陆俨少的画

重组人血管内皮抑素腹腔内给药治疗恶性腹腔积液的实验研究 重组人血管内皮抑素腹腔内给药治疗恶性腹腔积液的 实验研究 中 华 临 床 医 师 杂 志 ( 电 子 版 1 ) 1 0 2 年 7 月 第 5 卷 第 3 1 期 C hi n J C l i n i i c ns a ( E l n t o c e r i c E di t i n o ) , J u l y 1 1 0 2 1 , , V l o 5 , . N o . 3 13 7 7 3? 论著? 重 组 人 血 管 内 皮 抑 素 腹 腔 内 给 药 治 疗 恶 性 腹 腔 积 液 的 实 验 研 究 高文斌 李花妮 辉 黄剑 吕金燕 刚 王 马建增 真真 郑 邓蓉 雨 王若 方今女 【 摘要】 目的 初步探 讨血管 内皮抑 素 ( S E ) 腹 腔 内 给 药 治 疗 恶 性 腹 腔 积 液 的 治 疗 机 制。 方 法 健康 L B A B / C 小 鼠 , 应 用 S 0 8 1 细 胞 建 立 腹 腔 积 液 模 型。 S E 分 为 0 0 畅 5 g m / g k 0 5 畅 2 、 g m / g k 及 5 2 畅 1 g m / g k 三组; 阴 性对照组 为生理 盐水组 ; 阳 性对照 组为 0 0 畅 0 6 g m / g k 顺铂 组。 S 0 8 1 细 胞 腹 腔 注 射 接 种 5 d 后, 实验药 物隔日 腹腔注射。 记录 小鼠体 重作为 腹水计 量变化 指标。 计 数小鼠 存活只 数计算 存活 率 。 结果 S E 治 疗癌性 腹水的 实验结 果显示 实验各 组间小 鼠 体 重 具 有 统 计 学 差 异 , 高 剂 量 组 具 有 明 显 的优势, 并且 与顺铂 对照组 相 当 , 组 间 比 较 具 有 统 计 学 差 异 ( 5 0 ) 。 畅 0 < S E 对 恶 性 腹 水 小 鼠 存 活 率 的影响提 示 , 除 低 剂 量 组 与 中 剂 量 组 之 间 无 统 计 学 差 异 外, 其 余 各 组 间 均 有 统 计 学 差 异 ( < 5 0 ) ; 畅 0 不 同时间 存活率 各组间 比较均 有统计 学差异( 1 0 ) 。 畅 0 < 综 合 分 析 结 果 显 示: 在 各 实 验 组 中 , 低 剂量治疗 组小鼠 存活率 显著高 于其他 各治疗 组, 低 剂 量 组 小 鼠, 存 活 时 间 长。 结 论 重 组 人 S E 具 有 较好的抗 肿瘤性 腔内积 液效果, 并 可延长 腹水小 鼠的生 存时间 , 提 高生存率 。 【 关 键词】 注射, 腹腔 内; 肿瘤; 血管内 皮抑素 唱, 唱 ,唱 ,唱 , , 唱 , 唱 , , 唱 ,唱 .,, ,: 唱 , :@. .【】 A y r a n i n m o i i l e s r s p u c s i d f o n i t a t s o l a d n n i e m o d b a y t i v y a p c a r e h t o m e h c n i e h t t n e m t a e r t f t o n a n s g i u l o a r e m y s t i v n a o i c s u f f e . n, i t a t s o d n E n i t a l p s i d c n a e n i l a s f o t n e s r e e f g f ia d s o e r d e w d e t c e j n i o t n i e l a h t n i m y o t d i r b a a c f o e c i m h t i w s e t i c s a , n e h t t c u d n o c n a o s i r a p m o c . n i t a t s o d n f E o 0 0 畅 5 g m / g k 0 5 畅 2 , g m / g k d n a 5 2 畅 1 g m / g k s a w d e t c e j n i o t n i e e r h t s p u o r g , e n i l a s o t n i e v i t a g l e o n r t n o c p, u o r g e v i t i n i s t o a p l p s i c 0 0 畅 0 6 ( g m / g k ) o t n i e v i t i s l o o p r t n o c p u o r g , t p e k a d r o c e r f o e h t e c i m t h g i e w s a t a n e m r e r o t u a s c a i e d n m i r o f s e t i c s a , d n a d e k r o w t u o e h t e c i m l a v i v r u s e t a r y b g n i t n u o c e h t r e b m u n f o e c i m e v i l a . t n e m i r d e e p w x o E h s t a h t e r e h t e r t e s n w e a c c i n f i e r n e f g i f i s n d i e h t t h g i e g w n o m e a s e s h t u o i r s a p v u o r g f o e c i m . A e e v i g t a c t n n i t a s v i d d a ( 5 ) 0 畅 0 < n i e h t h g i h 唱 e g a s o d p u o r g s a w d e t s i x e , y l r a t e n n e l a v i u q e o t e h t n i t n a o l s p i s r i a c p p m u o o c r g . n i t a t s o d n Ed a h s t c e f f e n o e h t l a v i v r u s e t a r f o e h t e c i m h t i s w u o i c i s l e a t i m c s a . e r e h T e r e w o n s u l o i a s v c e i b t c o n s n i e t e r a e t e f s f w i t e d b e h t w o l 唱 e g a s o d p u o r g d n a m u i d e m 唱 e g a s o d p u o r g , t u b s e c n e r e f f i d o d d e t s i x e n i e h t r e h t o s p u o r g ( 5 ) , 0 畅 0 < d n a l a v i v r u s e t a r t a t n e r e f f s i e d m i t y s l a l a w c i t e s t i i t t a u t n q s e r e f f i d ( ) 1 . 0 畅 0 < A h g i l h a v i v r u s e t a r d n a g n o l e f i l n a p s e r e w n e e s n i e h t w o l 唱 e g a s o d p u o r g . t n a n i b m o n c a e m R u n h i t a t s o d n e n a c k r o w l l e w n o g n i l l o r t t n n a o c n g i l a m s u o r e s y t i v a c n o i s u f f e o t g n o l o r p e c i m e f i l n a p s d n a e s i a r l a v i v r u s e t a r . 【】 s n o i t c e j n I , l a e n o t i r e p a r t n i ; s m s a l p o e N ; n i t a t s o d n E 管内皮抑素( 血 n i t a t s o d n e , S E ) 内源性抗 为 血 管 生 成 因 子 , 特 异 性 地 作 用 于 血 管 内 皮 细 胞 尤 其 是 微 血 管 D O I : 3 8 7 7 / 1 0 . c m a . j 0 2 0 . 1 3 . s n i s 2 0 1 1 . 0 7 8 5 . 1 6 7 4 唱 . 基 金 项 目 : 2 0 1 0 年 度 “ C S C O 唱 金 港 榄 香 烯 肿 瘤 学 研 究 生 奖 学 助 学 基 金 ” 项 目 0 0 8 ) ( 2 0 1 0 唱 J 唱 作 者 单 位 : 1 1 6 0 0 1 辽 宁 省 , 大 连 大 学 附 属 中 山 医 院 肿 瘤 内 科 ( 高 文 斌 、 李 花 妮 、 黄 剑 辉 、 吕 金 燕 、 王 刚 、 马 建 增 、 郑 真 真 、 邓 蓉 、 王 若 雨 ) ; 延 边 大 学 医 学 部 病 理 及 病 理 生 理 学 教 研 室 ( 方 今 女 ) 通 讯 作 者 : 高 文 斌 , E m a i l : w e n b i n g a o @ y a h o o . c o m . c n? 3 7 7 4中 华 临 床 医 师 杂 志 ( 电 子 版 1 ) 1 0 2 年 7 月 第 5 卷 第 3 1 期 C hi n J C l i ni i c n a s ( E l t c e r ni o c E di t i n o ) , J ul y 1 1 0 2 1 , , V l o 5 , . N o . 3 1 细胞 的内皮 , 移 抑制其迁 、 诱 导 其 凋 亡 , 从 而 抑 制 血 管 生 成 和 肿 瘤 生 长 , 已 成 为 近 年 来 肿 瘤 治 疗 的 新 策 略 。 表达体系生产出 的 肠杆菌作为蛋白 重 采用大 组 人 S E ( h r 唱 n i t a t s o d n E , 商 品 名: r a t s o d n E , 恩 度, H Y 6 1 ) , 唱 实 验 研 2 ] [ 1 唱 对肺癌、 究表明 瘤及黑色素瘤 纤维肉等 多 种 肿 瘤 有 效 , 临 床 研 究 中 也 同 样 表 现 出 较 好 的 疗 效 和 安 全 性 。 临床实践中发现 们在 我 , 静脉使用重组人 S E 过程中, 对恶性 肿 瘤 患 者 转 移 性 胸 腹 腔 积 液 的 控 制 也 取 得 了 较 4 ] [ 3 唱 的效果 为满意 , 行了 受其启发我们进 H Y 6 1 唱 疗恶性腹腔积 腔内给药治液 的 基 础 研 究 以 探 讨 其 治 疗 机 制 , 下 报道如 。 法 材料与方 一 、 材料 畅 1 细胞株 动物及 : 健康 L B A B / C 小鼠 , 雌 雄 各 半 , 购 自 大 连 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心 。 S 0 8 1 细 胞 株 由 中 惠赠 研究所杨凌教授 院大连化学物理 国科学 , 存 本实验室保 。 畅 2 物 实验药 : S E 明液体 为无色透 , 津生物工 烟台麦得程 有 限 公 司 提 供 , 于 4 - ? 保 存 , 使 用 时 加 入 生 理 盐水( S N ) 稀释至所需浓度 ; 注射用顺铂( P D D ) , 齐鲁药厂出品 山 东 。 二 、 方法 7 畅 1 立及分组 腹水小鼠模型的建 : 数生长期的 取对 S 0 8 1 细胞, 成约 制 0 1 1 × / l m 细胞悬液 , 每只小鼠腹腔 种 注射接 1 畅 0 l m , 分 实验动物随机 5 组, 每 组 0 1 只 小 鼠 。 实 验 药 物 分 组 依 照 H Y 6 1 唱 的 使 用 剂 量 进 行 , 分 为 [ 5 ] 0 0 畅 5 g m / g k 0 5 畅 2 、 g m / g k 及 5 2 畅 1 g m / g k 三组; 为 S N 0 6 对照组; g m / g k P D D 照组 为阳性对 。 畅 2 实验方法: S 0 8 1 腹腔注射接种 细胞 5 d 后 , 实验鼠腹水产生 , 分别 依照实验设计进 行 不 同 剂 量 实 验 药 物 H Y 6 1 [ 唱 分为 0 0 畅 5 g m / g k ( 高 剂 量 组 0 5 ) 畅 、 2 g m / g k ( 中 剂 量 组 ) 及 5 2 畅 1 g m / g k ( 低 剂 量 组 ) ] , 隔 日 腹 腔 注 射; 积的 性对照组给予同体 阴 S N 日腹腔注射 隔 ; 对照组给予 阳性 0 0 畅 0 6 g m / g k P D D 第 一 天 腹 腔 注 射。 每 次 为腹水计 记录小鼠体重作量 给药前变 化 指 标 。 记 数 小 鼠 存 活 只 数 计 算 存 活 率、 生 存 率。 实 验 所 用 的 饲 料、 垫料、 后使用, 笼具均高压灭菌 器械 采用一次性无菌 注射器械 。 畅 3 统计学 : 据 采 实验各组数 用 S S P S 0 畅 3 1 软 件 包 进 行 分 析 , 以 5 0 畅 0 < 为 差 异 有 统 计 学 意 义 。 采 用 n a l p a K 唱 r e i e M 期曲线。 法绘制生存 结 果 畅 1 S E 性腹水的实验结果 治疗癌 ( 表 1 ) : 自第 5 天起, 异 重具有统计学差 验各组间小鼠体 实 , 其中以高剂 有明显的优势, 量组具 但其与 P D D 相当。 对照组 表 S E 对 癌性腹 水量的 影响比 较 小 鼠 体 重 ( g , ? ? ) 实 验 剂 量 组 别 ( m g / k g ) D 1 D 3 D 5 D 7 D 9 D 1 1 D 1 3 ? 揶觋 a a a 实 验 组 5 0 0 畅 2 2 6 1 2 ? 畅 3 3 畅 2 5 8 7 3 ? 畅 1 1 畅 唱 唱 屯Ζ滗 屯Ζ?滗种 2 6 8 9 2 ? 畅 8 3 畅 2 6 6 9 3 ? 畅 5 1 畅 2 7 0 0 2 ? 畅 8 4 畅 ?? a b a b b 2 5 0 畅 2 5 1 7 2 ? 畅 7 1 畅 2 7 4 5 2 ? 畅 9 8 畅 3 5 8 5 3 ? 畅 7 1 畅 3 8 5 4 3 ? 畅 2 3 畅 屯Ζ滗苘 屯Ζ?滗种苘挝 2 9 1 3 3 ? 畅 0 4 畅 3 0 3 6 3 ? 畅 2 1 畅 3 2 0 1 3 ? 畅 2 8 畅 ?貂? a b c b c 1 2 5 畅 2 3 8 3 1 ? 畅 9 3 畅 2 6 5 0 2 ? 畅 8 3 畅 2 7 9 6 3 ? 畅 0 1 畅 2 7 8 9 2 ? 畅 9 3 畅 2 8 9 8 3 ? 畅 3 3 畅 3 6 7 0 3 ? 畅 4 5 畅 4 3 8 0 4 ? 畅 5 2 畅 屯Ζ滗 苘 屯Ζ?滗种 苘挝 D D P 组 6 0 0 0 畅 2 1 1 1 2 ? 畅 4 1 畅 2 6 5 4 2 ? 畅 8 9 畅 2 6 6 4 3 ? 畅 0 1 畅 2 7 2 5 3 ? 畅 4 5 畅 唱 唱 唱 后Ζ滗后Ζ?滗种 N S 组 同 体 积 1 7 5 1 2 ? 畅 0 1 畅 2 3 5 4 1 ? 畅 9 3 畅 2 8 0 4 3 ? 畅 3 5 畅 3 2 1 5 4 ? 畅 1 7 畅 唱 唱 唱 Ζ滗Ζ?滗种 a b c 注 : 与 N S 组 比 较 , 0 5 ; 0 畅 < 与 0 5 畅 m g / k g 组 比 较 , 0 5 ; 0 畅 < 与 5 0 2 畅 m g / k g 组 比 较 , 0 5 0 畅 < 畅 2 S E 响 水小鼠存活率的影 对恶性腹 ( 表 2 , 图 1 ) : 经 统 计 学 分 析, 不 同 实 验 组 间 存 活 率 比 较 显 示: 低 剂 量 组 量组存活率较高 与中剂 , 优于其他各组 , 无统计学意义 两组间比较差异 , 余 其各 组 间 差 异 均 有 统 计 学 意 义 ( 5 0 ) ; 畅 0 < 计学意义 比较差异均有统 时间存活率各组间 不同 ( 1 0 ) 。 畅 0 < 析结果 综合分显 示: 在 各 实 验 组 中 , 组 高于其他各治疗 治疗组疗效显著 低剂量 , 的存活率较高 低剂量组小鼠 , 活时间长 存 。中 华 临 床 医 师 杂 志 ( 电 子 版 1 ) 1 0 2 年 7 月 第 5 卷 第 3 1 期 C hi n J C l i n i i c ns a ( E l n t o c e r i c E di t i n o ) , J u l y 1 1 0 2 1 , , V l o 5 , . N o . 3 13 7 7 5表 S E 对 荷癌性 腹水小 鼠存活 率的比 较 ( % ) 实 验 剂 量 组 别 D 1 D 3 D 5 D 7 D 9 D 1 1 D 1 3 D 1 5 ?( m g / k g ) 实 验 组 5 0 0 畅 1 0 0 9 0 7 0 4 0 2 0 0 0 0 ?鲻 a a a 2 5 0 畅 1 0 0 1 0 0 2 0 2 0 0 ?? 8 0 7 0 4 0 a a a 1 2 5 畅 1 0 0 1 0 0 4 0 2 0 0 ?? 9 0 8 0 7 0 D D P 组 6 0 0 0 畅 1 0 0 9 0 6 0 4 0 0 0 0 0 ?鲻 a a a N S 组 同 体 积 1 0 0 6 0 4 0 2 0 0 0 0 0 ? 鲻 a 注 : 与 0 0 5 畅 m g / k g 实 验 剂 量 组 比 较 , 0 5 0 畅 < 讨 论 及胸 指由恶性肿瘤累 性胸腹腔积液是 恶 、 腹膜或胸、 腹 膜 原 发 性 肿 瘤 所 致 的 胸 腹 膜 腔 积 液 , 是 晚 期 恶 性 常见并发症。 肿瘤的 侵犯胸膜 乎所有肿瘤均有 几 、 腹 膜 的 报 道, 其 中 肺 癌 、 消 化 道 肿 瘤、 妇 科 肿 瘤 最 为 常 见 , 8 ] [ 6 唱 约占 3 2 / 右 左 , 胸腹腔积液 瘤患者一旦出现 临床上恶性肿 , 期 味着病变已到晚 即意 。 观点认为 传统 : 胸腹 进入 是从壁层胸腹膜 腔积液 , 吸收 脏层胸腹膜 , 胸腹腔 积 液 的 形 成 是 由 于 壁 层 与 脏 层 胸 腹 膜 之 间 的 静 水 压、 内负压的压 透压和胸腹膜腔力 胶体渗 差 所 致 。 近 年 提 出 与 传 统 观 点 不 同 的 新 理 论 即 肿 瘤 阻 塞 壁 层 胸 腹 膜 血管、 淋巴管 , 纵隔淋巴结 或转移至 , 使 胸 腹 腔 积 液 的 回 流 吸 收 受 阻; 以 及 肿 瘤 直 接 侵 犯 和 伴 随 的 炎 症 使 毛 [ 9 ] 是主要原因之一 的通透性增加也 细血管 。 S E 向药物 细胞为靶点的靶 作用于血管内皮 作为一种新型以 , 作用机制很多 其抗肿瘤 , 主 要 包 括 : 特 异 地 细胞并抑制内 新生血管的内皮皮 作用于 细 胞 迁 移 , 诱 导 其 凋 亡; 调 节 肿 瘤 细 胞 表 面 血 管 内 皮 生 长 因 子 的 表 [ 1 0 ] 白水解酶的活性 及蛋 达 , 眠或退缩 间接导致肿瘤休 ; 质蛋白的 生内皮细胞与基相 阻碍增互 作 用 , 诱 导 内 皮 亡 细胞凋 , 同 时 减 少 l c B 2 、 唱 l c B 唱 L x 抗 凋 亡 蛋 白 , 抑 制 内 皮 细 胞 增 殖; 与 F G E V 、 F G F b 等 竞 争 性 抑 制 血 管 生 [ 1 1 ] 成 ; 细胞表面 性识别并结合内皮 整 特异 合 素 1 、 α 5 β α V 3 β 阻 止 内 皮 细 胞 发 生 黏 附 移 行 , 抑 制 并 干 扰 细 胞 唱 1 3 ] [ 1 2 唱 [ 1 4 ] 黏 基质间附 达 到 抑 制 肿 瘤 侵 袭 转 移 的 目 的 。 i m u S 等 报 道 S E 在 良 、 恶 性 胸 腔 积 液 中 均 有 表 达 , 而 在 显增高 腔积液中表达明 恶性胸 , 其 原 因 可 能 与 胸 腔 内 局 部 产 生 S E 有 关 。 有 研 究 表 明 胸 腹 腔 新 生 血 管 的 形 [ 9 ] 的主要原 是胸腹水形成 因 血管通透性的增加 和微 成 , 而 h r ? n i t a t s o d n E 能 抑 制 胸 腹 膜 新 生 血 管 形 成 和 对 抗 皮生长因子作用 血管内 , 减少 血管和渗透性均 使胸腹膜的新生 , 用 制胸腹水的作 从而达到控 。 观察中发现 们在前期的临床 我 , 应 用 H Y 6 1 唱 静 脉 联 合 化 疗 药 物 治 疗 晚 期 恶 性 肿 瘤 时, 合 并 胸 腹 腔 恶 性 的控制明显 患者其恶性积液优 积液的 于 实 体 肿 瘤 。 此 结 果 提 示 我 们 将 此 药 物 应 用 于 恶 性 胸 腹 腔 积 液 的 腔 4 ] [ 3 唱 [ 1 5 ] 治疗 局部 内 , 的疗效 可获得满意 , 疗效与国 其 内 学 者 的 研 究 结 果 相 近 。 我 们 的 基 础 研 究 显 示, 高 剂 量 H Y 6 1 ? 治疗优势明显 治疗组 , 与 P D D 对照组相当, 提示 H Y 6 1 ? 制腹水生成作用 具有较好的控 ; 小鼠存活率的 显示 比较中 , 低、 组明显优于其 中剂量他 各 组 ; 低 剂 量 治 疗 组 小 鼠 的 存 活 率 较 高 , 存 活 时 间 长。 此 结 果 与 国