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皮质醇(cortisol)作业指导书

2017-12-30 7页 doc 21KB 26阅读

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皮质醇(cortisol)作业指导书皮质醇(cortisol)作业指导书 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 1第 页,共 页 4 检验科免疫室 版本:A/0 皮质醇(cortisol) 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用竞争法原理,整个过程18分钟完成。 ? 第1步:20μl标本与生物素化的抗皮质醇抗体和钌(Ru)标记的皮质醇衍生物混匀,分别形成复合物,数量取决于标本中待测物的浓度。生物素化的抗皮质醇抗体一部分与标本中待测物结合,另一部分与Ru标记的皮质醇...
皮质醇(cortisol)作业指导书
皮质醇(cortisol)作业指导 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 1第 页,共 页 4 检验科免疫室 版本:A/0 皮质醇(cortisol) 项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 1. 分析原理 采用竞争法原理,整个过程18分钟完成。 ? 第1步:20μl标本与生物素化的抗皮质醇抗体和钌(Ru)标记的皮质醇衍生物混匀,分别形成复合物,数量取决于标本中待测物的浓度。生物素化的抗皮质醇抗体一部分与标本中待测物结合,另一部分与Ru标记的皮质醇衍生物结合。 ? 第2步:加入链霉亲和素包被的微粒。形成的复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。 ? 第3步:反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被清洗液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进行测定。结果由机器自动从曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 2. 标本要求 血清:按标准常规方法采集。 血浆:肝素、EDTA或枸橼酸钠抗凝均可。其中用枸橼酸钠抗凝的血浆,测定结果需+10%。 标本在2,8度可稳定5天,,20度可稳定3个月。只能冻融一次。 含沉淀的标本使用前需离心。 不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。 注意:由于皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化,应注明采血时间。 3. 试剂、校准品、质控品和其他所需 采用罗氏原装配套试剂。 试剂: M:链霉亲和素包被的微粒(透明瓶盖),1瓶,6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力: 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1:生物素化的羊抗皮质醇抗体(灰盖),1瓶,9ml。浓度90ng/ml,MES缓冲液0.1mol/l,pH6.0。含防腐剂。 2,R2:Ru(bpy) 标记的皮质醇-多肽(黑盖),1瓶,9ml。浓度25ng/ml,达那唑(danazol)20mg/ml,MES缓冲液0.1mol/l, 3 pH6.0。含防腐剂。 校准品: Elecsys 皮质醇定标液(Cortisol CalSet)货号11875124 质控品: Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)1和2货号11731416 其他所需材料: Elecsys2010、cobas e411分析仪需要 , Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号11662988 , Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号11662970 , Elecsys 添加剂液(SysWash)货号11930346 , Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean) )货号11933159 , Elecsys 2010反应杯(Assay Cup) 货号11706802 , Elecsys 2010吸样头(Assay Tip) 货号11706799 MODULAR ANALYTICS E170分析仪需要 , Elecsys系统缓冲液(ProCell M)货号04880340 , Elecsys测量池清洗液(CleanCell M)货号04880293 , Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯(PC/CC-Cup)货号03023141 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 2第 页,共 页 4 检验科免疫室 版本:A/0 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 , Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)货号12102137 , Elecsys废物盒(wasteliner)货号03023150 , Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) )货号03027651 各种分析仪均适用的材料 , Elecsys标本通用稀释液 货号11732277 , Elecsys 系统清洗液(SysClean) 货号11298500 4. 仪器和校准 使用仪器:瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准: 每批皮质醇试剂有一条形码标签,含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用Elecsys Cortisol CalSet定标液定标。 定标频率:每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次,如再次标定即根据下列要求: Elecsys2010、E170和cobas e 分析仪: ? 一个月(同一批号试剂) ? 7天(放置仪器上的同一试剂盒) 各种分析仪均适用的情况: ?根据要求进行标定:如质控结果超出范围时。 5. 操作步骤(以E 170为例) 5.1 校准操作步骤: 在编缉各项目的参数时,已经在Application—Calib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时,只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入Calibration—Status菜单,用鼠标选择需定标的项目,再根据需要点单点定标(BLANK键)或两点定标(TWO POINT键)、跨距定标(SPAN键)、多点定标(FULL键),再选择其它项目进行相应选择,最后点SAVE,将定标物放入在Calibration—Calibrator中定义好的位置,点Start,再点Start,仪器开始定标。 在Calibration—Status菜单中看定标结果,点Calibration Result键看定标结果,点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。 5.2 样本检测程序: 单个样本输入,在主菜单下选择Workplace- Testslection,在Sequence No栏输入标本号,然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目,点SAVE键,样本号自动累加。 批量常规标本的输入,在主菜单下选择Workplace- Testslection,在Sequence No栏输入起始标本号,然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目,点REPEAT,输入该批标本的最后一个标本号,点OK即可。 进样分析,将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好,放入进样盘内,按START键,输入该批上机标本的起始标本号,再点START键,仪器自动开始推架检测标本。 6. 质量控制 Elecsys 通用质控品(PreciControl Universal)1和2以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。 7. 计算方法 对每一个标本,仪器会自动计算皮质醇含量,单位是nmol/l,μg/dl或μg/l。换算方法 nmol/l x 0.03625 = μg/dl (x 0.3625 = μg/l) μg/dl x 27.586 = nmol/l (μg/l x 2.7586) 8. 参考范围 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 3第 页,共 页 4 检验科免疫室 版本:A/0 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 血清和血浆: 上午时间 7-10 a.m. : 171-536 nmol/l (6.2-19.4μg/dl) (n=144) 下午时间 4-8 p.m. : 64-340 nmol/l (2.3-12.3μg/dl) (n=137) 尿中游离皮质醇:100-379 nmol/24 h (36-137 μg/24 h) 唾液: 上午 8-10 a.m.: < 19.1 nmol/L (< 0.69 μg/dL) 下午 2:30-3:30 p.m.: < 11.9 nmol/L (< 0.43 μg/dL) 如有必要,各实验室应自己测定一个正常值范围 9. 分析性能 1.00?1750 nmol/l或0.036?63μg/dl 高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议1:10稀释。稀释后的标本皮质醇含量必须高于50nmol/l或1.8μg/dl。如用手工稀释,结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释,机器会自动计算结果。 10. 干扰因素 该方法不受黄疸(胆红素<60mg/dl)、溶血(血红蛋白<1.9g/dl)、脂血(脂质<2700mg/dl)和生物素<60ng/ml等干扰。 接受高剂量生物素(>5mg/天)治疗的病人,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。 不受类风湿因子干扰(1100U/ml)。 17种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体以及其它免疫反应的干扰。 怀孕、使用避孕药和雌激素治疗会导致皮质醇测定结果不准确。在使用泼尼松龙、甲基泼尼松龙或泼尼松治疗的患者会出现假性皮质醇升高。美替拉酮试验可导致11,脱氧皮质醇升高,由于交叉反应也可出现假性皮质醇升高。患21羟基酶缺损的病人,体內21,脱氧皮质醇升高,因而可出现皮质醇升高。在分析结果时,应考虑采血时间,另外严重的应激反应也导致皮质醇升高。 Elecsys皮质醇测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。 11. 临床意义 皮质醇(氢可的松)是最主要的糖皮质类固醇,对维持人体的多项机能有重要作用。与其它糖皮质类固醇激素一样,皮质醇由共同前体胆固醇在肾上腺皮质区合成而来。在外周血中,90%的皮质醇与皮质类固醇结合球蛋白(CBG)以及白蛋白结合后进行运输。 皮质醇最重要的的生理机能是升高血糖,抗炎和免疫抑制作用。 皮质醇的合成和分泌受下丘脑,垂体,肾上腺皮质轴的负反馈机制的调节。当皮质醇水平下降时,下丘脑分泌促肾上腺皮质激素释放激素(CRH),使垂体分泌促肾上腺皮质激素(ACTH),并由ACTH刺激肾上腺合成并分泌皮质醇。皮质醇本身对垂 体和下丘脑起负反馈作用。另外,机体在应急状态下,皮质醇分泌增加。皮质醇在血中的含量呈现昼夜的周期性变化。在清晨含量达到最高峰(700nmol/l或25.4mg/dl),随后在白天含量逐渐下降,到夜间含量降到最低点,大约是峰值的一半。因此,在分析结果时,了解采血时间是很重要的。检测患者血中皮质醇的含量可用于诊断肾上腺、垂体和下丘脑机能紊乱与否。皮质 醇含量增高见于库欣综合征,含量降低见于艾迪生病。在对上述疾病进行相应的地塞米松抑制治疗或激素替代治疗中,可检测皮质醇含量进行监测。 13(参考文献 文件编号:LAB,OP,MY020 XXXXXX 医院 Elecsys E 170/E 411 4第 页,共 页 4 检验科免疫室 版本:A/0 分析项目作业指导书 生效日期:2008-02-01 编写: 审核: 批准: 批准日期: 年 月 日
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