唑类抗真菌药物对伊马替尼及其代谢产物在大鼠体内药代动力学影响研究

唑类抗真菌药物对伊马替尼及其代谢产物在大鼠体内药代动力学影响研究 论文目: 唑耋拉真苴荭堑盟鱼呈鲞星区甚岱进亡堑 垄太鼠佳凼垫垡麴左堂髭蛔的班窒 答辩委员会主席: 蔡剑平教授 答辩委员会委员: 卢中秋教授 邱相君副教授 论文答辩日期: 年月日温州医学院硕士学位论文 目 录 缩略词表? 中文摘要? 英文摘要? 前言??. 日舌??. 第一部分高效液相色谱法检测血浆中伊马替尼及其代谢产物浓度的 建立和评价 第一节材料与方法 第二节结果?.. 第三节讨论?.. 第二部分唑类抗真菌药物对伊马替尼及其代谢产物在大鼠体内的药 代动力学影响的研究 第一节材料与方法??。. 第二节结果?..??... 第三节讨论?.. 结论附录致谢综述及参考文献独创性声明温州医学院硕士学位论文 缩略词表 温州医学院硕士学位论文 唑类抗真菌药物对伊马替尼及其代谢产物 在大鼠体内的药代动力学影响的研究 摘要 目的 建立高效液相色谱方法测定大鼠血浆中伊马替尼及其代谢产物 的浓度。研究酮康唑、伊曲康唑和伏立康唑在大鼠体内对伊马替尼及 其代谢产物的药代动力学影响,为临床合理安全用药提供参考。 方法:、建立伊马替尼的高效液相色谱检测方法:高效液相色谱仪为 系列,包括四元泵、在线脱气机、柱温箱、自 动进样器、二极管阵列检测器、化学工作站...】。 血浆样品采用液液萃取法,用乙酸乙酯提取伊马替尼及其代谢产物,以水 一.% 三氟乙酸.乙腈为流动相进行洗脱。色谱条件:色谱柱选用 ..,,,。流动相:水:.%氟乙酸:乙腈:.:.; 流速:?~:柱温:?,检测波长:。 、药代动力学试验:健康雄性大鼠只随机分成组,每组只,分 别为:对照组、酮康唑组、伊曲康唑组和伏立康唑组试验组。组大鼠禁食 后分别灌胃.%、酮康?、伊曲康唑?分、伏立康唑 ?。从甲磺酸伊马替尼给药开始前、给药后.、、、、、、 、、、采集尾静脉血.。高效液相色谱法分析各点伊马替尼血药浓度,用药物与 统计软件 ..分析药代动力 学参数。 结果: 、血浆中伊马替尼和最低检测浓度分别为.?和. ?~,伊马替尼在. ?。和在. ?’线性范围内线 性良好,伊马替尼的相关系数.而的相关系数.。伊 马替尼和的日内和日间精密度均小于%,相对回收率分别在 .%.%和.%.%范围内,绝对回收率分别在.%.% 和.%.%范围内。 、通过.软件对伊马替尼和的血浆浓度数据进行处理, 均采用非房室模型统计矩计算药代动学参数。温州医学院硕士学位论文 伊马替尼结果显示:?与空白对照组相比,酮康唑组的伊马替尼/、 .、啪、、.删的药动学参数存在显著性差异., 其中缸增加.%,/减少.%,增加.%、瑚、增加.%、 延长.%、删延长.%,而其他主要药动学参数尼:、弧和 /无统计学意义.,这也说明酮康唑能够明显影响伊马替尼的体内代谢 情况;伏立康唑组的舣.增大了.%,而其他药动学参数虽有改变但 无统计学意义;伊曲康唑组的药动学参数与空白相比不存在显著性差异., 说明伊曲康唑对伊马替尼代谢的影响不明显。 结果显示:?与空白对照组相比,酮康唑组的.去甲伊马替尼的 主要药动学参数跗:、驭、.、。存在显著性差异妒.: 觚降低.%、/延长.%、戤延长倍、.延长.%、啪 延长.%:伏立康唑组的.去甲基伊马替尼的主要药动学参数除和 均存在显著性差异尸.,戤降低.%,/:延长.%,/ 增大了.倍,/增大了.倍,减少了.%,啪减少了.%; 伊曲康唑组的.去甲基伊马替尼药动学参数相比空白对照组不存在显著性差 异 .。 结论: 体内研究表明酮康唑和伊马替尼合用时,酮康唑可以明显抑制大鼠体内伊马 替尼的代谢,可明显提高大鼠血浆中伊马替尼的和戡,降低了 的和.,;伏立康唑对伊马替尼的影响次之,伏立康唑增加了伊马替尼的 觚,降低了的戤和;而伊曲康唑对伊马替尼的影响无统计 学意义。产生差异可能与三种唑类抗真菌药物分别对和.抑制程度 和影响大小不同有关。 关键词:酮康唑;伊曲康唑;伏立康唑;伊马替尼;;大鼠;药代动 力学;温州医学院硕士学位论文 ’’ : . , . . : .. ? , , , ,;. , . . ? .%.. .: , ,,? .. , ‘,‘‘ . ‘。, ,,,,,,,,? . . . 月: . . .?? 温州医学院硕士学位论文 ?~. . ’严.. . ’产. ..‰ .% .%.%,, .%~.% .%.%.%. . . .. .砀 , 、/、 、一、.、删妒.。.%, . 一.%,戕.%,//, /, 【 , .%,戤 ,/ . 毅 , . .%, 觚.% 删.%,/ / .一 .,.舣 . . :,, 戤;; ... :,,,,, ,, 温州医学院硕士学位论文 前言 药物相互作用是影响临床药物疗效的一个主要原因。这些相互作用通过改变 药物的吸收,分布,代谢和排泄来影响药物的药代动力学和药理活性。大约 .%的不良反应是由药物相互作用引起的,特别值得注意的是癌症患者在接 受治疗和控制病情的过程中如何优化药物治疗剂量以达到最低的毒副作用【。 伊马替尼是一种有选择性的作用于.和的酪氨酸激酶抑制剂, 是人类第一个人工合成的具有分子靶向肿瘤生成机制的抗癌药【。伊马替尼是 慢性粒细胞白血病和胃肠道间质瘤的首选药物【‘】,已被证实伊马替尼与多种的 药物产生相互作用,包括抗生剥,免疫抑制药物,解热镇痛药【】,心血管药 物【和抗真菌剂【】等。有文献显示和代谢酶的抑制剂利托那 韦、茚地那韦可以增加其血浆药物浓度。这些相互作用大部分涉及清除率和生物 利用度的改变,而这些改变都是通过代谢而引起伊马替尼药代动力学和 分布的改变。等【】报道了一例胃间质瘤患者由于合用伊马替尼和兰索拉 唑引起的不良反应,认为这是两种药物都通过代谢引起的。因此,影 响可能引起潜在的药物代谢动力学相互作用。 有文献【】报道一些抗真菌药物如酮康唑与伊马替尼合用时,伊马替尼觚, 和啪分别明显增加%.,%俨.和% 俨.:清除率降低.%.;代谢产物分别降低.% 尸.,%妒.和%.。在实验中酮康唑使伊马替尼的暴露量 增加了%,使药物在人血液中的浓度极大增加,可能造成严重的毒副作用如血 小板和中性粒细胞减少、肝毒性以致终止治疗甚至可能致死。有发现抗真菌 药物 如氟康唑【’ ,酮康唑【, ,伊曲康唑【,,伏立康唑【,对酶活性 都有一定抑制作用。由于伊马替尼是和.底物,术后感染或者预防感 染所使用的药物存在潜在的药物相互作用,从而引起药代动力学和药效学的改 变。频繁的使用抗真菌药物可能与伊马替尼产生相互作用,因此我们需要更多的 关于和其他药物合用是的安全使用信息。 鉴于以上背景,为使癌症患者得到长久安全有效的治疗,防止药物潜在相互 作用引起的严重不良反应而终止治疗,因而有必要做进一步的实验研究,特别是 随机对照试验,来评价同时使用伏立康唑时伊马替尼的有效性,从而指导临床医 生合理选择,更好的为治疗癌症优化给药,提高肿瘤反应,开发更广阔的应 用前景。温州医学院硕士学位论文 参考文献, . . 【】 ,: . 【】 , .,: , , . ,, 【】 , .,:, , , 【】 . .,:?】 , 。 /. ,: . , 】 ,. , : 【】 , , , . .,:? . , ,【】 ,,.,: . 【】 , . ,:? . 【】 , ., : 。 , , 【 】 . , , ,: .】 , , .,: , . 【 】 , .,:? . ’ , , 【】 ,: .. 【】 , , , , . ,: .】只 , ?, , , . : . , , 【】 .,: , 】 , ., 温州医学院硕士学位论文 . . . . :. .【】 , , ,. ,: , 【】 . . :? 【】 , , , . .: : 温州医学院硕士学位论文 第一部分高效液相色谱法检测血浆中伊马替尼 及其代谢产物浓度的方法建立和评价 伊马替尼可以选择性地抑制融合蛋白的酪氨酸激酶活性,是人类 第一个人工合成的小分子靶向药物,主要用于慢性粒细胞性白血病和胃间质瘤的 一线治疗,。多项研究显示伊马替尼血浆与其临床疗效具有相关,而且对 于部分耐药患者如果提高伊马替尼给药剂量可以扭转耐药矧,因此对于使用伊 马替尼的患者进行血药浓度检测是十分有必要的。目前文献。】报道的主要采用 液相色谱法和液质联用色谱法,相对于液质联用,高效液相色谱法成本更低,而 且仪器在国内也较为普及,同时灵敏度达到了检测要求。在样品处理中,有文献 【采用固相萃取方法,不仅成本高、费时而且操作流程复杂。而且同时测定伊马 替尼及其代谢产物的文献较少,因此本实验以这些方法为基础,建立液液萃 取的 高效液相色谱检测方法,为伊马替尼的药代动力学研究打下基础。 第一节 材料与方法 .主要仪器 仪器名称 仪器公司 系列 高效液相色谱仪 , 四元泵 在线脱气机 柱温箱 自动进样器 二极管阵列检测器 电子分析天平. 梅特勒.托利多上海仪器公司 涡旋混合器. 姜堰市新康医疗器械有限公司 超纯水系统. 法国公司 高速离心机. 上海安亭科学仪器厂 氮吹仪 杭州蓝焰科技有限公司 .主要试剂和药品 罡礴酸伊马替尼标准品 突津帝时发尘黻 技术有限公司 温州医学院硕士学位论文 加拿大 .去甲基伊马替尼 酮康唑 大连美仑生物技术有限公司 伊曲康唑 大连美仑生物技术有限公司 伏立康唑 武汉圣天宇有限公司 非那西丁 美国公司 .主要试剂配制 .甲磺酸伊马替尼标准品溶液 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取甲磺酸伊马替尼标准品 于容量瓶中,用甲醇溶解定容至,得浓度为?‘的甲磺酸伊马 替尼标准储备液。用甲醇稀释成浓度以为、、、.、、.、.、.的标准应用液。 . .去甲基伊马替尼标准品溶液的配制 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取去甲基伊马替尼标准品 于容量瓶中,用甲醇溶解定容至,得浓度为. ?’的.去甲 基伊马替尼标准储备液。用甲醇稀释成浓度以为、、.、.、.、.、 .、. ?‘的标准应用液。 .非那西丁对照品的配制 用灵敏度为.的电子分析天平准确称取非那西丁对照品于 容量瓶中,用甲醇溶解定容至,得浓度为. ?。的非那西丁标准储备 液。 . .%氟乙酸溶液的配制 准确吸取三氟乙酸 ,用超纯水稀释并定容至 ;. 滤膜过滤后 使用。 .色谱条件 色谱柱: . ,,,; 保护柱:? 保护柱. .,,; 流动相:水:.%三氟乙酸:乙腈:.:. ?: 流速: 柱温:?,温州医学院硕士学位论文 / 检测波长: .血浆样品的处理方法 准确吸取待测血浆样品 管中,加入 于. .非那西丁溶液 /溶液 .,涡旋混匀秒,然后加入 ?’,再加入. 乙酸乙酯,涡旋 。接着 ?离心,取上清液 .于 锥形玻璃试管中,然后用液氮吹干,用 .流动相复溶,设定此进样检 测。 第二节结果 .方法的专属性 空白血浆、伊马替尼血浆标准品、去甲基伊马替尼标准品以及大鼠血浆样品, 经高效液相色谱仪分析测定得到的色谱图见图。由图可见在本实验条件下, 伊 马替尼与内标非那西丁能完全分离,没有明显的内生杂质峰干扰。伊马替尼 和去 甲基伊马替尼的保留时间分别为.和.,内标非那西丁的保留时间为 .。可见本方法具有较高的专属性。 一 一 ? ? ,、、 温州医学院硕士学位论文 一 ? ? ’ ‘?一 .,?,一一~ 夕~、、~~??一一~一~.、』 一 一一。一一~一‘?一一 。 ’ 图伊马替尼和的色谱图 .空白血浆,.血浆标准品,.血浆样品;.,.伊马替尼,.内标. . , ,. ,. ;.,., .线性关系及最低检测限 取数个 的管,加入伊马替尼 ?。和.去甲基伊马替尼 温州医学院硕士学位论文 ,再加入甲醇此配制成含伊马替尼 。’和一 ?‘各 去甲基伊马替尼甥?。的溶液,然后再取适量依次用甲醇稀释成伊马替 尼浓度为.、.、.、、.、、、 ?以和去甲基伊马替尼浓度 为.、.、.、.、.、.、、 ?一,按样品处理方法处理后进 行色谱分析,记录伊马替尼、.去甲基伊马替尼和内标峰面积,以前两者与内 标 的比值为纵坐标,以伊马替尼和.去甲基伊马替尼为横坐标绘制标准曲线,得 线性回归方程如下: 伊马替尼】,.一.产. .去甲基伊马替尼】,..,. 表明伊马替尼血浆浓度在. ?和.去甲基伊马替尼血浆浓度在 . ?范围线性关系良好,定量下限分别为.熠‘以和.腭‘~。 结果见图,图 图伊马替尼血浆标准曲线 .温州医学院硕士学位论文 图 .去甲基伊马替尼血浆标准曲线 . .精密度试验 .日内精密度试验 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作 液使伊马替尼和.去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,.??和 .,.,. ?~,每种浓度份按血清样品处理方法处理,同一天内测定, 计算日内精密度。上述三种浓度测定结果的均小于%结果见表、表。 表血浆伊马替尼的日内精密度以,: . ? 以, 表血浆一去甲基伊马替尼的日内精密度甩,:匕 . 以, 温州医学院硕士学位论文 .日间精密度试验 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作 液使伊马替尼和.去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,.嵋?和 .,.,. .?一,每种浓度份按血清样品处理方法处理,连续天同样 的操作,计算日间精密度。上述三种浓度测定结果的均小于%结果见表 、表。 表血浆伊马替尼的日间精密度栉,: . 腮,士表血浆.去甲基伊马替尼的日间精密度甩,: .以, .回收率试验 .加样回收率试验 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作液 使伊马替尼和一去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,. ?。和., .,. .?,每种浓度份,按上述血浆样品处理方法处理后检测,依据标 准曲线计算检测浓度。以检测浓度与加入量的比值计算相对回收率。结果见 表温州医学院硕士学位论文 、表 表血浆伊马替尼的相对回收率以,:坯 . 以,: 表血浆的相对回收率,: . 朋, .绝对回收率试验 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作 液使伊马替尼和.去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,. .?’和 .,.,.“?~,每种浓度份,按上述血浆样品处理方法处理后检测。 以检测的峰面积直接与相应浓度的伊马替尼、.去甲基伊马替尼和内标对照 品溶 液直接进样所得峰面积进行比较,计算绝对回收率。结果见表、表 表血浆伊马替尼的绝对回收率刀《,蠼 . , 温州医学院硕士学位论文 表血浆的绝对回收率刀,: 。 刀,: .样品稳定性 .处理后的血浆样品的稳定性 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作液 使伊马替尼和.去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,. ?‘和., .,.鹇?~,按上述血浆样品处理方法处理后,在进样瓶中放置,,小 时,检测伊马替尼和的浓度,考察伊马替尼和的稳定性。 结果见表、表 表伊马替尼血浆样品处理后稳定性试验结果 . 表 血浆样品处理后稳定性试验结果 . .冻融条件下血浆样品的稳定性 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作液 使伊马替尼和一去甲基伊马替尼的浓度分别为.,., .鹇?。和., .,. .?~,每个浓度各取,放置.后解冻,取出.伊温州医学院硕士学位论文 马替尼和血浆样品检测。剩余的血浆样品再放入.的冰箱里, 后再解冻,再各取.血浆样品进行检测。重复次,考察其稳定性。结果 显示冻融条件对伊马替尼和血浆样品的检测结果没有明显的影响结 果见表、表。 表 伊马替尼冻融样品的稳定性试验结果 . 表 冻融样品的稳定性试验结果 . .室温放置和冰冻保存血浆样品的稳定性 取大鼠空白血浆,分别加入一定量的伊马替尼和.去甲基伊马替尼的工作 液使伊马替尼和.去甲基伊马替尼的浓度分别为.,.,. ?和 .,.,. ,平均分成份,其中份再室温下放置 ?一,每个浓度 、、小时后按血浆样品处理方法处理后检测。另外份分别在.?冰箱冰 冻保存周和周后,再进行样品处理后检测。结果显示:伊马替尼和 血浆样品在室温放置和冰冻保存下,均比较稳定结果见表、表 表室温放置和冰冻保存的伊马替尼血浆样品的稳定性结果 . 温州医学院硕士学位论文 表室温放置和冰冻保存的血浆样品的稳定性结果 . 第三节讨论 本试验建立了以非那西丁为内标,血浆经乙酸乙酯萃取,高效液相色谱法检 测血浆中伊马替尼及其代谢产物的方法,具有测定方法简便快速、准 确可靠、试剂价廉等优点,便于临床日常应用。 .流动相的选择 通过调整流动相构成成分,包括水、乙腈、甲醇、三氟乙酸与磷酸二氢钾, 及体积比,寻找合适的流动相。最后发现流动相使用三氟乙酸溶液和乙腈时, 能 够获得理想的色谱峰;而流动相使用其他成分时,峰形很差,出现双峰、拖尾 峰, 甚至保留时间也不稳定。最终确定流动相为水..%氟乙酸.乙腈:.:.。 .检测波长的选择 本试验事先全波长扫描,然后结合最大吸收峰面积及图,综合伊马替尼, 和内保非那西丁的最大吸收波长。结果显示,三种药物在波长为 时最为合适,均有较大的吸收 .内标的选择 考察了莫西沙星、氨茶碱、、氟康唑和非那西丁种物质为内标。结 果显示,氨茶碱比较靠前与血样中杂质的保留时间相近,都在 左右;莫西 沙星保留时间太靠后,大于,不利于药物的快速检测;而氟康唑在伊马替 尼和之间容易造成干扰;出现拖尾峰;而非那西丁在本试验色 谱条件下与伊马替尼和分离完全,峰形良好,与血浆中其他内源性物 温州医学院硕士学位论文 质互不干扰,是较为合适的内标物。 .样品处理方法的选择 本试验曾尝试用高氯酸和乙腈沉淀法,因为此方法方便快捷,但是后来发现 高氯酸沉淀不能达到检测限要求而乙腈沉淀使伊马替尼的峰型发生 改变。后采用液液萃取法,尝试分别在酸碱环境下用正己烷、二氯甲烷和乙 酸乙 酯萃取,最后乙酸乙酯在碱性条件下萃取后复溶的方法,伊马替尼和 都达到了检测限的要求,满足测定的要求。 .评价 本试验采用的高效液相色谱法同时检测大鼠血浆中伊马替尼及其代谢产物 浓度,专属性强,没有杂质峰干扰,结果准确,灵敏度高。血浆中伊 马替尼和最低检测浓度分别为.?和. ?~,伊马替尼在 . ?’和在. ?’线性范围内线性良好,伊马替尼的 相关系数.而的相关系数.。伊马替尼和 的日内和日问精密度均小于%,相对回收率均在~%范围内,绝对回收 率大于%,符合生物等效性研究的要求,因此该方法适用于伊马替尼和代谢产 物的化学分析和临床药物代谢动力学的研究。 温州医学院硕士学位论文 参考文献 , 】 。/ . ,: . , 】 ,. , : , , 】 .., : , . 】 , , :. , :. 【】 , , / . ?,: , , 】 , . : ?. ,: , .】 , ,.? , ,:? , . 】 ,。 。: ,:? .【】 只 , .,: 【】& , . . ,:】 ,’ , , . .,, . , 温州医学院硕士学位论文 ,: ,, , . .,:? 【 】 , , .. ,:温州医学院硕士学位论文 第二部分唑类抗真菌药物对伊马替尼及其代谢产物 在大鼠体内的药代动力学影响的研究 本部分拟利用第一部分建立的高效液相色谱法检测血浆中伊马替尼及其代 谢产物浓度的方法,并做酮康唑、伊曲康唑和伏立康唑对伊马替尼及其代谢 产物 在大鼠体内的药代动力学影响的研究 第一节材料与方法 .实验对象 大鼠,雄性,体重 ,温州医学院实验动物中心提供,许可证编 号:浙?。 .仪器与药品 .主要仪器设备 系列 高效液相色谱分析仪 四元泵 在线脱气机 柱温箱 自动进样器 二极管阵列检测器 化学工作站 ... 涡旋混合器.,姜堰市新康医疗器械有限公司 氮吹仪型,杭州蓝焰科技有限公司 电子分析天平?,梅特勒托利多上海仪器公司,灵敏度. 超纯水系统 法国公司 .主要药品 甲磺酸伊马替尼标准品: ,批号:,纯度% 甲磺酸伊马替尼原料药:加拿大,批号: ,纯度.% 去甲基伊马替尼标准品:上海凯试科技有限公司,批号:.纯度 % 非那西丁标准品:美国公司,批号:,纯度% 酮康唑:大连美仑生物技术有限公司,批号:,纯度%温州医学院硕士学位论文 伊曲康唑:大连美仑生物技术有限公司,批号:,纯度% 伏立康唑:武汉圣天宇有限公司,批号:,纯度% .药物代谢动力学研究 大鼠只,,按体重均衡原则分成大组组、组、?组、?组, 各只。各组试验组在给药前禁食,自由饮水。组给予.%、组 给予酮康唑 ?、组给予伏立康唑 ?、组给予伊曲康唑 ?。 ?~,半小时后每只动物灌胃给予甲磺酸伊马替尼 于尾静脉取血. 在给伊马替尼后.、、、、、、、、、 于. 肝素化管中。 ?离心 ,分离的血浆.?冰箱中保 存待测。 .数据分析方法 .药物代谢动力学参数的表达和计算 本实验采用非房室模型统计矩参数的方法,血药浓度数据经.软件拟 合计算。单次给药的主要药动学参数有:附.、删、小、 .、瑚。其中,缸为实测值。用实验中测定的大鼠血浆的伊马 替尼、浓度和时间,绘制浓度.时间曲线。同时对各时间点药物浓度均 值和标准差列表,并绘制平均血药浓度.时间曲线。 .统计分析 采用.软件对峰浓度一、药物.时间曲线下面积小 啪、半衰期佗、清除率、平均滞留时间、删 等主要参数进行统计分析。其中这些数据以统计描述为主,统计推断仅供参 考。 以.为检验水平。 计量资料实就验数据均以均数士标准差:表示; 方差齐性检验采用检验; 多样本均数比较采用单因素方差分析. ;两两比较方差齐者 检验。 采用? 检验,方差不齐者采用’ 温州医学院硕士学位论文 第二节结果 .合用酮康唑、伏立康唑和伊曲康唑对伊马替尼及其代谢产物的药 物代谢动力学影响 只大鼠灌胃.%、酮康唑溶液、伏立康唑溶液和伊曲康唑溶液后, 用?检测不同时间大鼠体内伊马替尼及其代谢产物的血清 浓度.时间数据见表,表。平均血药浓度.时间曲线见图、图。 表合用药物后大鼠血浆伊马替尼浓度,露吒 . , 与空白对照组相比‘氏.,与酮康唑组相比?. 表合用药物后大鼠血浆浓度:,月 . ,温州医学院硕士学位论文 与空白对照组相比氏.,与酮康唑组相比?. ,、 一 鲁 面 五 暑 矗 昌 三 葛 ? ? 蛊 图各组伊马替尼平均血药浓度.时间曲线比较刀 ? . 一、. ?一 暑. ;. 量. 矗 .量. 童. 磊. . 厶 %. 口。召暑苗葺 图各组平均血药浓度.时间曲线比较以 温州医学院硕士学位论文 .各组药物代谢动力学参数 所得伊马替尼和药动学数据经.统计软件进行处理,均 采用非房室模型统计矩计算药代动力学参数,见表,表。 伊马替尼药动学参数结果显示:?与空白对照组相比,酮康唑组的伊马替 尼跗/、、删、.、盯删的药动学参数存在显著 性差异.,其中增加.%,/减少.%,.增加.%、 。增加.%、延长.%、删延长.%,而其他主要药动 学参数,:、觚和/无统计学意义.,这也说明酮康唑能够明显影 响伊马替尼的体内代谢情况;伏立康唑组的瓢.增大了.%,而其他 药动学参数虽有改变但无统计学意义;伊曲康唑组的药动学参数与空白相比 不存 在显著性差异眇.,说明伊曲康唑对伊马替尼代谢的影响很小。?与酮康唑 组相比,伏立康唑组的药动学参数/、.、瑚、.、。 存在显著性差异.:/增加 .%、减少.%、瑚减少 .%、缩短.%、栅缩短.%;伊曲康唑组的药动学参数戤、 /、.、吣、.、啪存在显著性差异职.: 降低.%,/增大.%、减少.%、删减少.%、. 缩短.%、栅缩短.%。 药动学参数结果显示:?与空白对照组相比,酮康唑组的去甲 伊马替尼的主要药动学参数舣、/:、甜.、舶存在显著性差 异.:舣降低.%、/延长.%、舣延长倍、.延长.%、 稍延长.%;伏立康唑组的.去甲基伊马替尼的主要药动学参数除戥 和外均存在显著性差异俨.,舣降低.%,:延长.%,/ 增大了.倍,/增大了.倍,减少了.%,删减少了.%; 伊曲康唑组的.去甲基伊马替尼药动学参数相比空白对照组不存在显著性差 异 ?.。?与酮康唑组相比,伏立康唑组的.去甲伊马替尼的主要药动学参数 戤、/、、删、、啪存在显著性差异妒。: 缸缩短.%、/增加.%、减少.%、啪减少.%、 .缩短.%、捌缩短.%;伊曲康唑组相比酮康唑组的.去甲伊 马替尼的主要药动学参数/、、、啪存在显著性差异 .:/延长.%、缩短.%、缩短.%、哪 缩短%。通过比较我们发现伏立康唑对伊马替尼的影响比其代谢产物的影响 要大,伊曲康唑无论是对伊马替尼还是对其活性代谢产物都没有差异性的影 响。温州医学院硕士学位论文 表合用药物后大鼠血浆伊马替尼的药动学参数似 . 主要参数 对照组 酮康唑组 伏立康唑组 伊曲康唑组 与空白对照组相比’.,与酮康唑组相比?. 表合用药物后大鼠血浆的药动学参数甩 .伽 主要参数 对照组 酮康唑组 伏立康唑组 伊曲康唑组 与空白对照组相比拳.,与酮康唑组相比事半.温州医学院硕士学位论文 第三节讨论 本课题探究了在大鼠体内三种唑类抗真菌药物酮康唑、伊曲康唑和伏立康唑 对伊马替尼药代动力学参数的影响。 伊马替尼口服吸收良好,绝对生物利用度%,治疗浓度中的%与白蛋 白和.酸性糖蛋白结合【】,并且有较广泛的组织分布【,这意味着相对较小 的 蛋白结合比例变化将引起较大的药理学变化或者不良反应的发生。伊马替尼 主要 由和代谢为具有活性的代谢产物.去甲基伊马替尼 ,而,,和同工酶较少参与代谢【,钔。 还有研究显示,伊马替尼既是的底物又是抑制剂,其与另一种通过 代谢的药物合用,是降低了后者的清除率【】。伊马替尼和主要代谢产物 都经过肝肠循环由胆汁排出进入肠道,其大部分由肾脏排泄,只有%左右以原 形从尿中排出体外【】。的消除半衰期比母药的半衰期 要长【】。 本研究发现酮康唑和伊马替尼合用,大鼠体内伊马替尼的平均增加 .%、/降低了./,延长.%、.延长.%, 和.?增加了.%;而其代谢产物的降低.%、/ 延长.%、延长倍、.延长.%、.延长.%,这 些变化与等【和等研究相仿。酮康唑使伊马替尼的增加了 .%表明伊马替尼从【.酸蛋白中转移和血浆中更高的游离部分使其生物分布 更广和保留时间更长。伊马替尼和代谢产物的这种差异主要是其通过通过酮 康唑 抑制代谢酶引起的,首先半衰期/没有发生改变,且伊马替尼的绝 对生物利用度是%,其可以完全吸收,这表明其没有发生首过效应,因此抑制 首过代谢不会影响伊马替尼的吸收。而伊马替尼和分别增加.% 和.%,那就有可能是通过抑制伊马替尼的消除或者代谢,同时清除率/ 降低了.%,表观分布容积降低了.%,这再次印证了酮康唑抑制了伊马替 尼的代谢,增加了伊马替尼的生物利用度。 合用酮康唑时伊马替尼出现双峰和得到较大的.,双峰的出现可能 是不同结构的药物或者从组织中再分配或者肝肠循环,肠道吸收,胃排空变 化【,药物相互作用【】。文献【】也显示出酮康唑和伊马替尼合用出现双峰, 本研 究中现象并不是很明显,出现这种现象可能是因为肝肠循环导致的【,】。 伏立康唑主要通过代谢,其次为和同时也是这 些酶的抑制剂【】。体外实验显示对于酶的抑制强弱酮康唑伊曲康唑伏 立康唑,而本实验中伊曲康唑组相对空白组参数变化均无统计学意义而且变 化温州医学院硕士学位论文 小,而伏立康唑组虽然只有差异有统计学意义,但其他参数的变化趋势与 酮康唑组变化趋势基本相符,可见伏立康唑对也起到了一定的抑制作 用。伏立康唑使伊马替尼的增加.%,比酮康唑的.%的幅度要大。 可见伏立康唑还有其他因素影响伊马替尼的,而.酸性糖蛋白、.和 改变/活性的药物是影响伊马替尼药代动力学主要因素【一,而已知 对于的抑制酮康唑要强一些,而【.酸性糖蛋白是结合蛋白其大小直接 影响药物在血浆中游离的比例,而血浆中的总浓度不受影响,从而影响药物 的疗 效,因此.可能是主要原因。酮康唑既是和.的底物又是这两者 的抑制剂,而伏立康唑报道其可能为弱.抑制剂和底物【,.虽然不直接 参与对药物的代谢,但和.通常具有相同的底物和调控剂,相似的组 织分布和底物【 ,同时这两者可能具有协同作用,成为口服给药吸收的障碍,多 项试验研究显示无论同时抑制两者还是抑制单一因素都会都会提高药物浓 度或者和生物利用度。等研究发现【】肾移植患者的首过代谢是由肠内. 和肝脏引起的,其表观口服清除率差异%是由肠内.引起的,% 是由肝脏引起的;而对血药浓度差异分别占%和%。因此酮康唑 和伏立康唑这种差异可能是由两者对和.影响大小不同和对 抑制强弱引起的;同理,伊曲康唑也既是和.的底物又是 这两者的抑制剂,伊曲康唑无论抑制还是.都较酮康唑弱,综合 而得到这样的结果。 本研究结果说明伊马替尼与酮康唑、伏立康唑、伊曲康唑合用后,酮康唑明 显改变了伊马替尼的的药动学特征,伏立康唑影响次之,伊曲康唑影响最小,此 结果具有一定潜在的临床意义。本研究是动物实验的初步结果,而且单次给药所 引起伊马替尼浓度增加是有限的,如果各抗真菌药物多次给药或者达稳态使其浓 度要高于本实验,所产生的药物相互作用影响会更大。在临床上,有部分患者由 于各种耐药使血浆中伊马替尼浓度过低而导致治疗失败,但可以提高伊马替尼的 给药剂量可以扭转这种耐药,所以每天伊马替尼剂量加倍或者更高都是有可能 的。故临床上如使用酮康唑或者伏立康唑或者其他强抑制剂药物时要注 意给药剂量的调整,以减少药物相互作用引起的不良反应。温州医学院硕士学位论文 结论 本研究建立了同时测定大鼠血浆中伊马替尼及其代谢产物 的方法,该方法操作简单、准确、灵敏、稳定,符合对生物样品分析的有关要求, 为临床检测伊马替尼血药浓度和相互作用提供了可靠的保障。本结果说明酮康唑 和伊马替尼合用后明显改变了伊马替尼的药动学特征,、曲、戕 和/等药动学参数都发生了改变;而伏立康唑只显著改变了伊马替尼的 戕;伊曲康唑没有改变伊马替尼的药动学特征。为临床上安全有效的使用伊马 替尼提供了有效的依据。温州医学院硕士学位论文 参考文献 . 【】 , ,?. ,:? 【】 , , , .: ,,,,,. ?,: . . 【 ,只 ,: .. 】 , , , :?., :. 【】’ , , , , ,. ,: . 】 一只 , . , : 。【】 , ,.,: . 【】 , , . ,: . 【】 , . ,: .】, : . , : .【 】, , . ,:. . 【】.? ,: . 【】 , ,温州医学院硕士学位论文. : ,:? .】 , ,.,: 【】钟健生,孟凡义,徐丹,等.慢性粒细胞白血病患者血清.酸性糖蛋白,伊马 替尼浓 度与疗效关系.中华医学杂志 :. 】 , .. ,: 【】缪海均,刘皋林.糖蛋白与药代动力学.中国药房,: 【 , .】& .,:? 】 , , , . . ,:? , , .: 【】 . ,:? .【】 , , .,: 【】 , . , ,.. , : 温州医学院硕士学位论文 附录 发表的文章: .林高通,王晨明,莫菊彩,等.伊立替康联合对胃癌细胞 凋亡的影响.海峡药学,:. .应娜,林高通.伊立替康联合氟尿嘧啶对大肠癌细胞株增值和凋亡的 影响.海峡药学,:. .董洁,陈晓乐,林高通,等.双氯芬酸对盐酸莫西沙星在大鼠体内的药动学影 响.中国药学杂志:. .王晨明,林高通,王哲,等.检测大鼠血浆中伊马替尼的浓度及其药动 学研究.中国药学杂志,: . ., , , . .已投稿 . ., , , , .已投稿 参与课题: .突变体对人体甲苯磺丁脲代谢影响的特异性分析 .突变体对人体奥美拉唑代谢影响的特异性分析 .酮康唑、伊曲康唑和伏立康唑对伊马替尼及其代谢产物在大鼠体内的药代动 力学影响 .伊立替康联合氟尿嘧啶对大肠癌细胞株增值和凋亡的影响温州医学院硕士学位论文 致 谢 本研究的选题、以及完成都是在导师葛仁山教授、胡国新教授和邱相君 教授的悉心指导下得以顺利完成。导师严谨的治学态度、渊博的知识、敏锐的科 学洞察力、平易近人的品德、一丝不苟的工作作风给我留下了深刻的印象,将令 我终生受益。我将永记导师的辛勤培养和谆谆教导,以及在生活上对我的无 私帮 助。毕业之际,我衷心感谢导师为我所做的一切,并一生铭记导师的教诲 诚挚感谢师姐李军伟、李婉淑、贺毅、温从丛、张立康等师兄师姐在实验中 对我的指导和帮助感谢王哲、陈晓乐、潘佩佩、徐涛、罗顺斌等同学及各位师 弟师妹,我实验顺利的完成离不开你们的团结协作和无私帮助 最后感谢我的家人和所以帮助过我的朋友们,感谢对我的全力支持和默默奉 献 感谢并祝福所有关心、支持和帮助我的朋友们温州医学院硕士学位论文 综述 伊马替尼的药代动力学及其与其他药物间的相互作用 摘要 伊马替尼是慢性粒细胞白血病和胃肠道间质瘤的一线药物,已被证实伊马替 尼与多种的药物产生相互作用,包括抗生素,免疫抑制药物,解热镇痛药,心血 管药物和抗真菌剂等。这些相互作用大部分涉及清除率和生物利用度的改变,而 这些改变都是通过代谢而引起伊马替尼药代动力学和分布的改变,从而 增加或减少伊马替尼体内浓度,致使治疗过程中因浓度过高产生毒副作用或者浓 度过低使治疗失败。因此本文就伊马替尼的药动学特征及其与其他药物相互作用 做一个综述,为临床安全用药提供参考。 关键词:伊马替尼; 药代动力学; 相互作用 伊马替尼是一种苯胺嘧啶衍生物图,属于蛋白酪氨酸激酶抑制剂。伊 马替尼在体内外均具有抑制酪氨酸激酶的活性,能选择性地抑抑制 和酪氨酸激酶。可以抑制阳性细胞系细胞费城染色体阳 性的慢性髓性白血病和急性淋巴细胞白血病患者的新鲜细胞的增值并 诱导其凋亡。此外,其还可以抑制血小板衍化生长因子受体、干细胞 因子,并能抑制和介导的生化反应,但不影响其他刺激因子 如表皮生长因子等的信号传导【】。伊马替尼是慢性粒细胞性白血病和胃肠 道间质 瘤的一线药物【,,最新研究显示还对隆突性皮肤纤维肉瘤、脊索瘤【】和黑 色素 瘤有抑制作用, 图伊马替尼结构图 . 药物代谢动力学温州医学院硕士学位论文 伊马替尼口服吸收良好,且不受食物影响,生物利用度高达%,血浆半衰 期约,服药约.达到稳态血药浓度【,】。慢性粒细胞患者服用伊马替尼 /达稳态时的血浆浓度约较单剂量给药时的.倍,其为 :/,为 土/,超过体外抑制酪氨酸激酶所需 的浓度【, 。伊马替尼具有较广的组织分布,在血浆中,约%的伊马替尼与血 浆蛋白结合,其结合的血浆蛋白主要为白蛋白和【.酸性糖蛋白。伊马替尼主 要 由肝脏细胞色素或酶代谢为去甲基哌嗪衍生物 ,其与伊马替尼具有相似药理活性,半衰期为,在血浆中.达 峰浓度,约为伊马替尼峰浓度的%【,】。伊马替尼主要以代谢产物的形式通 过粪便排出体外,天内%的口服剂量从体内被消除,其中粪和尿液中各占% 和%,在回收的粪中之中伊马替尼母药和各占%。 药物相互作用 伊马替尼的代谢主要由和代谢,一小部分由 ,,和同工酶代谢【,】,同时伊马替尼也是 和的抑制剂【】。.糖蛋白.又称多药耐药蛋白, 它在人体许多正常组织中如肝脏、肾脏、肠道、血脑屏障等都有表达,是一 种转 运蛋白,并对多种药物的体内吸收、分布、排泄等方面存在一定的影响【’, 伊 马替尼也是?的底物和抑制剂,其可能影响伊马替尼的。因此当其和 和或者抑制剂合用时,使伊马替尼的代谢被抑制和血药浓度增加; 与和或者诱导剂合用时,则会加速伊马替尼的代谢和降 低伊马替尼的血药浓度,因此在合用这些潜在影响和或者. 活性时应密切关注。 .药物对伊马替尼药代动力学的影响 ..利福平 福平是~种肝药酶诱导剂,其与伊马替尼合用使健康志愿者体内的和 分别降低%和%,而清除率增加了%,可能致使伊马替尼血药浓度 低于治疗水平,导致治疗失败【‘?。 ..中草药 ’’ 是一种抗抑郁药,是、、的诱导剂。在健康 ’ 人体试验中,长期应用 后给予伊马替尼, ’ 使伊马替 尼的清除率增加%,降低%,半衰期和峰浓度明显减少【,。 葡萄柚汁 葡萄柚汁可以通过降低活性而提高一些临床常用药物的浓度如硝