温度、光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响

温度、光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响 温度、光照和保存液对大鲵成熟精子存活状 况的影响 第23卷第3期 2004年3月 球 FISHERIES 科学 SCIENCE Vo1.23.No.3 Mar..2004 温度,光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响 乔志刚,李学军,李效宇,徐存栓 (河南师范大学生命科学学院,河南新乡453002) 摘要:本文对人工催产得到的大鲵精子,在不同温度,光照和保存液中的存活状况进行了观察研究. 结果明:15?条件下体外保存大鲵精子原液,有光照时精子存活5h,无光照时存活10h;相同温度下 精子原液经0.9%生理盐水,鱼用任氏液,蒸馏水,山泉水稀释后,精子在鱼用任氏液中存浩时间最长, 但与原液中保存精子的存活时间相比较有明显的缩短;通过对大鲵精子活力级别的判定,认为大鲵精子 在水温20,25?时受精能力最强. 关键词:大鲵成熟精子;存活状况;观察 中图分类号:Ts917文献标识码:文章编号:1003—1111(2004)03.0010—03 大鲵(Andriasdavidianus)属两栖纲(A. phidia)有尾目(Urodela)隐鳃鲵科(Crypto— branchidae),是我国二级重点保护野生动物.由于 其生存环境不断受到人类活动的侵害,加之大鲵自 身繁殖率低下,其数量在不断下降.为了拯救,保护 和合理利用大鲵资源,国内阳爱生(1979年),刘鉴 毅(1993年),卞伟(1996年),金立成(2000年)等先 后开展了大鲵的人工繁殖工作,并初步获得了大鲵 人工繁殖的技术成果.但在大鲵的人工繁殖过程 中,由于雌雄亲鲵发育不同步,雄鲵成熟率低及雌鲵 产卵持续时间长(几个小时或几天)等原因u,往 往不能使精,卵在适宜的时间内相结合,从而错过了 最佳的受精时间,为了避免精,卵在催产过程中的浪 费,笔者对产出的活力良好的大鲵精子在体外的存 活状况及保存措施进行了观察和研究,以期能够及 时提供活力良好的大鲵精子,提高卵子的受精率,为 早El实现大鲵人工繁殖的规模化生产,提供参考依 据. 1材料和方法 1.1大鲵精子采集 2001年7月,10月间,对45组大鲵(雌:雄=1 :1)进行了人工催产实验,催产过程中,选择两尾产 精较好的雄鲵,取精子原液各4ml于3个10ml刻 度试管中,各均分2份后分别在15,23,27?无光照 和有光照的条件下进行存放;另取精子原液各1ml 于4个10ml刻度试管中,分别用0.9%生理盐水, 鱼用任氏液,蒸馏水,山泉水稀释至10ml,轻 摇,各均分3份,在18,23,28?有光条件下存 放,以备观察研究.雄鲵的催产情况见表1. 寰1养麓池塘的水质 O7—103.751"-ICG2000IU+LRH—A25ug2770 O8—131.8"/-ICG2000IU+LRH—A25tag2398 *效应时同:指从注射澈幕后,到首次采到精子的时问. 采样时,为保证大鲵精子有良好的活力,在催 产后首次见到大鲵精子时,须让亲鲵继续在流水中 发育12h,然后再行采样. 1.2样品的观察 将上述保存的大鲵精子原液和稀释液分成两 组,对精子原液每间隔30min,取样观察一次; 精子稀释液每间隔10min取样观察一次.观察时, 取样一滴,置于清洁载玻片上,加22mm×22mm 盖片,静置1min,低倍镜(10×10)下随机选择 10个视野,观察大鲵精子的活动状况,记录精子 存活时间. 1.3精子活力的判定方法 参考金立成和汪建国对大鲵精子活力的分级标 收稿日期:2002—03—25;修回日期:2003一O6—24. 基金项目:河南省科技攻关项目(532265);河南省生物重点实验室资助项目 (PKL00001) 作者简介:乔志刚,(1965一),男,副教授. 第3期乔志刚等:温度,光照和保存液对大鲵成熟精子存活状况的影响11 准】,结合大鲵精子的活力状况,确定大鲵精子的 活力级别,并做好记录. 大鲵精子活力的分级是: a级:精子分散存在,其头部和尾部不断摆动 且有明显的定向运动趋势.这类精子(每个视野下 不少于10个)具有良好的授精力; b级:精子分散存在,一个视野下能见到的活 动精子不超过10个,但精子运动缓慢且运动方向 不明确,这类精子授精能力差; C级:精子活动微弱,且有堆积的现象出现, 有时只能见到其尾部在原地轻微摆动,这类精子不 能授精; d级:精子成堆状沉积,无任何运动能力,这 类精子不能授精. 2观察结果 2.1大鲵原液中的精子在不同条件下的存活观察 记录见表2. 表2不同光照,不同江度曩液中大曩?予存活状况 活力级别 时问15?23?27? 无光照有光照无光照有光照无光照有光照 2.2大鲵精子在不同保存液有光条件下的存活观 察记录见表3. 表3不同保存液有光条件下大鲵精子存活状况 3讨论 大鲵精子体外的存活时间在无 3.1在同一温度下, 光照条件下明显长于有光照的条件.l5?无光照条 件下大鲵精子能良好受精的时间将近10h(a级活 力),自然光照下为5h.因此,建议在人工催产授 精过程中,要尽量避免光照. 3.2大鲵精子在各种保存液中,其存活时间基本相 同,但从精子的运动能力看,在鱼用任氏液中相对较 强,因此,在人工授精选择大鲵精子稀释液时,建议 使用鱼用任氏液. 3.3根据实验观察,大鲵精子虽然在相对低温(如 18?以下)的环境中存活时间长,但其活动能力相对 较差,而在相对高温(如27?以上)环境中,大鲵精 子虽短时间内活动能力强,但其成活时间却较短(一 般不超过20min),因此,从提高卵子受精率的角度 考虑,人工催产大鲵的水温最好控制在20,25?较 为理想.但如果精卵成熟协调,在相对高温中,卵的 受精率可相应提高. 12水产科学第23卷 3.4大鲵精子在所有稀释液中的存活时间均显着 低于其在原液中的存活时间,且随温度的升高,其存 活时间有降低的趋势,因此在人工催产过程中,如果 雌雄成熟不同步,需要进行大鲵精子保存时,最好在 相对低温条件下保存精子原液,而不加其他稀释液 (或营养液).精子原液稀释后要及时进行授精工 作. 3.5从上述结果看,在大鲵的人工繁殖过程 中,当精子和卵子产出不同步时,为延长产出精子的 存活时间,提高卵子受精率,采用体外保存精子的方 法是完全可行的,但当采集到大鲵精子进行体外保 存时,要选择无光,低于18?的精子原液中进行,且 要尽量减少其在体外存放的时间(一般不超过4 h). 参考文献: [1]刘鉴毅,肖汉兵,林锡芝,等.人工生态条件下提高大 鲵催产率技术初报[J].淡水渔业1993,23(3):11— 12. 刘鉴毅,杨焱清,肖汉兵,等.中国大鲵人工孵化生态 初报[J].淡水渔业,1995,25(2):8—9. 刘鉴毅,肖汉兵,杨焱清,等.大鲵成熟精,卵的形态学 观察及受精卵孵化中的形态变化[J].淡水渔业,1999, 29(3):6—8. 金立成,汪建国.大鲵生物学与养殖实用技术[M].台 湾:水产出版社,1997,120—127. 金立成.大鲵的保护与增殖[J].中国水产,2000,(3): 28—29. 阳爱生.大鲵人工繁殖的研究[J],湖南水产科技. 1981,(3):80—81. 阳爱生,卞伟,刘运清.大鲵性腺发育的组织学观察 [J].动物,1981,27(3):240—246. 阳爱生,刘国钧.大鲵人工繁殖的初步研究[J],淡水渔 业,1979,(2):1—5, EffectsofTemperature,LightandPreservativeFluidontheSurvival ofSpermatozoainChineseGiantSalamander(Andriasdavidianus) QIAOZhi—gang,LIXue—jun,LIXiao—yu,XUCun—shuan (CollgegoflifeScience,HenanNormalUniversity,Xinxiang,453002,China) Abstract:SpermatozoonactivityofChinesegiantsalamander(Andriasdavidianus)wasobse rvedatdifferenttemperature,Lightin. tensionandthepreservatives.Theresultsshowedthatthespermatozoainthesemensurvivedf or5hunderlightand10hwithout lightat15?.1ongerthanthoseinthemihsupplementedwity0.9%physilogica[solutionandRinger'Sflud.Themaximalfertilizatio ofthespermatozoafromChinesegiantsalamanderoccurredatawatertemperatureof20, 25?. Keywords:chinesegiantsalamander(Amtriasdavidianus);activityofsperm;reproduction 墼锦河蟹打通"出园"之路 盘锦市在不断扩大河蟹养殖面积的同时,努力开拓国际市场,提高经济效益.2003 年,盘锦市河蟹 出口总量189t,同比增长85.2%;创汇1323万元人民币,同比增长76.8%.出口的主 要渠道和途径: 一 是养殖销售大户通过市检验检疫局检验出口日本,美国,俄罗斯36.6t;二是销售大户通过挂靠南方深 圳等地有出口权的企业,出口(雄蟹)98t,主要出口到香港,台湾地区;三是销售大户直接出口到韩国 54.4t.四是该市有直接出口权的两家水产企业直接出口.河蟹出口总量逐年增加,意味着该市丰富的河 蟹资源将走上国际舞台,蟹农致富之路更加宽广了. (盘锦市海洋与渔业局) ]]]]j