法(胶原酶I+木瓜蛋白 酶)获取单个梭形的PASMC.用全细胞膜片钳方法(膜片钳 放大器为EPC-9,List,Germany)测定PASMC膜电流和静息 膜电位.PKC激动剂12-佛波醇脂(PMA)500nmo~L和 PKC抑制剂GFX30nmoVL采用电极内液加药法.干扰电 流的排除:用无钙的细胞外液并加用四乙基铵(TEA)以阻断 钙激活的钾通道:电极内液中用ATP抑制ATP激活的 钾通道. 统计学处理:数据采集和分析软件用PULSE+ 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39970332) 作者单位:430030武汉,华中科技大学同济医学院附属同济医 院呼吸疾病研究室 (收稿日期:2002-07.16) (本文编辑:戎建琴) PULSEFIT软件(8.3版).为排除个体差异,电流采用其与 膜电容的相对比值(pA/pF),即电流密度来表示.所有数据 用4-s来表示,组间比较用t检验.n表示测试的细胞数 目.P<0.05为差异有显着性. 结果慢性缺氧对PASMC电生理参数的影响:B组 PASMC的静息膜电位为[(一29.0?4.8)mV,n=35],较A 组明显升高[(-42.5?4.6)mV,n:18],两组比较差异有 非常显着性意义(P<0.01).但膜电容不受影响,B组 PASMC的静息膜电容[(17.9?4.6)pF,n=40]与A组 [(19.7?5.8)pF,n=31]比较,差异无显着性(P>0.05). 另外B组PASMC的Kv通道电流也较A组明显减少, +50mV刺激时引出的峰值电流为[(624-11)pA/pF,n= 6],与A组[(1214-19)pA/pF,n=6]比较差异有非常显着 性意义(P<0.01). 表1两组大鼠对GFX在+50mV刺激时 Kv通道电流的影响(4-5) 注:与A组PKC应用前比较P<0.0l,与A组PKC+GFX应 用前比较P>0.05,与B组PKC应用前比较P>0.05