天黄猴枣散质量标准研究

天黄猴枣散质量标准研究 ? 32? 天黄猴枣散质量标准研究 冼艳婷,莫斯[广州敬修堂(药业)股份有限公司,广东广州510130)] 现代食品与药品杂志2007年第17卷第6期 摘要:目的建立天黄猴枣散的质量标准.用薄层色谱法鉴别天黄猴枣散中天麻,猴枣,体 外培育牛黄;用高效液相 色谱法对制刺中天麻素进行定量,PhenomenexC(4.60am×250am,4m)色谱柱,流动相为 甲醇一0.05%磷酸溶液(3 :97);检测波长220nm,流速1,0ml/min,柱温25oC.结果定性鉴别分离度好,专属性强;天麻素对 照品在进样量为0.1—2 g之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0,9999,//,=6),平均加样回收率为 99.51%(RSD=2,4%,//,=6).结论所建立的方 法可靠,专属性强,可有效控制天黄猴枣散的质量. 关键词:天黄猴枣散;质量标准;天麻;天麻素;猴枣;体外培育牛黄;TLC;HPLC 中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673—4610(2007)06—0032—04 QualityStandardforTianhuangHouzaoPowder XIANYan—ting,MOSi(GuangzhouJingxiutangPharmaceuticalCo.,LTD.,Guangzhou,Guangdong510130,China) Abstract:ObjectiveToestablishthequalitystandardforTianhuangHouzaopowder.MethodsRhizomaGastrodiae,PellisOvis, andCalculusBovisSativusinTianhuangHouzaopowderwereidentifiedbyTLC,ThecontentofGastrodininthepowderwar determinedbyHPLC,TheHPLCconditionwasasfollows:columnwasPhenomenexCl8(4.60am×250am,4m),themobilephase consistedofmethanol一 0.05%phosphoricacid(3:97),theUVdetectionwavelengthWasat220nm,theflowrateWas1.0ml/min withcolumntemperatureat25.ResultsThecharacteristicidentificationbyTLCWasdistinctandhighlyspecific.Thecalibration curveofGastrodinCRSwaslinearwithin0.1—2txg(r=0.9999,=6).TheaveragerecoveryWas99.51%(RSD=2.4%,=6). ConclusionThemethodisreliable,accul’ate,andspecific.ItCanbeusedforqualitycontrolofTianhuangHouzaoPowder. Keywords:TianhuangHouzaopowder;qualitystandard;RlfizomaGastrodiae;Gastrodin;PeUisOvis;CalculusBovisSativus;TLC; HPI.(: 天黄猴枣散是由天麻,猴枣,体外培育牛黄,天 竺黄等十一味中药组成的纯中药制剂,具有除痰定 惊,祛风清热的功效,用于小儿痰多咳喘,发热不退, 惊悸不眠等症川.为了有效控制该制剂的质量,保 证其J床疗效,本实验在原标准基础上增加了TLC 对处方中的天麻,体外培育牛黄,猴枣进行定性分 析;采用HPLC对方中君药天麻的主要成分天麻素 进行了含量测定,建立了可靠,专属性强的质量控制 方法. 1仪器与试药 1.1仪器 Agilent1100高效液相色谱仪,DAD检测器, Agilentl100化学工作站;Precisa404A及92SM一 202A电子天平;KQ-600DE型数控超声波清洗仪 (功率600W,频率40kHz). 1.2对照品与对照药材 胆酸(批号078-9312),去氧胆酸(批号721— 8902),天麻素对照品(批号110807-200205)和天麻 对照药材(批号0944-200006)由中国药品生物制品 检定所提供,猴枣药材经广州市药品检验所鉴定后 作为工作对照. 1.3试药 硅胶G为青岛海洋化工生产,硅胶G预制板为 青岛海洋化工厂分厂生产;天黄猴枣散(批号 G01005,G01006,G02007G02008,G02009G02010 G03011,G03012,G03013,G03014)由广州经修堂 (药业)股份有限公司提供;阴性样品依处方除去被 检药材按相应制备工艺制成;甲醇为色谱纯,水为重 蒸水;其他试剂均为分析纯. 2定性方法及结果 2.1天麻TLC鉴别 取本品1.5g,加70%甲醇20ml,超声处理30 rain,滤过,滤液置水浴上蒸干,残渣加70%甲醇l ml溶解,加在中性氧化铝柱(100—200目,l0g,内 作者简介:冼艳婷(1976一),女,本科,制药工程师,从事中药工艺和质量标准研究工作 现代食品与药品杂志2007年第l7卷第6期 径l_5em,甲醇湿法装柱)上,用70%甲醇3Oml洗 脱,收集洗脱液,置水浴上蒸干,残渣加70%甲醇1 ml溶解,作为供试品溶液.另取天麻对照药材0.2 g,加70%甲醇lml,超声处理30min,静置,取上清 液,作为对照药材溶液.再取天麻素对照品,加甲醇 制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液.吸 取以上溶液各5l,分别点于同一以羧甲基纤维素 钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯一甲醇 一 水(9:2:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%磷钼酸乙醇溶液,在105oC加热至斑点显色清 晰.供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相 应的位置上,显相同颜色的斑点.阴性无干扰(见 图1). 123456, 1.GO3011;2.G03012;3.G03013;4.天麻对照药材; 5.天麻素对照品;6.阴性样品 图1天麻TLC鉴别图谱 12345 1.GO3011;2.G03012;3.G03013;4.猴枣对照药材; 5.阴性样品 图2猴枣TLC鉴别图谱 2.2猴枣TLC鉴别 取本品2g,加甲醇3Oml,冷浸30min,振摇使 溶解,滤过,滤液置水浴蒸干,残渣加甲醇1ml溶 解.作为供试品溶液.取猴枣对照药材,加甲醇制成 每1ml含4mg的溶液,作为对照品溶液.吸取上 述溶液各5l,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 黏合剂的硅胶G薄层板上,以甲苯一乙酸乙酯一甲 ? 33? 酸(10:8:1)为展开剂,展开,取出,晾干,在紫外光 灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与对照品色 谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.阴性无干扰 (见图2). 2.3体外培育牛黄TLC鉴别J 取2.2项的供试品溶液稀释1O倍,作为供试品 溶液.取胆酸,去氧胆酸对照品,加甲醇制成每1ml 各含0.5mg,1mg的溶液作为对照品溶液.吸取上 述溶液各2l,分别点于同一以羧甲基纤维素钠为 黏合剂的硅胶G薄层板上,以异辛烷一乙酸乙酯一 冰醋酸(15:7:5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以 10%硫酸乙醇溶液,在105c【=加热至斑点显色清晰, 在紫外光灯(365nm)下检视,供试品色谱中,在与 对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点.阴 性无干扰(见图3). 1-GO3011;2-C03012:3.G03013;4-胆酸对照品; 5.去氧胆酸对照品;6.阴性样品 图3体外培育牛黄TLC图谱 3天麻素的HPLC测定方法与结果I4 3.1色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱 [PhenomenexSynergi4txgFusion—RP80A(250mm x4.60mm)];甲醇43.05%磷酸溶液(3:97)为流动 相;流速1ml/min,检测波长220nm,柱温25cC. 理论板数按天麻素峰计算应不低于5000. 3.2对照品溶液的制备 取天麻素对照品适量,精密称定,加流动相制成 每1m1含50g的溶液,即得. 3.3供试品溶液的制备 取本品1.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密 加入70%甲醇25ml,称定重量,加热回流提取3h, 放冷再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,滤 过,取续滤液1Oml,水浴上浓缩至近干,残渣加流动 相溶解,移至1Oml量瓶中,并用流动相稀释至刻 ? 34? 度,摇匀,用微孔滤膜过滤,取续滤液,即得. 3.4阴性对照溶液的制备 按处方及制法,制成缺天麻药材的阴性对照样 品.取相当于供试品的量,按供试品溶液的制备方 法制成阴性对照品溶液. 3.5专属性试验 精密吸取对照品溶液,供试品溶液,阴性对照溶 液,溶剂空白溶液(流动相)各10l,分别注入液相 色谱仪,按含量测定的方法测定.结果阴性无干扰 (见图4). 80 50 20 - 10 — 8O 5O 20 一 l0 8O 5O 20 — 1O O1O2O OlO2O3O t/min A.对照品溶液;B.供试品溶液;C.阴性对照溶液 图4天黄猴枣散HPLC图 3.6线性考察 精密量取天麻素对照品溶液(0.2mg/m1)0.5, 1,2,3,5ml,置10IIll量瓶中,加流动相至刻度,摇 匀,即得0.010,0.020,0.040,0.060,0.100,0.200 现代食品与药品杂志2007年第17卷第6期 mg/rIll等6个梯度溶液.分别精密吸取10l,分别 注人液相色谱仪,按含量测定的方法测定,以对照品 的浓度(mg/m1)为横坐标,测得的峰面积为纵坐标, 绘制标准曲线,得回归方程Y=1.79×10X一1.62 ×10,.r=0.9999(凡=6).结果明,天麻素对照 品在进样量为0.1—2g之间与峰面积呈良好的线 性关系. 3.7精密度试验 取同一份供试品(批号G01005)溶液,连续进 样六次,测定其峰面积,结果RSD=0.3%(凡=6), 表明精密度良好. 3.8重复性试验 取同一批供试品(批号G01005)6份,按供试品 溶液制备方法制备,分别测定,计算天麻素的含量, RSD=2.7%(凡=6),结果重现性好. 3.9稳定性试验 取同一份供试品(批号G01005),按供试品溶 液制备方法制备,分别在0,2,5,8,10,12h进样测 定天麻素峰面积.结果RSD=0.7%(凡=6),表明 供试品溶液12h内基本稳定. 3.1O加样回收试验 取同一批已知含量(批号G01005,含量 0.1075%)的供试品6份,分别精密加入等量的天麻 素对照品溶液,按含量测定方法测定,计算天麻素的 回收率.结果平均回收率为99.51%,RSD=2.4% (凡=6),表明该方法准确度良好(见表1). 3.11供试品测定精密吸取对照品溶液和供试品 溶液,注人液相色谱仪,记录峰面积,以外标法计算 含量,结果见表2. 表1加样回收试验结果 现代食品与药品杂志2007年第17卷第6期 4讨论 天麻TLC鉴别,在提取方法的确定上,曾作 70%甲醇提取,正丁醇提取,正丁醇提取水萃取等方 法的摸索,分离效果均不理想,拖尾严重,后确定用 中性氧化铝柱进行分离,先后用甲醇,70%甲醇进行 洗脱,结果表明,甲醇湿法装柱后直接用70%甲醇 30ml即可将天麻素洗脱下来.且湿法装柱效果比 干法装柱好.在展开系统方面,参照药典方法展开 不理想,改变甲醇比例为(9:5:0.2),(9:4:0.2),(9 :2:0.2)等,最后确定展开剂为乙酸乙酯一甲醇一水(9 :2:0.2),展开约8cm,即可达到很好的分离效果. 含量测定方面,曾作提取方法(超声法,回流 法),提取溶剂(甲醇,70%甲醇,50%甲醇),提取时 间(1,2,3,4h),溶剂加入量(10倍,20倍)的比较, 最后确定选用20倍量70%甲醇回流提取3h. 在流动相的选择方面,采用了乙腈-0.05%磷酸 溶液(3:97),不同比例的甲醇一水,甲醇-0.05%磷酸 ? 35? 溶液,最后确定用甲醇-0.05%磷酸溶液(3:97).结 果供试品中天麻素峰达到基线分离,峰形对称,保留 时间适中,分离度好,阴性无干扰. 参考文献: [1]国家药典委员会,卫生部药品标准中药成方制剂(第十 册,WS3一B一1889—95)[s].北京:卫生部药典委员 会,1995:19. [2]国家药典委员会.中国药典(2005年版)一部[s].北京: 化学工业出版社,2005:39. [3]常新全,丁丽霞.中药活性成分分析手册(上册)[M].北 京:学苑出版社,2002,429—435,495—513. [4]郑虎占,董泽宏,余靖,等.中药现代化研究与应用(第一 卷)[M].北京:学苑出版社,1997,885—907. [5]丁健东,田金致,吕扬,等.印度猴枣和马来西亚猴枣的x 一 射线粉末衍射分析[J].中国药事,2002;16(2):101— 103. (收稿:2007—02—20;修回:2007—04—29) HPLC-ELSD测定酸枣仁合剂中酸枣仁皂苷A的含量 隋宏,周慧玲,陈建峰,马学琴(宁夏医学院药检系,宁夏银JlI750021) 摘要:目的建立酸枣仁合剂中酸枣仁皂苷A的含量测定方法.方法应用高效液相色谱一蒸发光散射检测器(HPLC- ELSD),色谱柱:HypersilODS-2Cl8(250l’m/lx4.6Inlll,5m);流动相:甲醇一水(6o:40),测定酸枣仁合剂中酸枣仁皂苷A的 含量.结果平均回收率为99.09%(RSD=3.05%).结论本方法简便,重现性良好,可作为酸枣仁合剂的质量控制方法. 关键词:酸枣仁合剂;酸枣仁皂苷A;高效液相色谱法;蒸发光散射检测器 中图分类号:R284文献标识码:A文章编号:1673—4610(2007)06—0035—03 DeterminationofJujubasideAinZiziphiSpinosaeMixturebyHPLC-ELSD SUIHong,ZHOUHui-ling,CHENJian-feng,MAXue?qin (PharmaceuticalDepartmentofNingxiaMedicalCollege,Yinehuan,Ningxia750021) Abstract~0bjectiveTodevelopanewmethodforthedeterminationofJujubasideainZiziphiSpinosaemi xture.MethodsAHPLC- ELSDmethodwassetup,usingHypcrsilODS-2Cl8colunm,Methanol-water(60:40)聃 themobilephasewithaflowrateof1ml/min. ResultsThecalibrationcurvewaslinearintherangeof0.168—1.34g.Theaveragerecoverywas99.05%.ConclusionThe methodisappropriateforthedeterminationofJujubasideA. Keywords:ZiziphiSpinosaemixture;JujubasideA;HPLC-ELSD 科学研究表明充足的睡眠,适量的运动,均衡的 营养和平和的心态成为保证人体健康的四大要素. 随着现代生活节奏的加快,社会竞争的加剧,越来越 多的人饱受着失眠的折磨.长期失眠会严重影响患 者的身心健康,使工作和学习效率大大降低.本课 题旨在对我院贺弋教授临床使用多年,疗效显着的 作者简介:隋宏(1966一),女,硕士,副教授,从事临床药学工作.