去窦弓神经大鼠的胸主动脉重构

去窦弓神经大鼠的胸主动脉重构 . 44-中国药理学通报ChinesePfu2rmacologicalBulletin2001Feb;17(1){44,7 去窦弓神经大鼠的胸主动脉重构 陶霞缪朝玉陈红苏定冯 (第二军医太学基础部药理学教研室,上海200433) 中国墨书分类号R一332;R322.12;R544 文献标识码A文章编号1001—1978(2001)01—0044—04 摘要目的观察大鼠去窦弓神经(SAD)后由于血压不稳 定而引起的血管重构.方法10wk大鼠行SAD或Sh,mt, 术后16周用离体动脉环实验测定SAD和相应Sham组太鼠 胸主动脉对去甲肾上腺索(NE)和氯化乙酰胆碱(Ach)的收 缩和舒张反应;用组织病理学和计算机图像分析技术对大鼠 的胸主动脉连续切片进行观察和比较.结果与Sham组 相比,SAD大鼠离体胸主动脉环对NE的收缩反应增强,对 Ach的舒张反应减弱:sAD组大鼠胸主动脉的结构改变主要 以血管中层平滑肌细胞肥大和基质扩充为主.结论太鼠 去窦弓神经后单纯血压不稳定可引起血管重构. 关键词去窦弓神经;动脉;结构;重构 重构(remodding)是指组织在生长,衰老及病变 过程中受血流动力学,神经和体液等因素的影响,其 结构和功能发生的改变J在高血压病的发生和 维持过程中,血管重构是心,脑,肾等靶器官损伤的 病理学基础_2J.大鼠去窦弓神经(sinoaortic-dener— ration,SAD)后血压波动性(bloodpressurevariabili一 妒,BPv)明显增高,但24h平均血压水平并不增 ~IIE3J,这种大鼠模型的胸主动脉是否发生重构目前 未见报道.本实验旨在观察大鼠去窦弓神经后由于 长期血压不稳定而引起的胸主动脉重构,包括血管 结构和收缩舒张功能的改变. 1材料和方法 1.1SAD大鼠的制备[4J和分组10wk的SD大 鼠(购自上海SIPPR—BK实验动物有限公司)经盐酸 氯胺酮注射液50nag?kgI1加地西泮注射液5mg? kg腹腔注射麻醉后,仰卧位,颈部正中切开后分 离双侧主动脉神经,切断.再暴露颈动脉窦区域,清 除该区的神经支配,并用10%的苯酚溶液涂擦局 部,最后缝合切口,对照组在同样条件下施行假手术 (sham-operation,sham). 1.2检验SAD是否完全大鼠术后16周用上述 2000—10-24收稿.加00—12-25修回 国家自然科学基垒资助项目,No39670831 作者简介:陶霞.女,30岁.医学博士; 苏定冯.男.47岁,教授,博士生导师 方法麻醉,经股动脉行低位腹主动脉,颈外静脉插 管,术后第2天静注新福林(3,5g-..),观察血 压升高时心率的变化,如果血压升高50mmHg (6.67kPa)而心率减慢<2O次?rain,,认为SAD 完全,进入下一步实验.给Sham对照组大鼠同样 剂量的新福林心率减慢(6O,100)次-rain一. 1.3胸主动脉收缩和舒张功能的测定.大鼠用 上述方法麻醉,打开胸腔,取位置相对固定的胸主动 脉条上段,移人含95%+5%cO2饱和的Krebs— Henseleit(K—H)营养液[组成(rnmol?L..):KCI4.7; Nl118;CaCl22.5;MgSO41.2;KH,PO41.2; N~HCO325.0;葡萄糖5.6]的培养皿内(37?),仔 细剔除粘附于胸主动脉周围的脂肪组织,截取2,3 nm长的2,3个胸主动脉环,随后用自制金属钩将 动脉环悬置于含K—H液,95%+5%co2,37? 的浴槽中,一端连接张力换能器和台式平衡记录仪, 调节静息张力2g,稳定60rain,每隔15rain换液1 次.(1)用NE制作动脉环收缩反应的量一效曲线 (2)用NE100预收缩,用Ach制作动脉环松驰反应 的量一效曲线. 1.4组织病理学检查胸主动脉一部分取出作功 能实验后,结扎在体胸主动脉近心端,行腹主动脉远 心端向心方向插管,用100g?L的中性福尔马林 液在90mmHg压力下灌注30rain,摘取位置相对 固定的胸主动脉.继续用100g?L中性福尔马林 液固定24h,经各级酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包 埋连续切片5m,分别行HE,VB/VG染色,观察组 织病理学改变. 计算机二维形态定量分析系统由IBMPS/2 80486DX33主机,NECMuhisync3FGX型采色显示 器,wESO0M600C型彩色监视器,oLYMPusHH-2 型生物显微镜,Panasonicwv—CP410型摄像机,科 技嘉仪器仪表有限公司生产的CA6300真彩图像采 集卡及中国科学院自动化技术公司研制的通用颗料 计算机图像分析系统软件组成.形态定量分析:在 HE切片分析血管外径,内径,管壁厚度,壁厚/内径 比率和平滑肌细胞核个数/视野,在苯胺蓝染色,VB 染色和Neubert酸性茜素蓝染色切片上分别分析胶 原纤维,弹力纤维和平滑肌相对面积比(Aa%). 中国药理学通报Chi黜m舯妇B”,z2001Feb;17(1)’45’ P<O0l(student’sunpaired,test Thb2anruc加诅c~Lent0rthethoradc钠她In删瑚瑚啦c也肭n1ed姐拓’;=) ‰:sh~ffrloperation;SAD 1.5数据统计处理实验数据用?表示,用非 配对t检验进行显着性检验. 2结果 2.1胸主动脉对NE的收缩反应与Sham组相 比,SAD大鼠胸主动脉对NE的收缩反应增强(图 1,,对Ach的舒张反廊降低(图2) 2O00 g 尘1000 兰 F咄lCt~,ltraetlth’linduc~luoc~pitlephrltle inrattho~~ci~~rtieJ ,+,,6尸<005.P<nnIsh啪 1OO t 里 善 50 兰 ; 0 一 i0—9—8—7—6—5—4 Log[norepinephzin]II1olU. }2relax~lk)nindudatl|I|djninrII~,raci(‘}nrir? ?5.,,OJI<U.U5<llllIsJ1iil 22胸主动脉的形态定量特征与Sham组相比, SAD组动脉的管壁增厚,壁厚/内径比率,胶原纤维 Aa,平滑肌A丑增加,弹力纤维Aa减少,血管内径, 外径和腔面积增大,VSMC/视野低于Sham组,但 差异无统计学意义.提示在此级血管的管壁增厚 中.VSMC肥大的形式存存(阿3;表1,21 一一 _一 |nR3M_npoltilethla~,riasrrLIm (1eft)盯sAD(rght)rata16wee~ Ap~el:Victoriablue-stained40xdecreaseinthereJative~]Fea.f elas6n;BpanelAnilinebluc-s*ained40×increaseintherelativeamof ~Uagen;Cpand:Acidalizarinhlue-s~alned40×increasemthereladve amofSMC 3讨论 血管重构是血管对血流动力学或体液因素的改 变而发生适应性变化的过程.血管的收缩和舒张功 能在维持或调节正常血压中具有重要作用.在多种 高血压动物模型中胸主动脉对NE和5一羟色胺等激 动剂的血管收缩敏感性增加l6一.目前普遍认为NE 引起的血管收缩至少有两种成分,一种是由NE作 用于血管平滑肌上.一受体,激活受体操纵性钙通道 使钙内流,同时使钙库的钙释放,提高细胞内钙浓度 —............................................................ L 46?中国药理学通报ChinesePhorTmacologicalBulletin2000Feb;17(1):47,50 而使平滑肌收缩【;另一种是NE作用于血管内皮 细胞使之释放内皮源性收缩因子(endothdiura-de rivedcontractingfactor,EDCF),使平滑肌收缩J 在动物及人高血压病存在不同程度的内皮细胞功能 障碍,具体表现在Ach等扩血管物质引起的内皮依 赖性的血管舒张能力下降J.SHR血管内皮细胞 产生的内皮舒张因子EDRF/NO减少l1..1.本实 验结果显示,SAD大鼠胸主动脉环对NE收缩反应 增强,且具有剂量依赖性,血管的内皮依赖性舒张反 应低于Sham组.发生这一现象的机制尚不完全清 楚,可能与太鼠长期去窦弓神经后BPV增高使血管 平滑肌的反应性增敏或血管内皮与平滑肌之间的相 互作用有关. 在高血压病的发展中,动脉重构构成了高血压 并发症及循环紊乱的病理生理学基础.高血压病大 动脉的结构重构主要表现为血管肥厚(vascularhy— pertrophy).是由于高血压时,太动脉受血管内 腔压力升高的影响,管壁增厚,中层平滑肌细胞肥大 或/和增生以及细胞外基质扩充(主要为胶原纤维), 动脉的弹性层发生退行性病变,导致血管顺应性下 降,管腔扩大13,14J.我们的实验也发现,SAD大鼠 胸主动脉的内径,外径较Sham大鼠均增大,且管壁 增厚,壁厚/内径比率增大,胶原纤维含量增加,弹力 纤维含量减少.相同太小视野的胸主动脉血管平滑 肌细胞(vSMC)棱数目未发生明显改变,平滑肌相 对面积增加,说明vSMC体积增大(即肥太) 太鼠去窦弓神经后由于单纯血压不稳定可引起 明显的血管重构.其机制尚不完全清楚,根据我们 实验室的工作积累和文献资料,我们提出如下假设: BPV增高的直接作用表现为对组织的灌注时高时 低,并有可能造成血管内皮细胞损伤,而其间接作用 主要考虑血压不稳定时体液调节系统被激活,其中 以肾素一血管紧张素系统(RAs)最为重要.近年来, 我们发现SAD大鼠血中血管紧张素?浓度正常,但 主动脉,心,肾等组织中有升高趋势.进而,在血管 紧张素有关基因的微卫星多态性分析中,我们初步 研究发现SM)术后16wk,大鼠的肾素和AT1受体 发生等位基因改变.用RT-PCR技术研究发现. SAD术后16wk左心室和主动脉的AT1受体的 mRNA上调但是否伴有其他系统的改变尚有待 于进一步的研究. (致谢:本实验得到第三军医大学病理学教研宣 张树辉博士的帮助,在此表示衰的感谢f) 参考文献 【Nun~aguctuK,Eg~shiraK,Takett~toMalChronicinhibition ofnitricoxides,mthesiscaLLsesCOITX’Ipd’Vmicro,.ascularr~node[iag inratsH,碑nm.1995;26:957--62 2CanauA.DevereuxRB.Roman?al’Patternsofleftvmtric— uLarhypertrophyandgeometricre~rodelinginessentialhypt.rten slonJAmCoilCardio1.1992;19:【550,8 3龚侃,刘建国,程舅血压波动性增高引起的靶器官损 伤第二军医大学学报,1997;18:462,4 4陶霞,缪朝玉扬有才elall上窦弓神经大鼠的心肌蛆织草 构第二军医大学学报.【998;19:2i9,21 5姚伟,朱镗英,蒜定冯.粉防己碱和甲基莲心碱对大鼠离体胸 主动脉环收缩的影响中国药理学通报,1991;7:357,9 6WhiteRM.RiveraCO.DavisonCB?ffermtia[contributionof endotheIia[ftmcfion…aLdafreactivityinconduitandre,stance arteriesfromdmxyoordmsterone—salthypertemivcratsH,社rt— sion,1996;27:1245,53 7CauvinC.MMikSInductionofCainfluxandintraceltularCa re[easeinisolatedrataor”taandmesenteficnlce~,essdsby norepinephfineactivatiotlofalDh1ro~ptorsJPha~nacolExp T,1984;230:413,8 8KamsicZS.ShepberdJTEdh占ur『1_nYed?cv(factors Hs~erten.qon.1991;18(suppl?):86,92 9TaddieS.VirdisA.MatterPetalHypertermionprema tllreagingendothelidfunctioninhuman.H2,1~rtenlqonl997: 29:736,41 10I>-ngAY,RappJPAbsenceoflitd~eforPndothdMnitricoxide synthaselocustobloodpre~ureinDahLro.tst~vpertensicm.1997; 29:49,52 11JamesonM,DaiFX,LuherT日Endothehum-derivedcon tractingfac[or8inresIa兀cea~eriesofy0urspCml~almUSlyhywr t目ra性beforedevelopmem州t?恤n- sion,1993;21{280,8 12CunhaV,Sa培adoHc,SalgadoMCEnalaprilpreventsaortichy perm~livqtyadrea~x3dellingin?l~dney,.nccliphyp付t rat8withoutreducingarterialprce~ureE2”pF‰?jPhys一 , 2000;27:474,9 13A?呻K.WolfB.Nichols(alAorticchang~inexoerimen— remJfailuro~hypeIplaslaorhypertrophyo1smoothm~wlecdls ?,1997;29:770,5 14NiederhofferN.LanaudIdjouadieneI.GitmmtellvPufCa[ci ficatic~ofmediale]mstief;bc僵andaorticeta,ticityHypert~lffon 1997;29}999-1006 Structuralandfunctionalremodelingofthoracicaortae insinoaortic.denervatedrats TAOXia,MIAOChao—Yu,CHENGHong,SUDing-Feng (DeptofPharmacology,SecomlMilitaryMedicalUniversity,Shanghai,200433) ABSTRACTAIMToinvestigatethestructuralandfunctionedremodelingofthoracicaortaeinsinoaorti. q-国药理学通报Chine,~ePharmacologh~alBulletin2000Feb;17(1):47,50 冻干重组葡激酶对正常人凝血,纤溶系统影响的研究 陆化盛瑞兰徐卫张建富吴雨洁陆凤翔’ 黄元铸许迪陈椿’盛燕辉王晓搜 (南京医科大学第一附属医院血液科,心脏科南京210029) 中国图书分类号R-332:R345.57;R554;R9732 文献标识码A文章编号10011978(2001)0l一0047—04 摘要目的探讨冻干重组葡激酶(r—sak)对正常人出,凝 血及纤溶系统的影响,为进一步临床应用提供翔实的依据. 方法健康志愿者2u铡静脉注射不同剂量r-Eak(1,25,5, l0,15mg),观察临床出血情况及动态监测用药前后BT, BPC,AP’IT,PT,TT,Fg,?D,PL:A,啦PI:A.结果2lJ例 中4例有轻微出血,皮肤牯膜为主,可自行止血,无1例伴 内脏出血.其中3例牙龈渗血,2例穿刺部位出血.4例有 IYD轻微异常,其余以上指标皆无变化实验显示本药为高 度选择性溶栓药,对正常人出凝血相无改变.结论在本试 验剂量范围内,该药是相对安全的,可很好耐受,但用于临床 的最佳刺量有待进一步临床验证: 关键词重组葡激酶;健康志愿者;纤维蛋白选择性溶栓 药;临床观察;纤溶指标 重组葡激酶(recombinantstaphylokinase, r-Sak),系中国科学院上海植物生理研究所和成都 金鹏生物技术有限公司共同研制的一种新型溶栓 药,与现有的溶栓剂相比,其溶栓作用较强,较快,对 纤维蛋白专属性高等特点.目前国内外皆无市售, 国外少量临床试验表明它在溶栓的同时不激活全身 纤溶系统,出血危险少LlJ.国内仅完成临床前试 验,国内外皆无本药对正常人耐受性及安全性的报 告,为观察该药对人的凝血,纤溶系统的影响,本文 2000.0329收稿,200{).08—29修回 国家重点科技项目(攻关)专题资助,No96—901—0l一8l 作者简介:陆化,女.44岁,副教授; 盛瑞兰,女,60岁,教授主任医师 选择不同剂量r—Sak用于健康志愿者,通过检测相 关的凝血,纤溶多项指标,结合临床观察,从血液学 角度探讨其安全性和耐受性,为进一步I临床应用提 供翔实依据. 1对象与方法 1.1研究对象研究对象为健康志愿者,人选 为:?年龄18--50岁;?女性受试者排除妊娠期,月 经期及哺乳期;?试验前经全面检查证明身体健康. 检查包括:详细询问健康史,患病史,过敏史及 自发出血等现象;一般体格检查;实验室检查:血型, 血尿常规,肝肾功能,空腹血糖,血电解质,乙肝二对 半,胸透,心电图,二维超声心动图;特殊血液学检 查:出血时间(BT),血小板计数(BPc),血小板聚集 试验,激活部分凝血活酶时间(APTT),凝血酶原时 间(PT),凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原(Fg). 1.2受试药物rSak冻干粉由上海植物生理研究 所和成都金鹏生物技术有限公司提供,经中国药品 生物制品检定所检定,批号:980601.规格:1mg/安 瓿,活性:6.2×10AU 1.3试验方法 1.31试验分组参照卫生部颁布的I期I临床验 证分组方法20名符合人选标准的健康受试者,其 中男性17名,女性3名,年龄18,49岁,平均为 (25.5=9.3)岁,按身高,体重,年龄随机分为4组: 预试验组3例,给药剂量1mg2例,2.5rag1例;试 验组按给药剂量5mg,10mg,15mg共分为3组, 分别为5nag组4例,10mg组4例(另5例用此剂 量做药代动力学研究者一同并人观察故共9例).15 mg组4例 denervated(SAD)ratsMEI]D咀)SSDratsunder— wenteitherSADOrsham-operationattheageof10 v,,eeksxteanweeksafteroperation.tkeex3nlrac— tionandrelaxationofthethoracicaortaeweremea suredinisolatedpreparatioias;Themorphological charageso{arterieswereexaminedbyusing histopaihologicalmethodandcomputerimageanaly sis.RESUIISTheE—inducedcontractionwasin— creasedandAchinducedrelaxationofaorticrings~~vas depressedinSADrats;Thestrueturatremodelingof tb~racicaortaewascharacterizedbymedialVSMC hypertrophyandmatrixaccumulations.CONCLU. SIONVascularfunctiormlandstrueturatr~modeling carlbefoundinsinoaorticdenervatedrats. KEYWORDSsinoaortic—denervation;aortae;strue— ture;remodeling