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猪戊肝抗体(HEV)中文说明书300ng.doc

2018-01-07 4页 doc 24KB 17阅读

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猪戊肝抗体(HEV)中文说明书300ng.doc猪戊肝抗体(HEV)中文说明书300ng.doc 中文说明书 _____________________________________________________ 猪戊肝抗体(HEV)ELISA检测试剂盒 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验,ELISA,。往预先包被猪戊肝抗体(HEV)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪戊肝抗体(HEV...
猪戊肝抗体(HEV)中文说明书300ng.doc
猪戊肝抗体(HEV)中文300ng.doc 中文说明书 _____________________________________________________ 猪戊肝抗体(HEV)ELISA检测试剂盒 检测原理 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验,ELISA,。往预先包被猪戊肝抗体(HEV)捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猪戊肝抗体(HEV)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度,OD 值,,计算样品浓度。 样品收集、处理及保存方法 1. 血清,使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2. 血浆,EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3. 细胞上清液,3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4. 组织匀浆,将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5. 保存,如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20?,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 自备物品 1. 酶标仪,450nm, 2. 高精度加样器及枪头,0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37?恒温箱 操作注意事项 1. 试剂盒保存在2-8?,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现 象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封,低温干燥,保存。 3. 预处理后的样本无需稀释,直接取10μL加样即可。 4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5. 所有液体组分使用前充分摇匀。 试剂盒组成 名称 96孔配置 48孔配置 备注 微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条 无 0.5mL 0.5mL 标准品,300 ng/ml, 按说明书进行稀释 6mL 3mL 标准品稀释液 按说明书进行稀释 6mL 3mL 样本稀释液 按说明书进行稀释 6mL 3mL 检测抗体-HRP 无 20mL 20mL 20×洗涤缓冲液 按说明书进行稀释 6mL 3mL 底物A 无 6mL 3mL 底物B 无 6mL 3mL 终止液 无 封板膜 2张 2张 无 说明书 1份 1份 无 自封袋 1个 1个 无 注,标准品用标准品稀释液依次稀释为,300、150、75、37.5、18.7、0ng/ml. 试剂的准备 20×洗涤缓冲液的稀释,蒸馏水按1,20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 洗板方法 1. 手工洗板,甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此 洗板5次。 2. 自动洗板机,每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。 操作步骤 1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4?。 2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔,空白孔什么都不加,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL, 3. 待测样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL, 4. 随后标准品孔和样本孔中,空白孔不加,加入辣根过氧化物酶,HRP,标记的检测抗体50μL,,用封板膜封住反应孔,37?水浴锅或恒温箱温育60min。 5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次,也可用洗板机洗板,。 6. 所有孔加入底物A、B各50μL,37?避光孵育15min。 7. 所有孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。 结果判断 绘制标准曲线,在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。 试剂盒性能 1. 准确性,标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。 2. 灵敏度,最低检测浓度小于1.0 ng/ml。 3. 特异性,不与其它可溶性结构类似物交叉反应。 4. 重复性,板内、板间变异系数均小于15%。 5. 贮藏,2-8?,避光防潮保存。 6. 有效期,6个月 7. 检测范围,9.3ng/ml-300ng/ml 免责声明 1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或猪体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。 2. 严格按照说明书操作,不同批号不可交换使用,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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