高效液相色谱法测定左乙拉西坦片的含量

高效液相色谱法测定左乙拉西坦片的含量 高效液相色谱法测定左乙拉西坦片的含量 第21卷第6期 2005年12月 广东药学院 JOURNALOFGUANGDONGCOLLEGEOFPHARMACY Vo1.21No.6 Dec.2005 高效液相色谱法测定左乙拉西坦片的含量 罗湘冀(珠海联邦制药股份有限公司,广东珠海519000) 肖拥军, 摘要:目的建立测定左乙拉西坦片含量的高效液相色谱法.色谱柱:Alltima.C,. 柱(5Ixm,4.6mm×250mm),流动相为甲醇.水 (体积比20:80),流速10ml'rain'.,检测波长为210nm.结果平均回收率99.9%(n:9),RSD=0.52%;精密度试验RSD:0. 47%: 重复性试验RSD=0.45%;溶液的稳定性RSD:0.38%(n=5);线性范围:0.204,1.632mg?mL'.,r:0.9997.结论方法简便,准 确,重现性好. 关键词:高效液相色谱法;左乙拉西坦片;含量测定 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1006—8783(2005)06—0687—02 左乙拉西坦(1evetiracetam)是比利时UCB公司研 制的第二代乙酰胆碱激动剂,为吡咯烷酮衍生物,用于 治疗局限性及继发性全身性癫痫….该药已于2000 年4月获得美国FDA批准上市,目前本品已在美国, 瑞士,英国上市.由于该药具有选择性保护局限性和 原发全身性癫痫的独特药理作用,是一种具有良好耐 受性,且药物相互作用低的新型广谱抗癫痫药物,具有 广阔临床应用前景. 左乙拉西坦片剂的检测方法未见文献报道.本文 建立了左乙拉西坦片的高效液相色谱测定方法,用于 本品含量测定,为控制该药的质量提供依据.该法准 确可靠,操作简单,可用于该产品质量的控制. 1仪器与试药 1.1仪器 日本岛津Lc一10Avp高效液相色谱仪(包括Lc一 10ATvp双泵,SIL--10ADvp自动进样器,sPD一10Avp 二极管阵列检测器,CLASS.vp5.02色谱工作站); MEqSLERAE240型分析天平;针筒式微孔膜过滤器. 1.2试药 左乙拉西坦原料,片剂,对照品(珠海联邦制药股 份有限公司研究所提供,归一化法含量99.8%);甲醇 (色谱纯,天津康科德);水为双蒸水. 2方法和结果 2.1色谱条件 色谱柱:Alhima-C18柱,(5Ixm,4.6mill×250mm); 流动相:甲醇.水(体积比20:80);流速:1.0mL? min,,检测波长:210rim;柱温40?;进样量:10L. 在上述色谱条件下,主药左乙拉西坦保留时间为 7.0min左右,理论塔板数为9200,拖尾因子1.15.稀 释样品,测得检测限为5ng. 按处方比例配制空白样品,置于100mL量瓶中, 加流动相至刻度,振摇,用0.45m微孔滤膜过,弃去 作者简介:肖拥军(1966一),男,本科,师,主要从事新药 研究开发工作. 初滤液,精密量取10进样,结果见图1,说明辅料不 干扰含量测定. 2000 1500 1000 500 0 026lUO261OO261O t/mint/mint/min 1对照品;2空白辅料;3样品 图1左乙拉西坦的HPLC色谱图 Fig.1HPLCchromatogramoflevetiracetam 2.2曲线 精密称取左乙拉西坦对照品50mg于25mL量瓶 中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,分别精密量取 1,3,5,6,8mL于10mL量瓶中,用流动相稀释至刻度, 摇匀,制成线性系列溶液.分别精密量取上述溶液10 注入液相色谱,色谱图.以质量浓度(P)为横 坐标,峰面积(A)为纵坐标进行线性回归,得回归方程 为A=1.868×10P+2.002×10,r=0.9997,当浓度 在0.204,1.632mg?mL范围时线性关系良好. 2.3精密度试验 取线性试验项下浓度为1.0mg?mL的对照品 溶液,连续进样6次,计算峰面积的RSD为0.47%, 明精密度较好. 2.4稳定性试验 取同一供试品溶液及对照品溶液,分别在0,2,4, 6,8h注人液相色谱仪,记录色谱图,计算峰面积的 RSD为0.38%(n=5),结果表明供试品溶液和对照品 溶液在8h内稳定. 2.5重复性试验 取同一批号样品,按"2.7"项方法测定6次,左乙 拉西坦片标示含量的标准偏差为0.45%,表明测定方 法的重复性较好. 2.6回收率试验 取左乙拉西坦对照品约40,50,60mg各3份,精 密称定,分别置50mL量瓶中,按处方加入辅料,加流 687 广东药学院,2005,21(6) 动相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液作供试 品溶液.另取左乙拉西坦对照品50mg,精密称定,置 50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作 对照品溶液.分别精密量取上述溶液各10注入液 相色谱,记录色谱图,按外标法以峰而积计算,平均回 收率为99.9%(RSD=0.52%,=9). 2.7样品测定 取本品20片,精密称定,研细,精密称取粉末适量 (相当于左乙拉西坦50mg),置50mL量瓶中,加流动 相溶解并稀释至刻度,摇匀,过滤,取续滤液作供试品 溶液.另取左乙拉西坦对照品50mg,精密称定,置50 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作对照 品溶液.分别精密量取上述溶液各10注入液相色 谱,记录色谱图,按外标法以峰面积计算标示含量. 3批样品含量结果见表1. 表1含量测定结果 Tab.1Assayresults 批号标示含量/% O10301 O10302 O10303 98.9 99.1 99.5 3讨论 3.1对左乙拉西坦溶液在190,400nm波长范围内 进行光谱扫描,左乙拉西坦只有末端吸收(见图2),因 此选用210nm为检测波长. 15oo 10O0 5oo O 2oo240280320360 A/nm 图2左乙拉西坦的紫外光谱图 Fig.2UVspectraoflevetiracetam 3.2选用甲醇和水为流动相,调节两者的比例,使保 留时间为7min左右,左乙拉西坦主峰与合成中间体 及新增杂质之间均有较好的分离度. 3.3本方法也可以用于左乙拉西坦片溶出度的检测. 参考文献: [1]罗湘冀.左乙拉西坦的合成[J].药学进展,2004,28(9):413. [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:二部[z].北京:化学 . y-,_ lk出版社,2005.244—245. (收稿151期:2005—09—05:修回151期:2005—11—20) (上接第662页) 2.4.4包封率测定精密吸取LMOP昆悬液1.0 mL,以PBS稀释并定容于10mL量瓶中,摇匀(A).精 密吸取1.0mL上SephadexG50柱,以PBS洗脱,流速1 mL?min,,接收洗脱液,每试管2mL.依次收集空白 洗脱液,含药脂质体和空白洗脱液,少量游离药物结晶 不溶于PBS,留在柱上.将含药脂质体流分合并置于 25mL量瓶中,加无水乙醇定容,充分振摇,0.45txm微 孔滤膜过滤,精密吸取续滤液5.0mL于10mL量瓶 中,加入内标1.0mL,用无水乙醇定容,摇匀(B).进 样,计算包封于脂质体中的药物量().同时,精密 吸取(A)液1.0mL置于25mL量瓶,用无水乙醇定容, 余按(B)处理方法处理,得总药量(),计算包封率, ER=W,/×100%.包封率分别为薄膜分散法(73.4 ?0.85)%,冻融法(95.2?1.01)%,高压乳匀法(72.2 ?0.96)%,逆相蒸发法(54.4?1.21)%. 3讨论 逆相蒸发法制备脂质体时,先将类脂溶于有机溶 剂,若药物溶于水,混合形成两相溶液,超声成乳状,减 压蒸馏除去有机溶剂.而甲氧沙林不溶于水,于是采 用将药物与类脂先形成脂膜,再加入PBS溶解成两相 系统,再减压蒸馏得到脂质体混悬液,光学显微镜下观 察脂质体明显多于薄膜分散法,药物结晶也少于薄膜 分散法. 688 冻融法先用薄膜法制得脂质体混悬液,在快速冷 冻过程中,由于冰晶的形成,使形成的脂质体膜破裂, 形成冰晶的片层与破碎的膜同时存在,这一状态不稳 定,在缓慢融化过程中,暴露出的脂膜互相融合重新形 成脂质体,光学显微镜下观察发现脂质体颗粒明显大 于薄膜法制得的脂质体颗粒. 粒径分析表明,冻融法的粒径最大,这是冻融过程 中膜破裂重新成膜后粒径会变大,薄膜分散法制得的 脂质体粒径大于逆相蒸发法,高压乳匀法粒径很小. 而包封率的大小以冻融法最高,可能是粒径较大的缘 故,薄膜法其次,高压乳匀法制得的脂质体虽然粒径 小,包封率却高于粒径较大的逆相蒸发法.所以LMOP 体外质量与制备方法密切相关,本实验采用的4种方 法中以冻融法效果最好,不足之处就是粒径偏大,可将 冻融法结合高压乳匀法来获得最好的效果. 参考文献: [1]李德爱,邵友梅,裴晓冬.国家基本药物-l盘床手册[M].北京: 化学工业出版社,1999.421. [2]何文,韩瑞玲,罗顺德.8一甲氧补骨脂素脂质体凝胶对白癜 风模型豚鼠的治疗作用研究[J]中国药房,2005,16(2):92. [3]何文,吴红霞,蔡鸿生等.8一甲氧补骨脂素脂质体凝胶的研 制[J]中国医院药学杂志,2004,24(1):3 [4]吴红霞,何文,蔡鸿生等,8一甲氧补骨脂素脂质体凝胶的皮 肤渗透性研究[J]中国药房,2003,14(11):655. —22;修回日期:2005—11—10) (收稿151期:2005—06