人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响

人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响 中国兽医科学2009,39(O6):555—560 ChineseVeterinaryScience 中图分类号:S859.7文献标志码:A文章编号:1673—4696(2009)06—0555—06 人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响 王志强,张斌,陆宏,陶斌 (1.扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;2.苏州苏牧动物药业有限公司,江苏苏州215168) 摘要:将l6O只7日龄肉雏鸡随机分为8组,除健康对照组和免疫抑制对照组的雏鸡外,其余 健康雏鸡 或以环磷酰胺复制免疫抑制的雏鸡分别按50,100,200/~g/kg连续5d肌肉注射人工合成胸腺 五肽(TP一5), 并于12,l7,22日龄测定各免疫学指标.结果表明,TP一5对健康雏鸡及免疫抑制雏鸡有增强 免疫功能的作 用,200/~g/kg剂量TP一5肌肉注射能显着提高雏鸡增重和免疫器官指数,提高胸腺指数,脾 淋巴细胞增殖功 能和脾淋巴细胞分泌II2的功能,并能有效拮抗由环磷酰胺引起的免疫抑制,但不能对抗由 环磷酰胺所引 起的腔上囊损伤.另80只7日龄肉雏鸡被随机分为4纽,以研究200~g/kg剂量的TP一5对 新域疫疫苗免 疫雏鸡免疫功能的影响.证实,TP一5除能显着提高新城疫疫苗免疫雏鸡的各项免疫指标外, 还能显着提高 免疫抑制雏鸡血清的新城疫抗体效价. 关键词:胸腺五肽;环磷酰胺;免疫功能;雏鸡 Effectofsyntheticthymopentinonimmunefunctioninchick WANGZhi—qiang,ZHANGBin,LUHong.,TAOBin (1.CollegeofVeterinaryMedicine,YangzhouUniversity,Yangzhou225009,China: 2.SuzhouSumuAnimalMedicalIndustryCo.,LTD,Suzhou215168,China) Abstract:()nehundredandsixty7day—oldbroilerchickswererandomlydividedinto8groups.With theexceptionofthehealthcontrolgroupandtheimmunosuppressioncontrolgroup,theothergroupswer e injectedintramuscularlywithsyntheticthymopentin(TP一 5)atthedosesof50,100and200ptg/kgaccor— dingtothebodyweightforfivedays,respectively.Thensomeimmunologicalindexes,includingimmun e organ,proliferationofspleencells,andsecretionofII一 2byspleencellswererespectivelydeterminedon days12,17and22toinvestigatetheeffectofTP一5onimmunefunctioninchicks.TP一 5couldenhanceim munefunctioneffectivelyatthedosesof50,100and200>g/kginthehealthcontrolgrouportheimmun o— suppressioncontrolgroup.TP5showedmorerobustimmunopotentiationatthedoseof200/~g/kgaccor — dingtotheimmunologicalindexes.Atthesametime.TP一5couldeffectivelyantagonizedtheimmunosup— pressioninducedbycyclophosphamide.Additively,totaleighty7-day—oldchickswererandomlydivi dedin— to4groupsandwereusedtoresearchtheimmunopotentiationOfTP一5inchicksinoculatedwiththeNew— castledisease(ND)vaccine.TheresultsindicatedthatTP5couldsignificantlyimprovetheaboveimmu — nologicalindexesoftheNDvaccineinoculatedchicks.andincreaseantibodytitersinseraoftheimmuno — suppressedchicks. Keywords:thymopentin;cyclophosphamide;immunefunction;chick 胸腺五肽(thymopentin,TP一5)是动物胸腺分 泌的胸腺生成素?第32,36位的5个氨基酸组成 的肽链片段,目前可用人工方法合成,具有与胸腺生 成素?相同的活性及其全部生理功能.已它对 实验动物具有抗衰老,调节免疫功能作用,并具有安 全,毒副作用小,可与大多数药物合并用药等优点, 收稿Et期:2008—1208;修回日期:200904—16 作者简介:王志强(1972一),男,河南唐河人,副教授,博士,硕士生导师,主要从事兽医临床药理学研究,Tel:0514 87979032,E—mail:zqwang@yzu.edu.en 中国兽医科学第39卷 近年来在人类医学临床的疾病预防与治疗中得到了 广泛应用,并取得了良好的治疗效果].然而有关 TP一5在家禽上的研究国内外报道较少.本研究采 用环磷酰胺复制雏鸡免疫抑制模型,通过多项免疫 学指标检测,探讨人工合成TP一5对正常,免疫抑制 及新城疫疫苗免疫雏鸡免疫功能的影响,为TP一5 作为新型禽类免疫增强剂的开发及在畜禽疾病防治 中发挥应有作用提供理论依据. 1材料与方法 1.1实验动物 1日龄黄羽肉鸡240只,购自中国家禽研究所 实验种鸡场.按常规方法在相同条件下对它们进行 饲养和管理. 1.2试验药品与试剂 人工合成胸腺五肽冻干粉,含量98.8,由苏 州苏牧动物药业有限公司提供,批号20061027,临 用前用灭菌生理盐水稀释.注射用环磷酰胺,200 mg,江苏恒瑞医药股份有限公司生产. 试验用制剂主要有RPMI1640培养基,L一谷胺 酰胺,Hepes,2一巯基乙醇,MTT,十二烷基硫酸钠, 刀豆蛋白A?,淋巴细胞分离液,新生小牛血清, 口一MM. 1.3主要仪器 DG5031型酶联免疫检测仪:华东电子集团医 疗装备有限公司生产;Leica生物显微镜:上海莱卡 显微镜有限公司生产;24,96孔细胞培养板:Costar 公司产品. 1.4TP-5对正常及免疫抑制雏鸡免疫功能的影响 160只7日龄黄羽肉鸡,雌雄兼有,随机被分成 8组,每组20只.各组按表1方法分别处理.生理 盐水,环磷酰胺,TP一5均采用肌肉注射,每日1次. 分别于12,l7,22日龄时每组剖杀6只雏鸡,迅速取 脾,腔上囊以及胸腺,剔除脂肪后称鲜重. 1.5TP-5对免疫新城疫疫苗雏鸡免疫功能的影响 将8O只黄羽肉鸡随机分为4组,每组2O只,lO 日龄时对所有鸡免疫新城疫疫苗(滴鼻及点眼).各 组按表2方法处理.分别于12,17,22日龄每组剖 杀6只鸡,称量体重,心脏采血后处死,迅速取脾,腔 上囊以及胸腺,剔除脂肪后称鲜重. 1.6检测指标及方法 检测指标包括:增重,器官指数(胸腺,脾,腔上 囊),脾T淋巴细胞增殖反应,脾T淋巴细胞IL,2 的体外诱生及其活性,免疫新城疫疫苗雏鸡外周血 T,B淋巴细胞转化率及血清中ND抗体效价.其中 脾T淋巴细胞增殖反应,脾T淋巴细胞IL-2的体 外诱生及其活性测定方法为四甲基偶氮唑(MTT) 比色法].外周血T,B淋巴细胞转化率采用MTT 法测定,淋巴细胞转化率用刺激指数(stimulating index,SI)表示,SI—ConA刺激孔D57o/对照孔 D…血清中ND抗体效价采用微量血凝抑制试 验测定,用Ib的平均值表示. 表1动物分组与给药 Table1Groupinganddosageregimens 生理盐水环磷酰胺TP一5 NormalsalineCyclophosphamideThymopentin 若p日龄/d剂量/日龄/d剂量/日龄/d剂量/.’ Age(mL?kg一)Age(mg?kg一)Age(g?kg一) indaysDosesindaysDosesindaysDoses 组别 Groups 环磷酰胺TP一5 CyclophosphamideThymopentin 日龄/d剂量/日龄/d剂量/ )Age(mg?kg一)Age(vg?kg一) indaysDosesindaysDoses 第1组.7,l15UroupJ 善210~11 第3组 Group3 第4组 Group4 2结果 2.1TP-5对健康及免疫抑制雏鸡免疫功能的影响 2.1.1对雏鸡增重的影响各日龄时第2,4组雏 鸡的增重均显着低于其他各组(P<0.05),其他各 TP一5组对健康雏鸡的增重有促进作用,但作用不显 着(P>0.05).同时,200~g/kgTP一5能对抗环磷 酰胺对雏鸡增重的抑制作用,5O~g/kg和100 g/kgTP,5拮抗环磷酰胺的作用不显着.结果见 表3. 蝴,一, 第6期王志强等:人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响 2.1.2对雏鸡免疫器官指数的影响12,17日龄 时,第2组雏鸡的胸腺指数显着低于其他组(P< 0.05),第5组的胸腺指数显着高于第3,4组(P< 0.05),17日龄时,第6,8组的胸腺指数显着高于 第1组和第5组(P<O.05);22日龄时,第5,8组 的胸腺指数显着高于第1,4组(P<0.05).同时, 12,17日龄时第2,4组的脾指数显着低于其他各 组,第5组脾指数显着高于第2组(P<O.05),至22 日龄时各组的脾指数差异不显着.此外,12,17,22 日龄时第2,5组的腔上囊指数均极显着低于其他 组(P<0.01),100~g/kg和200~g/kg的TP一5能 促进腔上囊发育,但效果不显着(P>0.05).表明 各剂量TP一5均能拮抗环磷酰胺对胸腺的抑制作 用,200~g/kgTP一5能拮抗环磷酰胺对脾的抑制作 用,并能显着促进雏鸡胸腺与脾的发育,但TP一5不 能拮抗环磷酰胺对雏鸡腔上囊发育的抑制作用,但 对健康雏鸡腔上囊的发育有一定促进作用.结果见 表3. 表3TP-5对健康及免疫抑制雏鸡免疫功能的影响 Table3TheinfluenceofTP-5onimmunefunctioninhealthandimmunesuppressionchickens 同一行中肩注不同字母的各组均数之间差异显着(P<0.05),下表同 Thedifferencebetweenmeanswithadifferentletterwassignificant(P~0.05)inthesamerow.Thesameas Table4 558中国兽医科学第39卷 2.1.3对雏鸡脾淋巴细胞增殖功能的影响12日 龄时第2,4组的SI值显着低于其他组(P< 0.05);17日龄时第2,3组的sI值显着低于其他 组(P<0.05),第8组的SI值显着高于其他组(P< 0.05);22日龄时第2组的SI值显着低于其他组(P <o.05),第8组的sI值仍显着高于其他组(P< 0.05).表明各剂量TP一5均能拮抗环磷酰胺对雏 鸡脾淋巴细胞增殖功能的抑制作用,200~g/kgTP一 5能显着提高健康雏鸡的脾淋巴细胞增殖功能.结 果见表3. 2.1.4对雏鸡脾淋巴细胞IL一2的诱生作用各日 龄时第2,4组的D..值均显着低于其他组(P< 0.05),l7,22日龄时第8组的D值显着高于其 他组(P%0.05).表明200~g/kgTP一5能促进健康 雏鸡的脾淋巴细胞II一2的分泌并能拮抗环磷酰胺 对雏鸡脾淋巴细胞IL一2分泌的抑制作用.5O ~g/kg和100~g/kgTP一5的拮抗环磷酰胺和对健康 雏鸡脾淋巴细胞II2的诱生作用不显着.结果见 表3. 2.2TP-5对免疫新城疫疫苗雏鸡免疫功能的影晌 2.2.1对免疫雏鸡增重的影响12,17日龄时第2 组的增重显着低于其他组(P%0.05),在22日龄时 极显着低于其他组(P%0.01),第3组的增重在12, 22日龄时比第1组和第4组低,但差异不显着.表 明TP一5能拮抗环磷酰胺的抑制作用,并能促进雏 鸡的增重,但效果不显着.结果见表4. 表4TP-5对免疫新城疫疫苗雏鸡免疫功能的影响 Table4TheinfluenceofTP一 5onimmunefunctioninchickensinoculatedwiththeNewcastlediseasevaccine 2.2.2对免疫雏鸡免疫器官指数的影响各日龄 第2组的胸腺指数均显着低于其他组(P<0.05), 第3组的胸腺指数与第1组差异不显着,第4组在 17,22日龄时显着高于其他组(P<0.05);12日龄 时第2,3组的脾指数显着低于其他组(P%0.05), 17Et龄时第2组的脾指数显着低于其他组(P< 0.05),至22日龄时各组脾指数差异不显着;各日龄 第2,3组的腔上囊指数均极显着低于其他组(P< 0.01).表明200g/kgTP一5能拮抗环磷酰胺对雏 鸡胸腺,脾的抑制作用,但不能拮抗对雏鸡腔上囊发 育的抑制作用,并能显着促进免疫雏鸡胸腺的生长 发育.结果见表4. 第6期王志强等:人工合成胸腺五肽对雏鸡免疫功能的影响 2.2.3对免疫雏鸡外周血T,B淋巴细胞增殖功能 的影响外周血T淋巴细胞增殖试验中,各日龄时 第2组的SI值均显着低于其他组(P<O.05),第4 组的sI值显着高于其他组(P<O.05);外周血B淋 巴细胞增殖试验中,12,17,22日龄时第2,3组的SI 值均显着低于其他组(P<0.05).表明200/~g/kg TP,5能拮抗环磷酰胺对免疫雏鸡外周血T淋巴细 胞增殖的抑制作用,并能显着促进雏鸡外周血T淋 巴细胞的增殖,但不能拮抗环磷酰胺对免疫雏鸡外 周血B淋巴细胞增殖的抑制作用,也不能促进雏鸡 外周血B淋巴细胞的增殖.结果见表4. 脾淋巴细胞增殖试验中,各日龄时第2组的sI 值均显着低于其他组(P<0.05),17日龄时第4组 的SI值显着高于其他组(P<0.05).表明200 ug/kgTP一5能提高健康雏鸡的脾淋巴细胞增殖功 并能拮抗环磷酰胺对雏鸡脾淋巴细胞增殖功能的抑 制作用.结果见表4. 2.2.4对免疫雏鸡脾淋巴细胞II一2的诱生作用 脾淋巴细胞II一2的诱生试验中,各日龄时第2组的 D.值均显着低于其他组(P<O.05),17,22日龄 时第4组的D.值显着高于其他组(P<0.05). 表明TP一5能显着促进免疫雏鸡的脾淋巴细胞II一2 的分泌并能拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用.结果见 表4. 2.2.5对免疫雏鸡血清中ND抗体效价的影响 各日龄时第2组的血清中ND抗体效价均显着低于 其他组(P<O.05),其他各组的血清抗体效价差异 不显着.表明TP5可拮抗环磷酰胺抑制抗体效价 的作用,但TP一5不能提高正常免疫雏鸡血清抗体 效价.结果见表4. 3讨论 关于TP一5在人及小鼠的作用及其机理,国内 外已有大量报道,一般认为T淋巴细胞或其他种类 细胞膜上有TP一5的特异受体,与TP-5结合后,促 活胞内腺苷酸环化酶生成cAMP,引起酶活性及细 胞通透性变化,以及各种其他效应,如诱导T细胞 分化,在正常机体状态下显现免疫刺激作用,对免疫 应答的初次或再次反应的不同阶段都有增强作用. 本研究表明,各剂量的TP一5对健康雏鸡腔上 囊和脾的发育均有促进作用,并能显着促进雏鸡胸 腺的发育,200ug/kgTP一5能拮抗环磷酰胺对胸 腺,脾生长的抑制作用.由此可知,TP一5对环磷酰 胺免疫抑制的拮抗作用是通过促进脾和胸腺的生长 发育来实现的,而对环磷酰胺引起的腔上囊发育受 阻并无拮抗作用.这可能与TP一5作用的靶器官和 靶细胞有关,TP一5主要作用于胸腺,诱导和促进T 淋巴细胞的分化,增殖和成熟,对腔上囊发育的影响 和调节作用不大.关于TP-5对免疫器官的影响, 国外亦有报道.Gallo等在用化学致癌剂二羟甲 基丁酸(DMBA)灌胃前一周开始对大鼠注射TP一5, 能明显改善DMBA造成的免疫功能低下,使胸腺细 胞和脾细胞对ConA刺激的增殖反应加强,胸腺 CD4..CD8和CD4CD8一细胞亚群数量及脾细胞 IL-2受体表达量增加.此外,200/zg/kgTP一5能促 进健康雏鸡的脾淋巴细胞IL一2的分泌并能对抗环 磷酰胺的免疫抑制作用.刘俊达,蒋超也证明TP一5 能显着提高小鼠脾淋巴细胞的增殖功能l_4].张春 莉等使用合成的TP一5经小鼠腹腔注射后对实验 动物进行淋巴细胞转化试验,溶血空斑试验及II一2 活性的测定,结果也证明TP一5能明显促进II一2的 诱生. 本研究中,对于免疫ND疫苗的雏鸡,200 ug/kgTP5能够拮抗环磷酰胺对增重,免疫器官指 数,外周血T淋巴细胞增殖,脾淋巴细胞II一2的诱 生,ND抗体效价的抑制作用,对免疫抑制雏鸡起保 护作用,但对外周血B淋巴细胞的增殖功能作用不 显着.但TP5显着提高免疫抑制雏鸡血清抗体效 价的作用机理还有待于进一步研究.有报道以胸腺 提取物作为添加剂添加于饲料或饮水,或用于小鸡 出壳前气雾或肌肉注射给药,可提高免疫功能,具有 促进抗体生成,促生长作用.此外,已证明用鸡的胸 腺提取液喂鸡,能促进外周血淋巴细胞的生长_7;单 独使用胸腺肽对鸡新城疫和传染性支气管炎的治愈 率达到7O以上;胸腺肽对鸡新城疫病毒和传染 性喉气管炎病毒强毒混合感染的小鸡有一定的预防 与治疗作用. 目前在畜牧业生产中引起家禽免疫抑制的各种 因素越来越多,造成的危害也越来越大.本研究证 实,TP5能提高健康,免疫抑制及新城疫疫苗免疫 雏鸡的增重和免疫器官指数,外周血T淋巴细胞的 增殖功能,脾淋巴细胞增殖功能和脾淋巴细胞分泌 II一2的功能,能显着提高免疫抑制雏鸡血清抗体效 价,对免疫抑制雏鸡起免疫保护作用,并能有效拮抗 由环磷酰胺引起的细胞免疫抑制.这说明TP一5在 兽医临床上可作为一种免疫增强剂应用,用于治疗 免疫抑制病. 参考文献(References) [1]张幸平,雷自重,陈绪元,等.注射用胸腺五肽(TP5)对肿瘤化 56O中国兽医科学第39卷 [23 [3] [4] [53 疗病人的免疫增强作用IJ].重庆医科大学学报,2001,26(3): 299—3O1. 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