福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用机制研究

福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用机制研究 福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护 作用机制研究 228-华肾脏病杂志2005年4月第2l卷第4期ChinJNephrol,April2005,Vol2l,o.4 析判断水平{分重要. 参考文献 l王陪军.萧毅,左长京.螺旋crrIfIL管成像的原及临床应 用.见:景在平,主编.血管腔内治疗学.第l版,北京:人民 卫生出版社.2002.95.126. 2 America,lnc.(RSNA).Junell,2004. (收稿日期:2004.10.22) (本文编辑:李小萍) 福辛普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用机制研究 宋洁刘章锁 肝细胞生长子(ItGF)是一种具有多种生物学效应 重组HGF或HGF基疗可以明 的蛋白.研究表明, 延缓肾小管间质纤维化的进展.我们利川单侧输尿管使阻 (UUO)模型观察ACEI幅辛普利对大鼠输尿管使阻后肾 脏HGF,转化生长因子B1(TGF.B1)及增殖细胞核抗原 (PCNA)表达的影响,从而为ACEI在减轻肾问质炎症和 纤维化中的应用提供新的理论依据. 一 ,材料和方法 1.动物模型及分组:按文献[1制作UUO动物模型. 动物随机分成3组,分别为C组(假手术组)6只,UUO组 (手术组)6只,FOS组(UUO+福辛普利组)6只.FOS组下 术前1d及术后给予福辛普利10mg?kg_1.d--混悬液灌 胃,C组及UUO组每天灌胃同体积生理盐水.各组动物分 别在术后第14天膻,}}j鼠尾血汁测量收缩冉处北并收 集3nil血标奉及处北lj24h尿液,留取右侧肾脏,部分 肾组织以10%甲醛同定,其余组织迅速置于液氮中冻存. 2.生化检查:24h尿送检尿肌酐,尿蛋白,血标奉送 检血肌酐 3.肾组织病理:10%甲醛同定,行蜡包埋块,3m切 片,HE染色及Masson染色,光镜下观察.Masson染色半定 量分析按文献『1]. 4.免疫组化:均采SP法(北京中…公司)切片常 规脱蜡至水,3%H!O!处理,抗原热修复,分别用兔抗大鼠 HGF抗体,兔抗大鼠TGF.B1抗体,小鼠抗大鼠PCNA抗 体(美国SantaCruz公司1:200)4?孵育过夜,再滴加二抗, 三抗,最后显微镜下观察控制DAB显色.细胞浆(HGF, TGF—B1),细胞核(PCNA)染成棕黄色为阳性,同时采用删 除第一抗体的方法作为阴性对照.HGF,TGF.B1的表达 采用半定量分析l_.PCNA采用随机选取20个连续不重 复的视野(x400),计数肾小管细胞及问质细胞的阳性表 达数. 5.肾组织总RNA提取及RT—PCR:按文献f1].HGF 作者单位:730000兰州,l={肃省人民医院肾内科(宋沽);郑 州大学第一附属医院肾内科(刘章锁) 通信作者:刘章锁,450052郑州大学第一附属医院肾内科 引物序列为:上游引物5一TCCCCTGTCATAGGTAGT. 3,下游引物5.GTATFGGTGGqTCCCCTG.3(上海生 工公司).HGF扩增条件为:95?5min,94?30s.56% 30s,72?40s,共33个循环,最后72?,延伸5mit1,终 产物为547bp.TGF.B1及B.actin的引物,扩增条件,经产 物同文献[1].应用SYNGENE凝胶成像系统分析成像, 以目的HGF片段/B.actin片段的条带吸光度比值进行比 较. 6.统计学分析:计量数据用4-s表示.多组间差异性 比较采用方差分析,组间两两比较进行LSD检验.用SPSS 10.0软件进行. 二,结果 1.血压及生化改变:与C组十日比,UUO组及Fos组大 鼠收缩压,Cm,24h蛋白尿定量均无明变化. 2.肾组织的病理学改变:与C组十月比,UUO14d时 HE及Masson染色均示间质增宽.肾小管上皮细胞萎 缩,管腔扩张,单核,淋巴细胞弥漫浸润,成纤维细胞增生 及明显纤维化.FOS组纤维化程度较轻.见表1. 表1各组大鼠Masson染色及HGF,TGF.B1,PCNA 免疫组化结果(4-s) 与C组相比,P<O,05;与UUO组相比,P<O.05 3.免疫组化染色:(1)C组小管问质极少量HGF蛋 白的表达;UUO组及Fos组出现HGF阳性表达在小管上 皮细胞胞浆,部分小管周同细胞亦有表达:Fos组表达显 着高于UUO组(P<0.05).(2)C组肾组织TGF.B1主要位 于皮髓交界的肾间质细胞胞浆,表达较少..'--5C组相比. UUO组及Fos组TGFB1表达均增高(P<0.05),而Fos组 显着低于UUO组(P<0.05).(3)与C组相比,UUO组及 Fos组PCNA染色阳性细胞数均增多(P<0.05),而Fos组 显着低于UUO组(P<0.05).见表1. 中华肾脏病杂志2005年4月第2l卷笫4期ChinJNephrol,April2005,Vol21,No.4 4.RT—PCR:C组肾组织表达极少量的HGFmRNA;UUO 组及Fos组HGFn1RNA达增加,而Fos组HGFmRNA表达 着高于UUO组(P<O.05),见l皋I1. c组uuo组UUO+ACEI组 与c组相比,}Jp<O.O5;与UUO组相比,P<O05 图1各组大鼠HGFmRNA的RT.PCR结果 一,?论 本实验发现,LjUUO组十目比,福辛普利能着下倜 TGF—B1表达,降低PCNA阳性细胞数目,减轻肾脏病理改 变,明缩小绿色的问质部分面积,说明福辛普利可明 延缓肾小管问质纤维化进程, HGF通过多种途发挥护肾功能.奉实验发现,梗阻 14d时肾脏HGFmRNA及蛋白表达均略高丁对照组,福 辛普利使其表达明增高,说明阻断AngI/生成可以促进 肾脏小管问质HGFmRNA及蛋白表达所以ACEI的肾保 护作用除了已发现的机制外,促进内源性HGF生成也 该是重要机制之一.而实验中各组问血压并无显着性差 异.说明并非是通过降压作用达到肾保护目的. ACEI促进HGF表达的分子机制目前不清楚,猜测可 能通过减少Ang?水平,从而抑制了AngII介导的以下两 条途径:(1)Ang?可通过AT1,激活对百日咳毒素敏感的 G1蛋白,使腺苷酸环化受抑制,细胞内cAMP水平降低, 而cAMP降低可使HGF的表达下凋.(2)Ang?刺激TGF— p1表达.而增加的TGF—B1又可以在转录后水平抑制 HGF表达. 刘冬舟等[2.3j发现.UUO大鼠肾脏随着梗阻时间的延 长,HGF蛋白表达免疫组化半定量积分先升高,至第6天 时达到高峰,随后逐渐下降:而TGF—B1蛋白表达则持续 逐渐增高.本实验中UUO14d时肾脏病理改变已明, 而HGF表达仍略高于对照组,其差异原因有待探讨. 参考文献 l刘章锁,程根阳,宋洁,等,罗格列酮埘单侧输尿管梗阻大 鼠肾脏的保护作用.中华肾脏病杂志,2004,20:268—272. 2刘冬舟,贾汝汉,丁国华,等.肝细胞生长因子在单侧输尿 管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义}华实验外科杂志, 2oo2,l9:538—539 3刘冬舟,贾汝汉,丁国华,等.肝细胞生长因子在糖尿病大 鼠肾小管问质的表达及意义.Lf1华肾脏病杂志,2003,l9: l25一l27. (收稿日期:200409.02) (本文编辑:李耀荣) 氟伐他汀对高胆固醇血症肾脏损伤与血管植物血凝素样 低密度脂蛋白受体1表达的影响 于永慧烈,书珍汪翼董波陈瑶刘忠志 研究发现.脂质异常多伴有肾功能的降低并参与肾脏 疾病的发生发展.血管壁植物血凝素样低密度脂蛋白 (OX—LDL)受体1(LOX一1)是细胞毒性OXLDL在内皮细胞 中的新型受体.本研究通过建立兔高心同醇血症(HC)模 型,观察氟伐他汀财兔肾脏损伤的预作崩,并通过检测 肾动脉血管壁LOX1基和蛋白的表达水平,以探时其 发挥作用的可能机制. 一 ,材料与方法 1.建立兔HC动物模型:雄性新p兰大白兔24只,随 机分为3组(每组8只):埘照组(普通饲料),高脂组(含1% 胆固醇+5%猪油的高脂饲料)和他汀组(高脂饲料+氯伐他 基金项同:国家自然科学基金(30371496) 作者单位:25002l济南.IfI东大学LfI东省立医院Jk*"t?(于永 慧,孙书珍,汪翼,陈瑶),心内科(董波,刘忠志) 通信作者:汪翼,E-mail:sdjnwangy@163.con 汀钠10mg?kg_I.d),共喂养16周. 2.血清学指标检测:试验结束前,于3组兔耳中央动 脉取血测定总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL)和Set. 3.双肾单光子SPECT检测:于试验结束时,由耳缘静 脉注射rc.DTPA显影剂92.5MBq,利用双探头SPECT 仪,计算双肾肾小球滤过率(GFR),左右肾峰时[1r【TP(L), 1TrP(R)]和左右肾峰后半排时间[T1/2(L),T1/2(R). 4.病理:取左肾动脉与肾组织,常规固定,包埋,5m 连续切片,HE染色,在光镜下观察肾组织与纾动脉病理 学改变. 5.RT—PCR检测肾动脉LOX一1mRNA的表达:取右 肾动脉,以GAPDH作为内参照.将凝胶电泳图像输入 Kodak凝胶分析系统,计算LOX一1与GAPDH扩增条带吸 光度比值(相对系数)作为其表达强度. 6.免疫组化检测肾动脉LOX.1蛋白表达:左肾动 2l86420 l0000