【doc】 补体结合试验与ELISA捕获法测定巨细胞病毒抗体的比较

【doc】 补体结合试验与ELISA捕获法测定巨细胞病毒抗体的比较 补体结合试验与ELISA捕获法测定巨细胞 病毒抗体的比较 江西医学检验2005年6月第23卷第3期 ? 实验研究? 补体结合试验与ELISA捕获法测定巨细胞病毒抗体的比较 邵美娟-温怀凯-倪莉-林益: 中图分类号R446.61.R373文献标识码A文章编号1008-0023(2005)03-0233-02 【摘要】目的介绍一种简便,敏感,特异的实验室检测巨细胞病毒(CMV)抗体的方法.方法应用补体结 合试验(CFT)对临床常规136份血清标本进行CMV抗体检测,同时采用ELISA捕获法进行对照.结果补 体结合试验与ELISA捕获法同时检测出阳性为65例,同时阴性为68例,经卡方检验,两种方法无明显差异 (P=>0.05).结论补体结合试验结果可靠,可作为临床实验室检测CMV抗体的常规方法. [关键词】补体结合试验;ELISA法;巨细胞病毒 巨细胞病毒(Cytomegalovims,CMV)属人类疱疹病 毒科,在孕妇,原发或反复感染均可引起新生儿宫内 感染或围产期感染,导致胎儿畸形,智力低下或发育 迟缓等.对于免疫力低下的人,CMV进人人体后可 侵犯全身器官,组织细胞,引起不同程度的病变. CMV在人群中感染非常普遍,除少数有临床症状 外,通常呈隐性感染,因而必须结合实验室才能确 诊.我科于2003年2月引进了一种用于检测抗不同 病毒和细菌抗体的补体结合自动化系统(seramat), 该系统自动化程度高,操作简便,我们用ELISA捕 获法与之进行了比较,现如下. 1材料与方法 1.1标本来源136例标本来源于2004年4月到9 月我院产科产前检查以及小儿科疑似巨细胞病毒感 染的病人.所有标本离心后分作两份血清,置 一 2O?低温保存备用. 1.2检测方法补体结合试验(CFr)采用意大利 Diesse公司生产的seramat自动化仪器及其配套试 剂(包括冷冻抗原,随时可用的补体,溶血剂及稳定 的绵羊红细胞),血清标本放56~C水浴箱经过3O分 钟灭活后上机测定,结果通过溶血动力学测定,以滴 度?1:16为阳性.ELISA捕获法采用意大利Diesse 公司生产的试剂盒,严格按说明书进行操作,美国宝 特公司的Elx800酶标仪测定各孑LOD值,以测定孑L 的OD值大于CUT—OFF的OD值为阳性. 1.3统计学处理两法比较采用卡方检验. 2结果ELISA捕获法测得67例标本阳性,阳性率 为49.26%,补体结合法测得66例阳性,阳性率为 作者单位:l,325027浙江省温州医学院附属第---N院检验 科;2,浙江医学高等专科学校 作者简介:邵美娟,女,检验师,1976年6月出生,毕业于浙江 金华卫生学校,现从事临床免疫学检验. 48.53%.经卡方检验,P>0.05.见附表 附表136例标本补体结合试验与ELISA捕获法的比较 3讨论 目前检测CMV方法多种多样,细胞培养法是大 家公认的”金标法”【1],但细胞培养费时,操作复杂且 灵敏度不高,不能及时地为临床提供诊断依据,PCR 法快速,敏感,特异,但存在假阳性,且不能判断病毒 是处于静止还是活动状态翻.ELISA间接法敏感性 高,但包被抗原纯度不高时,易出现假阳性,且受类 风湿因子和特异性lgG干扰网.目前临床上主要通过 ELISA法捕获法来检测CMV—IgM抗体,这种方法测 定IgM抗体特异性好,敏感性较高州.因此,我们用 ELISA捕获法与补体结合试验作对比试验,我们选 用了同一厂家生产的试剂,有一定的可比性. 我们的实验结果显示,补体结合试验与ELISA 捕获法基本一致(P>0.05).其中ELISA捕获法阳性 的有2例标本补体结合试验阴性(滴度1:8),该两 位病人两周后重新抽血复查,补体结合试验滴度上 升(滴度1:32),ELISA捕获法也为阳性,说明补体 结合试验敏感性略低于ELISA捕获法.我们认为补 体结合试验滴度较低时需要结合临床,并做双份血 清测定,滴度上升提示处于活动期.补体结合试验阳 性的标本中有1例ELISA捕获法阴性,该病人的滴 度为1:16,我们对该病人两周后采的血进行重新测 定,补体结合试验滴度明显上升(1:64),ELISA捕 获法也为阳性,这可能是因为该病人第一次采血时 为二次感染的初期,血清CMV—IgG水(下转第280页) ? 280?angxiJ.MedLabSei.June2oo5.V0123.No3 ? 经验交流? SysmexUF一100尿沉渣仪检测尿WBC,RBC结果分析 陈菊调谢芳 中图分类号R446.121文献标识码B文章编号 1008-0023(2005)03-0280-01 SysmexUF一100尿沉渣仪采用流式细胞技术,荧光染色 技术和电阻抗原理,对尿液中的WBC,RBC,上皮细胞,细 菌,管型等成份进行定量化分析,结果化,敏感性好,样 本处理快,是目前较理想的尿液有形成份的筛选方法.我室 随机抽取500例尿样,用SysmexUF一100尿沉渣仪对WBC, RBC的检测结果与人工镜检进行比较,了解两种方法的符 合率. 1对象与方法 1.1对象随机抽取我院门诊病人350例,住院病人150 例,留尿后1小时内检测. 1.2仪器与方法SysmexUF一100尿沉渣仪.试剂组成:荧 光染液为原装试剂,鞘液为国产试剂.正常值WBC0— 20/1RBC0,20/1.人工镜检:严格按操作标准进行 操作.正常值WBC0,5/HPFRBC0,3/HPF.检测结果大于 正常值为阳性,在正常值内为阴性. 1-3统计学方法McNemar检验. 2结果 SysmexUF一100尿沉渣仪对500例尿样的WBC,RBC的 检测结果与人工镜检结果比较,结果见下表1,表2. 由于wBC有较大细胞核及较多胞浆颗粒,具有较强的散 射光强度与荧光强度,在散点图上处于较强的散射光强度与 荧光强度位置.表1在8例WBC不一致结果中,其中镜检5 例为较多的移形上皮细胞,2例为肾小管上皮细胞.根据临 床症状及粒细胞酯酶检测,7例排除炎症,1例为可疑阳性. RBC因没有细胞核及胞浆颗粒,在散点图上处于低荧光强 度及散射光强度位置.表2在10例不一致结果中,其中镜检 4例有少量结晶,1例有霉菌,1例见较多的草酸钙结晶,另4 例UF一100尿沉渣仪检测结果略高于正常值,为方法学误 差.经统计学处理,P<O.05两方法检测尿WBC,RBC阳性检 出率间的差异具有显着意义.UF一100尿沉渣仪检测WBC的 阳性符合率84.0%,RBC的阳性符合率83.6%. 3讨论 作者单位:315300浙江省慈溪市人民医院检验科 表1500例尿液白细胞检测结果的两法比较 x2=6.13P<0.05 表2500例尿液红细胞检测结果的两法比较 8.1P<0.05 人工镜检作为经典的尿液有形成份的分析,为金标准法. 但受多种因素的影响,难以标准化.SysmexUF一100尿沉渣 仪应用流式细胞技术与荧光染色相结合,对尿液中的有形成 份进行散射光强度及荧光强度测定后进行定量并提供有形 成份的散点图分析,较直观分析有形成份特征,尤其对红细 胞进行散点图分析,可了解RBC的均一性程度,区分肾型, 非肾型,混合型肾炎. 与人工镜检相比,SysmexUF一100尿沉渣仪往往出现假 阳性结果,假阴性率甚少,具有较好的符合率,适用于尿液有 形成份的筛选.由于方法学上的问题,UF一100尿沉渣仪对 WBC的检测受到肾小管上皮细胞和移形上皮细胞的干扰, RBC受某些结晶,霉菌,细菌的干扰.因此,尿沉渣仪检出的 阳性结果,须与干片法尿生化结果进行交叉检查,必要时进 行人工镜检.此外,当尿沉渣仪检测到较多的结晶,霉菌,细 菌或上皮细胞时,应进行人工镜检,以免造成WBC,RBC假 阳性结果. 参考文献 【11丛玉隆,马骏龙.当代尿液分析技术与临床[MI.北京,中国科学技 术出版社.1998.15,35. (上接第233页)平较高,而补体结合试验测的是总抗 体(包括IgG,IgM,I),因而第一次结果两法不一 致. 总之,seramat自动化系统解决了常规补体结合 法标准化问题,操作简便,特异性高,敏感性好,病人 标本可随到随做,补充了ELISA法需批量检测,试 剂启用后保存时间不长的缺陷,可以作为临床实验 室检测CMV的理想方法. 参考文献 【1】吴新刚.巨细胞病毒检测与鉴定研究进展叽.微生物学免疫学进展, 2003,2(31):66~70. 【21闻承珍,人巨细胞病毒先天性感染的研究现状【J】,实用医学杂志, 2004,2(20):109-110. 【3】况二胜,杨复华,何样旺,等.抗Torch—IgM抗体临床对比检测研究 叨.中国病毒学,2002,17(1):56--’60. 【4】张乐,林爱芬,陆绍红.巨细胞病毒IgM抗体捕捉酶标法的建立【J】. 浙江预防医学20OO.8(12):3-,.4.