C-Kit和PDGFRα在卵巢上皮性癌肿瘤细胞及肿瘤间质中的表达差异

C-Kit和PDGFRα在卵巢上皮性癌肿瘤细胞及肿瘤间质中的达差异 C-Kit和PDGFRα在卵巢上皮性癌肿瘤细胞 及肿瘤间质中的表达差异 ? 2628? C—Kit和PDGFRoL在卵巢上皮性癌肿瘤细胞及 肿瘤间质中的表达差异 易村犍,李莉,陈克明,凌晟荣,马丁 ? 短篇论着? 【摘要】目的研究c—Kit与PDGFRa在卵巢上皮性癌患者的癌细胞及间质细胞中的表达差异.方法采用 免疫组化sP法C—Kit,PDGFRa在91例卵巢上皮性肿瘤组织及20例正常卵巢组织中的表达,并分析他们在卵巢 上皮性癌的癌细胞及间质细胞中的表达差异.结果(1)C—Kit在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织中表达阳性率 分别为10.0%,20.O%,在恶性卵巢肿瘤组织中的表达阳性率为50.7%,明显高于在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组 织中的表达阳性率,差异均有统计学意义(P<0.01).PDGFRa在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织中表达阳性率分 别为15.O%,25.O%,在恶性卵巢肿瘤组织中表达阳性率为63.4%,明 显高于在正常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织中 的表达阳性率,差异均有显着统计学意义(P<0.01).(2)C—Kit在卵巢上皮性癌的癌细胞中的表达阳性率为 50.7%,在间质细胞中表达的阳性率为4.2%,C—Kit在肿瘤间质细胞中的表达明显低于在癌细胞中的表达,差异有 统计学意义(P<0.01),而PDGFRa在卵巢上皮性癌的癌细胞中的表达阳性率为63.4%,在间质细胞中表达的阳性率 为87.3%,PDGFRa在卵巢上皮性癌间质细胞中的表达明显高于在癌细胞中的表达,差异有统计学意义(P<0.01). 结论(1)卵巢上皮性癌中C—Kit与PDGFRa蛋白表达的阳性率明显高于正常卵巢组织及卵巢良性上皮性肿瘤,提 示C—Kit与PDGFRa蛋白参与了卵巢上皮性癌的发生.(2)C—Kit在卵巢上皮性癌间质细胞中的表达明显低于在癌细 胞中的表达,而PDGFRa在卵巢上皮性癌间质细胞中的表达明显高于在癌细胞中的表达,C—Kit在卵巢癌问质细胞中 的低表达可能是格列卫治疗卵巢癌效果不佳的原因之一,提示格列卫可能是通过抑制间质肿瘤或肿瘤间质中的C—Kit 激酶的活性而发挥作用的. 【关键词】C—Kit;PDGFRa;卵巢癌 【中图分类号】R737.31【文献标识码】A【文章编号】1007—9572(2010)08—2628—03 近年来的研究发现细胞内外信号转导 与肿瘤的发生密切相关,尤其是在调节细 胞生长和分化中起重要作用的蛋自质酪氨 酸激酶调控的信号通路和肿瘤的发生直接 相关.C—Kit和血小板衍生生长因子受 体(PDGFRa)同属III型酪氨酸蛋门 激酶受体家族,其蛋白结构和基闵定他均 相似.目前研究发现C—Kit及PDGFRa 与多种恶性肿瘤的发生,增殖,浸润和转 移有关,在卵巢上皮性癌中呈高表达…. 近来针对酪氨酸激酶研制的分子靶向药物 —— 格列卫引起了国内外学者的J一泛关 注.格列卫是针对酪氨酸激酶的具有特异 的抑制信号转导能力的抑制剂,它通过与 ATP竞争性结合酪氨酸激酶催化部位的核 苷酸结合位点,使得激酶不能发挥催化活 作者单位:434000湖北省荆州市,长江大 学附属第一医院妇产科(易村犍,李莉,陈克 明,凌晟荣);华中科技大学附属同济医院妇 产科(马丁) 性,底物的酪氨酸残基不能被磷酸化,使 其不能与下游的效应分子进一步作用,从 而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡.文 献报道格列卫已成为公认的胃肠道间质瘤 的一线治疗药物.与胃肠道问质瘤相比, Posadas等对23例卵巢上皮性癌患者给 格列Il!治疗,结果只有2例患者疾病的 稳定期维持6个月以上,故在卵巢上皮性 癌中应用格列效果件.目前对于均高 表达C—Kit的胃肠道问质瘤和卵巢上皮 性癌,格列卫治疗效果差别如此之大的原 因尚不清楚.本研究观察C—Kit与 PDGFRa在卵巢上皮性癌的癌细胞及问质 细胞中的表达差异,探讨格列卫可能的治 疗. 1材料与方法 1.1材料来源以1997年1月一2o06 年1月入住长江大学第一附属医院(荆 州市第一人民医院)妇产科,手术治疗 并经病理诊断证实为卵巢上皮性肿瘤的患 者共91例及正常卵巢组织2O例为研究对 象.标本以10%甲醛溶液固定,常规石 蜡包埋存档.患者年龄25—68岁,平均 46岁.将研究对象分为3组:(1)正常 卵巢组织20例:因子宫肌瘤等子宫良性 病变行手术,术中取正常卵巢组织;(2) 良性卵巢上皮性肿瘤20例:浆液性囊腺 瘤10例,黏液性囊腺瘤1O例;(3)恶 性卵巢上皮性肿瘤71例:浆液性囊腺癌 59例,黏液性囊腺癌12例. 1.2试剂来源鼠抗人单克隆抗体C— Kit,PDGFRa及免疫组化S—P试剂盒购 自福州迈新生物技术开发公司. 1.3免疫组织化学技术采用免疫组化 sP法检测卵巢癌标本中C—Kit,PDGFRa 的表达.免疫组化方法按照试剂盒说明 进行操作,DAB显色剂显色,苏木精复 染,中性树胶封片,显微镜下观察结果. 以PBS代替一抗作为阴性对照,阳性对 照片由福州迈新生物技术开发公司提供. 1.4结果判定以细胞膜或细胞质出现 棕黄色颗粒为阳性染色.参考许良中 等的方法,根据阳性染色程度及染色 细胞百分率进行分析评分:基本不着色者 为0分,着色淡者为1分,着色适中者为 2分,着色深者为3分;着色细胞占计数 细胞百分率<5%为0分,5%,25%为1 分,26%一50%为2分,>50%为3分. 将每张切片着色程度得分与着色细胞百分 率得分各自相乘,为其最后得分.0,1 分为阴性(一),2,3分为弱阳性 (+),4,6分为中等阳性(++),6分 以上为强阳性(+++). 1.5统计学方法采用)(2检验分析C— Kit,PDGFRc~在卵巢上皮性癌肿瘤细胞 及间质细胞中的表达差异,P<0.05为差 异有统计学意义. 2结果 2.1C—Kit在正常卵巢组织及良恶性卵 巢上皮性肿瘤组织中的表达C—Kit蛋 白阳性染色表现为细胞膜及细胞质呈棕黄 色颗粒.C—Kit蛋白在正常卵巢组织中 表达阳性率为10.0%(2/20),在良性卵 巢肿瘤组织中表达阳性率为20.0%(4/ 20),在恶性卵巢肿瘤组织中表达阳性率 为50.7%(36/71),三者比较差异有统 计学意义(X2=14.292,P<0.01);其 中正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织比 较,C—Kit蛋白表达阳性率间差异无统 计学意义(x:0.784,P>0.05),而正 常卵巢组织,良性卵巢肿瘤组织中C— Kit蛋白表达阳性率与恶性卵巢肿瘤组织 相比,差异均有统计学意义()(值分别 为10.630和5.972,P<0.01和P< 0.05,见表1). 2.2PDGFRa在正常卵巢组织及良恶性 卵巢上皮性肿瘤组织中的表达PDGFRc~ 阳性表达定位于细胞质,呈棕黄色.在正 常卵巢组织及良性卵巢肿瘤组织中表达阳 性率分别为15.O%(3/20)和25.0% (5/20),在恶性卵巢肿瘤组织中表达阳 性率为63.4%(45/71),三者比较差异 有统计学意义(X2=19.699,P<0.01); 其中正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织比 较,PDGFRa蛋白表达阳性率间差异无统 计学意义()(2=0.625,P>0.05),而正 常卵巢组织,良性卵巢肿瘤组织中 PDGFRct蛋白表达阳性率与恶性卵巢肿瘤 组织相比,差异均有统计学意义(x值 分别为14.654和9.285,P<0.01,见表 2). 2.3C—Kit和PDGFRct在卵巢上皮性癌 的癌细胞及间质细胞中的表达C—Kit 在卵巢上皮性癌的癌细胞中表达阳性率为 50.7%(36/71),在间质细胞中表达阳 性率为4.2%(3/71),C—Kit在肿瘤间 质细胞中表达明显低于在癌细胞中的表 达,差异有统’学意义(x:38.496,P <0.01,见表3,图1);而PDGFRct在 卵巢上皮性癌的癌细胞中表达阳性率为 63.4%(45/71),在间质细胞中表达阳 性率为87.3%(62/71),PDGFRct在卵 巢上皮性癌的问质细胞中的表达明显高于 在癌细胞中的表达,差异有统计学意义 ()(=10.958,P<0.01,见表4,图2). 表lC—Kit在正常卵巢组织及良恶性卵巢上 皮性肿瘤组织中的表达(例) Table1ExpressionofC—Kitinnormalovarian tissues,benignovariantumortissues andepithelialovariancancertissues 表2PDGFRa在正常卵巢组织及良恶性卵巢 上皮性肿瘤组织中的表达(例) Table2ExpressionofPDGFR~innormalovari— antissues,benignovariantumortissues andepithelialovariancancertissues 表3C—Kit在卵巢上皮性癌细胞及间质细胞 中的表达(例) Table3ExpressionofC—Kitinovariancancer cellsandstromalceils 表4PI)GFRc~在卵巢上皮性癌细胞及间质细 胞中的表达(例) Table4ExpressionofPDGFRainovariancancer ceilsandstromalcells ? 2629? 图1C—Kit在浆液性囊腺癌(?级)细胞中 呈强阳性表达(+++),在肿瘤间质 细胞中呈阴性表达(一),sP法×40O Figure1ThestronglypositiveexpressionofC— Kitinserouscystadenocarcinomacells, andnegativeexpressionofC—Kitin stromalcells 图2PDGFRa在浆液性囊腺癌(?级)细胞 中呈阳性表达(++),在肿瘤间质细 胞中也呈阳性表达(++),sP法×200 Figure2ThepositiveexpressionofPDGFRain serouscystadenocarcinomacellsandin stromalcells 3讨论 3.1C—Kit和PDGFRot与卵巢上皮性癌 的发生C—Kit是白色斑点显性基因的 等位基因,属于原癌基因,其产物是?型 酪氨酸激酶受体,即C—Kit受体.正常 情况下C—Kit的活化需要配体SCF参与, C—Kit与其配体SCF结合后,诱导其胞 外区的构象发生变化,使受体在细胞膜上 迁移,积聚,形成二聚体,使得酪氨酸激 酶磷酸化.这些磷酸化的酪氨酸位点为胞 内底物提供识别,锚靠和结合的部位,使 这些底物进一步依次磷酸化,这些效应分 子的磷酸化促发细胞间信号的瀑布级联反 应,调控下游底物,最终活化胞质内的转 录因子,从而调节基因表达,控制细胞生 长,增殖和分化.研究表明C—Kit基因 的突变刺激肿瘤细胞的持续增殖和抗凋亡 謦磷.. ??謦t ? 263O? 皮性肿瘤组织C—Kit及PDGFR~的表达卵巢,这些梭形细胞最终构成卵巢间质.1易村犍,凌晟荣,陈克明?C—Kit和PDG? 阳性率零…C…-Kit皇有研究报道卵巢表面上皮细胞和间质细胞鬟 PDivea … nal tt~u i. w… ofi二i 生.morigenictissue)与间质有着密切的联 系,clinicalstudywithproteomicprofiling[J]. 嚣耄嚣蠢主薷磊:4嚣Cancer2007,甍11.0. 毒嚣细胞及肿瘤问质中的表达肿瘤的实质是关].多数卵巢肿瘤有间质样的成分,’’肿瘤细胞的总称,是肿瘤的主要成分,肿因此,问质细胞与上皮细胞的相互影响可5(4):229一 _23 要是由肿瘤的实质所决定的.肿瘤的间质起关键作用.actefizati.nofb.vine.vafiansurfaeeepihelium 一 篓由竺!,淋本研究发现c—Kit在卵巢上皮性癌ndistrom[Jj.al.;:, 0I5. 巴管,间质成分不具特异性,起着支持和的间质细胞中的表达明显低 于在癌细胞中一 1221 …’’’’ 营养肿瘤实质的作用,生长缓慢的肿瘤,的表达,而PDGFR在卵巢上 皮性癌的6KrukPA,Uitt.VJ,FirthJD,eta1.Recip. 其问质血管通常较少,而生长迅速的肿问质细胞中的表达明显高于 在癌细胞中的rocalinteractionsbetweenhumanovariansur- . 萎要麦苎:,.管表达.在卵巢癌间质细胞中c—Kit表 达:c—eei[thJe]li.EeeplscalnldR1e9n9t4e,xtr2a1e5el:l”9la7r少对肿瘤的 生长速度起决定性作用. 卵巢阳性率仅为4.2%,文献报道C—Kit在胃:llU1tnt|;……… 一’….’…’, 上皮性肿瘤来源于卵巢的表面上皮,由胚肠道问质瘤中表达阳性率 可达85%,7HornbyAE,PJ,A.p.rgN.Int.medi一 胎时期覆盖在生殖嵴表面的体腔上皮转化98%,C—Kit在卵巢癌间 质细胞中的低atefilamentsinratovariansurfaceepithelial :曩长妻曼可表达可能是格列卫治疗卵巢癌效果不佳的 ells:h…ang.ewithneoCe1plastic0Jpuliure,?向卵巢实质伸展,形成腺体和囊肿,在一原因之一,提示格列卫可能是通过抑制间一, ,”……’…: 定条件下,这些腺体和囊肿可形成肿瘤.质肿瘤或肿瘤间质中的C—Kit激酶的活8KunnRK.Bleustei,.pathol.gy.fth.fe一 本研究发现,C—Kit在卵巢上皮性癌的性而发挥作用的.但是PDGFRd在肿瘤ma1egenita1tract[M].3rded.NewYork: 间质细胞中的表达阳性率明显低于在癌细间质细胞中表达明显增高,但格列卫为什pring一V.警,,. :一’ 譬兰誊么不登制P.GFR激酶的活性来’薯曹…2010一-…05-2,,3ZUIUUI--1’3坚竺譬璺篓耋阳竺垩达到控制肿瘤的生长呢?可能的解释是卵编辑:王俊懿;高于在癌细胞中的表达阳性率,该结果提……”“……