乳癖散结片质量标准研究

乳癖散结片质量标准研究 【摘要】  目的建立乳癖散结片的质量标准。方法 采用TLC法对处方中当归、川芎、柴胡、赤芍、延胡索进行 鉴别 ,用 HPLC法测定制剂中芍药苷含量。 结果3批样品 的TLC色谱中均能检出当归、川芎、柴胡、赤芍、延胡索, 芍药苷的含量限度规定为不得少于1.00 mg/片。结论该方法 简便可行～重现性好～可有效地控制乳癖散结片的质量。 【关键词】  乳癖散结片, 薄层色谱, 高效液相 色谱, 质量标准 Abstract:ObjectiveTo establish the quality of Rupi Sanjie Tablets. MethodsRadix Angelicae Sinensis, Rhizoma Chuanxiong, Radix Bupleuri, Paeonia lactiflora and Rhizoma Corydalis in the prescription were identified by TLC～Paeoniflorin was determined by HPLC.ResultsRadix Angelicae Sinensis,Rhizoma Chuanxiong,Radix Bupleuri, Paeonia lactiflora and Rhizoma Corydalis could be detected by TLC～The content limit of Paeoniflorin shouldn't be lower than 1.00mg per tablet.ConclusionThe established method is simple～ feasible and reproducible.The quality of Compound Chaishao Tablets can be effectively controlled by the method. Key words:Rupi Sanjie Tablets,  TLC,  HPLC,  Quality standard     乳癖散结片由夏枯草、川芎,酒炙,、僵蚕,麸炒,、鳖甲,醋炙,、柴胡,醋炙,、赤芍,酒炒,、玫瑰花、莪术,醋炙,、当归,酒炒,、延胡索,醋炙,和牡蛎11味中药经科学组方制成的复方制剂,具有行气活血～软坚散结的功效。临床上主要用于气滞血淤所致的乳腺增生病～症见乳房疼痛、乳房肿块～烦躁易怒～胸胁胀满等。为有效地控制其内在质量～采用HPLC法对其主要药味赤芍所含的有效成分芍药苷进行含量测定～并对样品中当归、川芎、柴胡、赤芍、延胡索进行了薄层鉴别。 1  仪器与试剂     岛津10A(日本)高效液相色谱仪,延胡索乙素、芍药苷对照品及当归、川芎、柴胡对照药材均购自中国药品生物制品检定所。乳癖散结片,湖北李时珍医药集团有限公司, 批号:2412001～2412002～2412003,。     甲醇为色谱试剂(特级)～水为重蒸水～其它试剂均为分析纯。 2  方法与结果 2.1  薄层鉴别 2.1.1  当归、川芎的鉴别 取本品5片～除去包衣～研细～加正己烷25 ml～超声处理30 min～滤过～滤液浓缩至约1 ml～作为供试品溶液。另取川芎、当归对照药材各0.5 g,分别同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验～吸取上述供试品溶液10 μl ,对照药材溶液各5 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以石油醚(60，90?) 醋酸乙酯,9?1,为展开剂～展开～取出～晾干～臵紫外光灯,365 nm,下检视。供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显相同颜色的荧光斑点～而缺当归、川芎阴性对照则无此特征斑点。见图1。 2.1.2   柴胡的鉴别  取本品15片～除去包衣～研细～加甲醇40 ml～加热回流 30 min～滤 过～滤液蒸干～残渣加水30ml溶解～臵分液漏斗中～用三氯甲烷振摇提取3次～20 ml/次～弃去三氯甲烷液～水液用水饱和的正丁醇振摇提取3次～20 ml/次～合并正丁醇液～加入等体积的氨试液～摇匀～放臵使分层～分取上层液～减压回收正丁醇至干～残渣加甲醇1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取柴胡对照药材0.5 g～加乙醚30 ml～加热回流30 min,弃去乙醚液～药渣挥去乙醚～加甲醇30 ml～加热回流30 min滤过～滤液减压回收甲醇至干～残渣加水15 ml使溶解～自“用水饱和的正丁醇振摇提取3次”起～同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验～吸取供试品溶液15 μl～对照药材溶液10 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以三氯甲烷-甲醇-水(65?35?10) 10?以下放臵的下层溶液为展开剂～展开～取出～晾干～喷以2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液～热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显至少两个相同颜色的斑点。而阴性制剂对照溶液无此斑点。见图2。 2.1.3   延胡索的鉴别 取本品10片～除去包衣～研细～加浓氨试液1 ml～三氯甲烷25 ml～冷浸1 h～时时振摇～滤过～滤液蒸干～残渣加乙醇1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取延胡索乙素对照品～加乙醇制成每毫升含1 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱法试验～吸 取上述两种溶液各5 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以正己烷- 醋酸乙酯- 氨水,6?4?0.2,为展开剂～展开～取出～晾干～碘熏～在空气中挥尽板上吸附的碘后～臵紫外光灯,365 nm,下检视。供试品色谱中～在与对照品色谱相应的位臵上～显相同颜色的荧光斑点。而缺延胡索阴性对照则无此特征斑点。见图3。    2.1.4   赤芍的鉴别  取本品10片～除去包衣～研细～加乙醇40 ml～超声处理20 min～滤过～滤液蒸干～残渣加乙醇1 ml使溶解～作为供试品溶液。另取芍药苷对照品～加乙醇制成每毫升含2 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱法试验～吸取上述两种溶液各5 μl～分别点于同一硅胶G薄层板上～以三氯甲烷-醋酸乙酯- 甲醇- 甲酸,40?5?10?0.2,为展开剂～展开～取出～晾干～喷以5%香草醛硫酸溶液～加热至斑点显色清晰。供试品色谱中～在与对照品色谱相应的位臵上～显相同颜色的斑点。而阴性制剂对照溶液无干扰～说明本法鉴别本制剂中赤芍具专属性～见图4。 图1  1; 当归、川芎鉴别TLC图,略,    图2  柴胡鉴别TLC图,略, 图3  延胡索鉴别TLC图,略,    图4  赤芍鉴别TLC图,略, 2.2  含量测定 2.2.1  色谱条件Hypersil C18色谱柱,200 mm×4.6 mm,5μm,,甲醇-水(17?38)为流动相,检测波长为230 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35?,理论塔板数(N) 按芍药苷峰计算为2500以上～拖尾因子为1.02。 2.2.2   方法     对照品溶液的制备:精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量～加甲醇制成每毫升含0.01 mg的溶液～即得。     供试品溶液的制备:本品20片～除去包衣～精密称定～研细～取约0.5 g～精密称定～臵具塞锥形瓶中～精密 加入50%甲醇50 ml,密塞～称定重量～超声处理,功率250W～频率50kHz,30 min～放冷～再称定重量～用50%甲醇补足减失的重量～摇匀～离心～上清液滤过～取续滤液～即得。     测定方法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl～注入液相色谱仪～测定～即得。 2.2.3  方法学考察     阴性对照实验:按处方比例～照本品制备工艺～制备不含赤芍的阴性对照样品～再按供试品溶液配制方法制成阴性对照溶液～取10 μl注入液相色谱仪。结果阴性对照不干扰芍药苷的测定～色谱图见图5。     线性关系考察:精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品适量～加甲醇制成每毫升含0.08 mg的溶液, 分别精密移取1～3～5～7～9 ml,定量稀释至10 ml量瓶中～作为芍药苷对照品溶液1，5号。精密称取芍药苷对照品溶液1，5号各10 μl进样～按上述色谱条件测定。以芍药苷峰面积Y为纵坐标～对照品进样浓度X为横坐标～进行线性回归～回归方程为Y=1.385 34×107X～r=0.999 7。结果明～芍药苷进样浓度在0.008 ，0.072 mg/ml范围内 与峰面积线性关系良好。     精密度实验:取同一供试品,批号2412001,溶液连续测定5次～芍药苷平均峰面积的RSD为1.32%。     稳定性实验:精密吸取供试品溶液,批号2412001,10 μl～分别于0～2～4～6～8 h注入液相色谱仪～测得芍药苷峰面积积分值～结果RSD为1.22%～表明样品供试品溶液在8 h内基本稳定。 a 缺赤芍阴性对照  b 芍药苷对照品  c 样品 图5  乳癖散结片芍药苷HPLC色谱图,略,     重复性实验:取样品,批号2412001,5份～分别按供试品的制备方法制备～依法测定～结果芍药苷平均含量为2.842 3 mg/g～即1.25 mg/片～RSD为0.26%。     加样回收率实验:取已知含量的样品,批号2412001,细粉9份于臵具塞锥形瓶中～精密称定～分别精密移取芍药苷对照品溶液,0.19 mg/ml,3.0 ml(1，3号)～2.0 ml(4， 6号) ～3.0 ml(7，9号)～按供试品的制备方法制备～依法测定。结果见表1。 2.2.4  样品的含量测定  取样品3批～按正文【含量测定】项下操作～分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl～注入液相色谱仪～测定结果见表2。 表1  芍药苷回收率结果,略, 表2  样品中芍药苷含量测定结果,略, 3  讨论     制剂中芍药苷测定条件～曾用《中国药典》?部赤芍药材中芍药苷测定方法～发现芍药苷色谱峰分离度不佳～后选用甲醇-水(17?38)为流动相～分离效果理想,1～2,。     芍药苷测定供试品溶液的制备中～提取方法曾比较了温浸法～热回流方法和超声处理法～结果采用超声处理样品的效果较好。对提取溶媒进行了考察～结果以50%甲醇的含量最高～超声处理 ,功率250 W～频率50 kHz,30 min,可基本提取完全。 【参考文献】   ,1, 国家药典委员会～中国药典～?部,S,.北京:化学工业出版社～2005:561. ,2, 魏承志.高效液相色谱法测定胃力康颗粒中芍药苷含量,J,.中成药,2003,25(2):165.