果蝇的三点测交

果蝇的三点测交 果蝇的三点蝇交 摘要 果蝇是蝇蝇蝇蝇中常用的模式生物～学其生蝇周期短等蝇多蝇点蝇蝇蝇特性和基因定位 的究提供了研很大便利。此次蝇蝇～首先 学并蝇蝇蝇察了雌雄果蝇的性～蝇蝇分雌雄状区果蝇～然后通蝇三点蝇交蝇蝇～蝇了果蝇蝇交的基本技蝇～最后用生物蝇蝇的方法蝇蝇蝇据蝇行～定了雌果蝇学运数确 X染色上控制白眼、焦蝇毛和小翅的三基因蝇的相蝇位置。体个 1.引言 1903年～Sutton根据分裂蝇程中染色的行蝇孟德蝇假蝇的因子;基因,的行蝇减数体与即 平行蝇一事蝇～推基因位于染色上。同蝇他蝇蝇～蝇些基因在形成配子蝇不能自由蝇合断体将 而是相互蝇蝇。 Morgan等人的蝇蝇蝇蝇了蝇推蝇～同蝇～他蝇蝇蝇～蝇蝇不是蝇蝇的～相互蝇蝇的基因同蝇可以通蝇染个 色交蝇蝇生重蝇～体Morgan蝇蝇蝇蝇强度染色上蝇蝇基因的直蝇距有蝇～距越近～交蝇机与体离离 会越少。 1913年～Morgan的生学Sturtevant按蝇思路～以重蝇蝇率作蝇基因蝇的距尺度～定个离确 了蝇已知的果蝇当X染色上基因的相蝇蝇序距～蝇制了蝇蝇史上第一蝇蝇蝇蝇蝇蝇体几个与离学学——X 染色蝇蝇蝇～提出了基因在染色蝇性排列的蝇点。体并体 蝇蝇蝇蝇蝇蝇究及育蝇工作具有高的考价蝇。例如～借助蝇蝇蝇～我蝇可以快速的分或蝇学研很参离 移一些目蝇基因。目前果蝇、玉米等一些物蝇都蝇制了蝇蝇蝇蝇蝇。 蝇蝇蝇上蝇示的是基因在染色上的理蝇位置及距～而不是蝇蝇位置及距。蝇在～人蝇可以体离离 利用放射性同位素蝇蝇的DNA分子探蝇蝇染色蝇行原位蝇交～用蝇蝇方法可以蝇定一基因体个 在染色上的蝇蝇位置。体 此次蝇蝇～我蝇利用三点蝇交法蝇定了果蝇X染色上的三基因,小翅;体个m,、焦蝇毛 ;sn,和白眼;w,的相蝇位置～蝇蝇蝇三基因蝇制了基因蝇蝇蝇。通蝇蝇次蝇蝇～我蝇更深蝇一并个 步了解了果蝇的蝇交蝇程～提高了辨蝇雌雄果蝇的准度～蝇蝇了果蝇麻醉和表型蝇察～也更加确 蝇蝇到了蝇蝇在蝇蝇蝇蝇中的作用～蝇蝇蝇蝇蝇有了更深入的了解。学 2.蝇蝇材料 2.1蝇蝇材料 2.1.1蝇蝇材料 表型眼、翅、直毛，为为为为为为为为为为为+ + +,的野生型黑腹果品系,为为为为 表型白眼、短翅、焦毛，为为为为为为为为为为为w m sn,的三性突果,为为为为为为为2.1.2蝇蝇器具 双筒体微一台,为为为为为为为 解剖两根,毛笔,眼科,培瓶,麻醉瓶,透明塑料板,不干胶等。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为2.1.3蝇蝇蝇蝇 果培基，附,,乙。为为为为为为为为为为为为为 2.2蝇蝇方法 2.2.1蝇蝇材料准蝇 培基的制养养养养养 为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为算所需培基的各成分,及培瓶的数量,将培瓶 菌。按照果培基成分及配制程依次加入各成分,拌为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 均匀,分装,将培基在室温下干燥为为为为为为为为1~2天,待其表面完全凝固后使用。 果培养养养 果的最适培温度为为为为为为为为为25?,培基配制完成,并干燥为为为为为为为为为为1~2天后,即可接。成为为为为 一般交配一两天后即始卵,受精卵为为为为为为为为24h内可孵化成幼虫,幼虫生活4天后始为为 化蛹,从蛹壳中羽化出来的果为8~12h后即可交配,所以7天左右即可生新果,为为为为为 在此内倒掉成,收集女后,即可始行。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 养养养养养女的收集 由于从蛹壳中羽化出来的果为8~12h后即可交配,所以清除瓶中所有为为为为为为为为为为 成,之后为为为为8~12h内，8h更可靠,从瓶中收集幼,收集的雌即女。为为为为为为为为为为为为为2.2.2蝇蝇技能蝇蝇 果麻醉及察方法养养养养养养养养 在麻醉瓶的塞子上滴几滴乙,将塞子塞上,一段后,使麻为为为为为为为为为为为为为为为为 醉瓶中充乙。拍培瓶壁,果震落在培基上。拔为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 去麻醉瓶塞与培瓶塞,迅速将培瓶口倒扣在麻醉瓶口为为为为为为为为为为为为为为为为为为 上。拍培瓶果落入麻醉瓶中。把麻醉瓶中的果为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 拍落在瓶底。果失去附壁能力,落入瓶底,麻醉即告完成。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 将麻醉的果置于体微下,用小毛笔或解剖的察。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 把麻醉的果移入一新培瓶,将瓶横,用毛笔将果为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 挑入,醒后再将培瓶起,以免果粘在培基上死亡。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 养养养养雌雄果的辨 大小:雌体通常比雄体大 为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为形:雌体腹部稍尖,厚呈卵形,雄体腹部,相窄小呈柱状。 为为为为为为为为为为为为为为条:雌体腹部背面有窄相近的5条黑色条,雄体背部只有为为为为为为为为3条,上部两条窄, 最后一条且延伸至腹部腹面,呈一明黑斑。为为为为为为为为为为为为为为为为为 为为为为为为为性梳:果胸足跗共有5为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为。雄第一胸足跗的第一基部有一梳状黑色鬃毛 为为“”为为为为为为构,即性梳。雌没有性梳。 2.2.3蝇蝇步蝇 第一周,,,,wmsnwmsnW,M,SN?确定交合:为为为为为X X×XY(以下化为为为m sn w/m sn w×+ + +/Y)W,M,SNW,M,SNw,m,sn X X×XY(以下化为为为+ + +/+ + +×m sn w/Y) ?收集三性突体的女,收集的女独存放,用。为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为 ?按,在为为为为为为为为为为为为为个培瓶中放入至少2每为为为为为为为为为为为为为为为果,接完,好,注明 为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为交合,日期,者等目。在接前几天察培 为为为为为为为为为为为为为为为为为为基是否霉,如霉斑,立即更培瓶 第二周 ?7-8天后蛹黑,将上周接的本清除干。为为为为为为为为为为为为为为为为为为 ?配制足量培基。为为为 第三周 ?将孵化出的F子麻醉,察翅形、毛形、色等性状,并为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为做。1 ?从F中挑至少为为为2为为为为为为,放入培瓶中置于25?下培。为为1 第四周 清除培瓶中所有的为为为为为为F为本。1 第五周 把F全部麻醉致死,先按眼色和翅形将果区分,再用解剖果毛形,为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为2 8为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为不同型的果数目,将果在下表中,至少200~300只果。所有察为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为束后,将果倒入水池或死盛留器中。 3.蝇果 3.1蝇蝇蝇果蝇蝇 3.1.1 蝇交蝇合: m sn w/m sn w×+ + +/Y 和 + + +/+ + +×m sn w/Y3.1.2 收集蝇女蝇蝇蝇,2011年10月18日 早7点 3.1.3蝇本接蝇蝇蝇,11年10月18日,清除:为为为2011年10月25日 3.1.4 F表蝇型1 表1 F中表蝇型量数1 m sn w/m sn w×+ + +/Y+ + +/+ + +×m sn w/Y为本 数量 表型 ???? 374647+++，野生型, 32---，三性,为为为 3.1.5 F雌雄蝇接入培蝇的蝇蝇,瓶2011年11月1日1 3.1.6 除培蝇中清瓶F1的蝇蝇,2011年11月8日 3.1.7 F不同表蝇型蝇察蝇蝇个体2 表2 F表蝇型量蝇蝇数2 m sn w/m sn w×+ + +/Y+ + +/+ + +×m sn w/Y 为本据为为为交后交型为为为F代的表型推为F21数量配子型为为F表型2?? + + +13410152+ + +未交为m sn w6712m sn w未交为m sn +183m sn +为为交+ + w345+ + w为为交m + +247m + +为为交+ sn w132+ sn w为为交m + w41m + w双交为+ sn +01+ sn +双交为合为29410183 3.1.8 F2重蝇蝇的蝇算个体 表3 三点蝇蝇中～重蝇蝇的蝇算 + + +/m sn w×m sn w/Y表型为得数比例重为为为为生在 m-snm-wsn-w+ + +13468.4% m sn w67 m sn +1817.7%??+ + w34 m + +2412.6%?? + sn w13 m + w41.4%?? + sn +0 294100%14%30.3%19.1%合为 表4 三点蝇蝇中～重蝇蝇的蝇算 + + +/m sn w×+ + +/Y;?蝇蝇个体, 表型为得数比例重为为为为生在 m-snm-wsn-w+ + +5277.1% m sn w12 m sn +39.6%??+ + w5 m + +710.8%?? + sn w2 m + w12.4%?? + sn +1 合为83100%13.2%20.4%12% 3.1.9 蝇蝇蝇蝇制 m sn w 14 19.1 33.1 第一:为为P: m sn w/m sn w×+ + +/Y F,+,+,+/m sn w×m sn 1w/y m sn w 13.2 12 25.2 第二:为为P: + + +/+ + +×m sn w/Y + + +/m sn w×+ + +/Y;?蝇蝇个体, m sn w 15.1 19.5 34.6 为为为为为为为为为为为为为为为准:中出的相序与距离 3.1.10 各蝇蝇率及干涉蝇算并 表5 各蝇蝇率及干涉并 蝇蝇第一蝇第二蝇 蝇目 双交蝇1.42.4 并蝇率0.631.5 干涉0.37—— 并为为率=双交为为为为为为为为为为为为率两个交率之 干涉=1-并为为率3.2蝇蝇蝇果解蝇 位于同一染色上的基因蝇多的蝇在一起～蝇就是所蝇的基因蝇蝇。但蝇蝇的基因也可以蝇生条体 交蝇。在减数I前期～尤其是蝇期～配蝇中的染色不是蝇蝇的平行～而是在某些点上蝇出双体 交叉～在交叉的部位～同源染色非妹染色蝇蝇生互蝇～使得原位于同一染色上体姊体来体 的基因不再伴同蝇蝇～蝇蝇蝇象就蝇交蝇。而同源染色非姐妹染色蝇蝇的交蝇～直接蝇致了称体体 同源染色蝇的基因重蝇。体 由于蝇交比可以直接反蝇配子的分比～所以子一代蝇性蝇交蝇～重蝇蝇;数离数个体与个体即 指重蝇型配子占蝇配子的百分率,可以蝇易的求出。根据重蝇蝇～可蝇一步定不同基因在确 染色上的相蝇位置和排列蝇序～蝇蝇程蝇基因定位。体个即 此次蝇蝇～分蝇以三蝇性和野生型蝇蝇本蝇行正反交～通蝇三点蝇交法;通蝇一次蝇交个体个体即 和一次蝇交,～同蝇定了三蝇等位基因;小翅;确m,、焦蝇毛;sn,和白眼;w,,的排 列蝇序和蝇蝇距～分蝇蝇算了蝇率。下面分蝇蝇蝇。离并并 第一:为为P: m sn w/m sn w×+ + +/Y F,+,+,+/m sn w×m sn w/y(?蝇蝇个体)1 此蝇蝇蝇蝇得果蝇蝇多～蝇准据相比蝇～蝇蝇蝇蝇准的定了三蝇等位基因的排列蝇序和蝇蝇距与数确确离。 个体断的表型便可判出相蝇雌配由于雄果蝇Y染色完全蝇蝇～不蝇生任何交蝇～所以通蝇体F2 子中蝇生了蝇的交蝇。怎 第二:为为P: + + +/+ + +×m sn w/Y F,+ + +/m sn w×+ + +/Y;?蝇蝇个体,1 此蝇蝇蝇第一蝇略有不同～定蝇上蝇～此蝇蝇蝇不于三点蝇交～但由于雄果蝇与从来并属Y染色体 完全蝇蝇～不蝇生任何交蝇～蝇于此蝇蝇蝇～只能通蝇F中雄性定个体来确F雌果蝇蝇生的配子中21 蝇生了蝇的交蝇;怎F中雌果蝇表型都蝇野生型～所以在此蝇蝇蝇了量,。数2 此蝇蝇蝇偏差蝇大～蝇然三等位基因蝇序判正～但基因蝇距偏个断确差蝇大～尤其是sn-w蝇的 重蝇蝇蝇准蝇相与个去甚蝇～蝇致整基因蝇距偏小。 4.蝇蝇 4.1蝇蝇分析 与数数确没霉蝇准据相蝇照～第一蝇据蝇蝇准～蝇蝇蝇程中有出蝇培蝇基蝇或其他被蝇染的情况～蝇明蝇蝇蝇程中无菌操作蝇蝇到位～但在麻醉果蝇蝇～有放蝇果蝇的情况蝇生～可能蝇致据偏数差～而且我蝇蝇蝇～蝇然在蝇蝇F代蝇可以个体区来把果蝇麻醉致死～但死亡的果蝇翅膀蝇起～蝇分大小翅蝇困蝇～2 尤其是在蝇察雌果蝇蝇～由于雌果蝇型蝇大～蝇比～蝇翅和小翅蝇比不如雄果蝇强体与体烈。蝇然有蝇些蝇蝇～但第一蝇蝇蝇整体来上蝇是成功的。 第二蝇蝇蝇偏差蝇大～可能是以下原因引起的,几个?本为为为为为太小。蝇行三点蝇交蝇蝇据越多数越精确。由于蝇交蝇合的安排～只能利用F雄果蝇的性蝇定三蝇等位基因的基因蝇序和蝇距状来～2 蝇致蝇蝇蝇本蝇小～造成偏差～?果为三蝇性的生个体很虫存力弱～在幼密度蝇高蝇易在自然蝇蝇中被淘汰～在蝇蝇中此因素也有可能引起蝇差,?为为为为为为为为为为为为为为为为为操作不熟,在果行麻醉,有放走果的为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为情况生,造成偏差,?果性状把握不到位, 不能准确区分一相性状,每为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为尤其是翅和小翅,致差, ?为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为察果会有一些幼小的成,由于其体型小,各 为为为为为为为为为为为性状不易区分,来差,?从F雌雄果的数量上来为为为为为为为为为为为为为为为看,雌果个体多2 于雄果,是为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为,与存在突强因雌果全野生型,生活力 为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为的雄果争空,致雄果个体数目少,来差。 于一为为为为为为为为为为为为为为为为点,我可以在以后的中将F的本适当为为为为为为为为为为为为为为多接,以大本。1 在中为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为我注意到以下象:?三性个体的数量明少于野生型,其原因是三蝇性的生个体很虫存力弱～在幼密度蝇高蝇易在自然蝇蝇中被淘汰～?表型为m + w和+ sn +的个体数量最小,甚至没有,是双交为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为造成的,而由于双交率很低,可以直接判定sn是位于中的,?本次第一为为为为为为为为为为为为为为为为为为为得出双交率1.4%,而根据两个交为为为为为率17.7%和12.6%为为为为为为为为为算出来的理上的双交2.23%,为为为为为为为为为为为为为为为为为件双交率低于理上双交为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为率,可生一次交,每它的近也生也生一次交的机 会就要减少一些,为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为。一般用并象称涉涉干率来表示干的大小,算并率得0.63,为干涉为0.37。并为为为为为为越率越小。明大,干w涉或m的交方是有为为为为为为为为为为影响的。 本次在上,没有完全为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为遵循三点交的方法,了第二,通F中2雄果的性状来算三等为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为位基因的距及序。并合理的安排好了蝇蝇蝇程～蝇于F代,2在接后为为8天内做了两次,为为为为为为为为为为为为为为为为为得到了大量的本，第一,,在五周之内完成了蝇蝇～蝇蝇了蝇蝇据～数并断做出自己的分析和判。 4.2 注意事蝇 ?女收集:女的收集为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为十分重要,若本交使用的 不是女,可能出为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为无法解的交象,影响果。 ?无菌操作:麻醉果,将所用为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为器具用酒精消毒,待酒精 后再使用,保持无菌,否行下一次接,为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为容易使培基染菌,致果的死亡。?麻醉程度要适度:若将果麻醉为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为致死,其翅膀起,不利于察突型,且F代果为为1需接,需为为为为为为为为为为为为为为为要其保持生活状。 ?倒果的方为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为式、:倒果不能放走果,不能死 果,否果为为为为为为为为为为为为为为造成影响。 ?接果,为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为要正确区分雌雄果,若接入的全同一性 的果,不会生下一为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为代,致程延。 ?整个程中,为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为要隔几天就去察一下果,若出培 基染菌和果死亡等为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为为象,可以及采取救措施,避免耽。 参考文献 为大翔.为为为为学.生命科学.科学出版社.2011.1，9,