凝聚胺介质交叉配血试验操作规程

凝聚胺介质交叉配血试验操作规程 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 凝聚胺介质交叉配血试验操作规程(SOP文件) 1目的 作为介质辅助用于完全抗体及不完全抗体的临床筛选检测及辅助用于临床交叉配血实验。 2检验原理 红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位，Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。 凝聚胺技术首先利用低离子溶液(LIM)，降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清(血浆)中的抗体结合。 其后，加入凝聚胺(Polybrene)溶液，它是一种高价阳离子多聚物、肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液(Resuspending),Resuspending具有中和凝聚胺(Polybrene)阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性;但如果红细胞被相应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。 3储存条件及有效期 1 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 未开封试剂应贮存于2?~25?、相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体的室内;已开封试剂应贮存于相对湿度不大于80%，无腐蚀性气体和通风良好的室温环境，试剂用后应及时拧紧瓶盖保存;未开封试剂的有效期为二年，在有效期内的已开封试剂应在开封后的6个月内使用完。 4样本要求 4.1新鲜血清，含EDTA抗凝血浆、3%~5%的红细胞悬液。 4.2不能使用溶血标本及含枸橼酸钠、肝素抗凝血浆标本。 5检验方法 辅助交叉配血试验 5.1取试管二支，标主次侧，主侧管加病人血清(血浆)2滴，加供血者3%~5%红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1滴，次侧管反之。 5.2各加LIM0.65ml,混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。 5.3用离心机3400转/min(相当于1000g离心力)离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。 5.4轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须要重做。 5.5最后加入Resuspending 2滴，轻轻摇动试管混合并同时观察结果。如果在60秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合;如凝集不散开，则为 2 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。 6注意事项 6.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。 6.2若病人血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须多加4~6滴Polybrene溶液以中和肝素。 6.3本试剂盒的操作方法也适用于抗体鉴定。 6.4若试剂使用前为低温贮存，请回复室温再行操作。 6.5加做辅助性抗人球蛋白试验，目的是增加检测抗-K的敏感性。 6.6在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置入37?水浴中，轻轻摇动试管混合，并在60秒内观察结果。 6.7红细胞抗原检测步骤同抗体筛检试验，其检测血清用已知标准血清。 6.8用户可使用IgG抗D抗体(效价?64)与RhD阳性红细胞反应做阳性对照实验，测试本试剂的有效性。 3 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK ABO血型定型操作规程(SOP文件) 1目的 用于鉴定人ABO血型 2检验原理 本品系用产生抗A或抗B血型抗体的杂交瘤细胞培养上清液(或在上清液中加入少量同型腹水)配制而成，采用凝集试验原理，专供鉴定人ABO血型用。 3样本要求 本试剂适用于全血或10,、5,红细胞悬液。 4检验方法 平板法(玻片法):本品与受检者全血或10,红细胞生理氯化钠悬液按1:1搅匀，不必再稀释，按照有无凝集判定结果 5结果判断 血型 抗A试剂 抗B试剂 A + - B - + O - - AB + + 注:“+”有凝集反应 ，“-”无凝集反应 6检验结果的解释 4 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 将已知的抗A、抗B血型定型试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A血型定型试剂发生凝集者即为A型血型，与抗B血型定型试剂发生凝集者即为B型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均发生凝集者即为AB型血型，与抗A、抗B血型定型试剂均不发生凝集者即为O型血型。 7注意事项 7.1对含有较多自身冷凝集的受检者，在鉴定血型时往往被误认为AB血型，遇到此种情况，需用37?生理氯化钠溶液洗涤受检者细胞2-3次，以去除吸附在红细胞上的凝集素，然后再鉴定血型。 7.2在做配型试验时，如发现有不配合现象，则取受检者血清，用已知A血型或B血型细胞进行反定型试验，以核实原鉴定的血型是否正确。 7.3用立即试管法不能测出亚型(如Ax)，需延长作用时间。 7.4本品如出现浑浊或变色则不能使用，若开瓶使用时间较长后，最好用已知ABO血型红细胞检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染，变质失效，而造成鉴定错误。 7.5在有效期内使用。 5 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK ABO血型反定型操作规程(SOP文件) 1目的 用于ABO血型的反定型检测，该产品不用于血源筛查。 2检验原理 本品系采用三人份同型混合的A1型、B型和O型合格人红细胞经洗涤后悬浮于红细胞保存液中配制而成。采用凝集试验原理，用已知的A1，B，O型红细胞测定被检者血清/血浆中有无相应的抗A或抗B抗体(反定型试验)，结合正定型结果判定ABO血型。 3检验方法 试管法 3.1取被检者血清/血浆各50ul分别加入3支标记好的试管中; 3.2分别各加50ulA1、B、O试剂红细胞; 3.3摇动试管，混匀。于900g离心15s，或室温静止1h; 3.4首先检查是否溶血，(溶血可能是阳性结果，或是细菌污染。)轻轻摇动悬浮红细胞。 3.5观察凝集情况，并立即记录结果。必要时可借助显微镜观测。 4检验结果的解释 ABO血型正反定型反应格局表 6 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 正定型 反定型 血型 抗A试剂 抗B试剂 A1细胞 B细胞 O细胞 + - - + - A - + + - - B - - + + - O + + - - - AB 注:“+”有凝集反应，“-”无凝集反应 5注意事项 5.1如果在反定型试验中，受检者的血清/血浆与O血型红细胞试剂产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。如果自身对照为阳性，表明是冷凝集素导致。如果自身对照为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外的其他血型系统的抗体干扰定型。请按照相关的试验方法解决上述定型问。 5.2本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞自发凝集，出现菌落或溶血，则不能使用。若开瓶使用时间较长后，最好用注册上市的抗A、抗B血型定型试剂检查结果是否与已知血型相符，以防制品污染、变质失效、而造成检定错误。 5.3为了便于鉴别，A1血型红细胞试剂标签为蓝色，B血型红细胞试剂标签为黄色，O血型红细胞试剂标签为红色。 7 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 乙型肝炎病毒表面抗原操作规程(SOP文件) 1.目的 用于血液的筛查和临床乙型肝炎病毒感染的辅助诊断。 2.检验原理 本品系用乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)包被的微孔板和酶标记抗-HBs及其他试剂制成，应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清和血浆中的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg) 3.适用仪器 微量移液器;37?恒温水浴箱;振荡器;洗板机或洗瓶;计时器;酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 4.样本要求 4.1样本采集不需要特殊准备，按照正常的采血技术收集血液，全血样本最好先放置37?处理2小时，再将血样本充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清(血浆)不含有或极少含有血细胞。如果为抗凝血样本，应将血样本充分离心后，最好再放置室温2小时以上。 4.2样本中含有叠氮钠会影响试验的结果，高度溶血的样本、没完全收缩的血清样本或有微生物污染的样本可能会引起错误的结果。 4.3新鲜的样本在2~8?无菌条件下可保存一周，新鲜样本可长期贮存在-20?或以下，避免反复冻融。 8 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 5.检验方法 5.1实验准备:从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将洗涤液进行1:40倍稀释。 5.2设阳性对照2孔，阴性对照3孔，空白对照1孔。 5.3加样:在阳性对照、阴性对照孔内分别加入阳性对照、阴性对照50ul，其余每孔加待测血清或血浆50ul。盖上封孔胶片，置37?水浴孵育60分钟。 5.4洗涤:弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。 5.5加酶结合物:空白孔除外，每孔各加酶结合物50ul。盖上封孔胶片，置37?水浴孵育30分钟。 5.6洗涤:弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。 5.7加底物液:每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混匀，盖上封孔胶片，置37?条件下避光显色30分钟后，加终止液50ul，混匀，终止反应。 6.参考值(参考范围) 终止后尽快测定，波长450nm，先用空白孔校零，测OD值。如果选用双波长测定，不必设置空白对照空。按下列计算: COV=阴性对照平均OD值×2.1倍 阴性对照平均OD值低于或等于0.05，按0.05计算;高 9 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 于0.05时，按照实际OD值计算。 7.检验结果的解释 样品OD值S/COV?1时，待测样本HBsAg为阳性; 样品OD值S/COV,1时，待测样本HBsAg为阴性。 8.注意事项 8.1本品仅用于体外诊断，仅限检测人体血清或血浆;检测结果作为诊断指标之一。 8.2使用时，从冷藏环境取出试剂盒，置室温平衡30分钟后，方可进行测试。剩余试剂应及时封存于冰箱内保存，备用。 8.3结果判定需在反应终止后10分钟内完成。 8.4封孔胶片不得重复使用。 8.5在有效期内，微孔板密封袋如有漏气现象，不影响试验结果。试剂盒在有效期内使用，不同批号不得混用。 8.6阳性对照应呈阳性，否则全部试验无效。 8.7确保样本加样量的准确，如果加样不准确可能会导致错误的试验结果。 8.8使用微量移液器加样时，每次应更换吸头吸取样本。 8.9在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。 8.10准确控制反应温度和反应时间。 8.11洗板:1用洗板机洗板时，洗板机的加液量应注意控制，既避免洗液过量而溢出，又能充满反应微孔，并经常检 10 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 查加液头是否堵塞;2洗板机最好每次使用前、后冲洗干净，防止管路堵塞或腐蚀;3洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。 8.12本试剂盒及临床样本均应视为传染性物质或潜在传染性物质，请按相关实验室工作规范执行和处理。 9.参考文献 《中国药典》2010年版三部; 《体外诊断试剂说明书编写指导原则》(国食药监械【2007】240号) 11 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 梅毒螺旋抗体操作规程(SOP文件) 1.目的 本试剂盒定性检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。适用于血液的筛查及临床梅毒螺旋体感染的辅助诊断。 2.检验原理 本试剂盒采用双抗原夹心法酶联免疫吸附试验原理。在微孔条上预包被梅毒螺旋抗体的基因重组抗原，配以酶标记抗原及TMB显色剂等其他试剂，检测人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体。 3.适用仪器 加样器、温箱、洗板机、含波长450nm的酶标仪。 4.样本要求 4.1本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 4.2不能检测含悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。 4.3样品中应无微生物，可在2~8?储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 4.4使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 5.检验方法 5.1配液:将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 12 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 5.2编号:将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔。(用双波长检测，可不设空白对照孔)。 5.3加样:分别在相应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100ul。 5.4温育:用封板膜封板后，置37?1?温育60?2分钟。 5.5洗板:小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 5.6加酶:酶孔加入酶标试剂100ul，空白孔除外。 5.7温育:用封板膜封板后，置37?1?温育30?1分钟。 5.8洗板:操作同步骤5.5 5.9显色:没孔加入显色剂A.B液各50ul，轻轻震荡混匀，37?1?避光显色30?1分钟。 6.参考值 临界值(CUTOFF)计算临界值=阴性对照孔A均值NC+0.18. 7.检验结果的解释 7.1阴性对照孔A值?0.10，阳性对照孔A值?0.80.否则实验无效。 7.2若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复实验。 7.3阴性判定:样品A值,临界值(CUTOFF) 者为TP阴性。 7.4阳性判定:样品A值?临界值(CUTOFF)者为TP阳性(注 13 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 意:初试阳性应重新取样双孔复试)。 8.注意事项 8.1本品仅用于体外诊断，操作应按说明书严格进行。封板膜不能重复使用，不同批号酶标板。酶标试剂和阴性、阳性对照不可混用，不能与其他厂家试剂混用。 8.2避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒剂(如84消毒剂)的环境下操作。 8.3使用前请将试剂平衡至室温(平衡30分钟以上)，实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即放回2~8?。未用完的微孔板条与干燥剂仪器用自封袋密封2~8?保存。过期试剂请勿使用。 8.4加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组分时，应更换加样器吸头和加样槽，以防出现交叉污染。 8.5洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30~60秒侵泡时间。在洗板结束后，必须立即进行下一步，不可使酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 8.6结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指印或划痕都可能影响板孔的读值。 8.7所用样品、废液和废弃物都应按传染物处理。终止液为 14 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 硫酸，使用时必须注意安全。 8.8显色时必须加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。 8.9由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除TP感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。 15 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 甲型肝炎病毒IgM抗体操作规程 (SOP文件) 1.目的 用本试剂盒检测人血清或血浆中的抗-HAV IgM,用于甲型肝炎的早期诊断。 2.检验原理 本品系用抗人IgM(u链)包被的微孔板、甲型肝炎病毒(HAV)抗原和酶标记抗甲型肝炎病毒(抗-HAV)及其他试剂制成，应用捕获法原理检测人血清或血浆中的抗-HAV IgM，用于甲型肝炎的早期诊断。 3.适用仪器 微量移液器;37?恒温水浴箱;振荡器;洗板机或洗瓶;计时器;酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 4.样本要求 4.1样本采集不需要特殊准备，按照正常的采血技术收集血液，全血样本最好先放置37?处理2小时，再将血样本充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清(血浆)不含有或极少含有血细胞。如果为抗凝血样本，应将血样本充分离心后，最好再放置室温2小时以上。 4.2样本中含有叠氮钠会影响试验的结果，高度溶血的样本、没完全收缩的血清样本或有微生物污染的样本可能会引起错误的结果。 16 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 4.3新鲜的样本在2~8?无菌条件下可保存一周，新鲜样本可长期贮存在-20?或以下，避免反复冻融。 5.检验方法 二步法 5.1实验准备:从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将洗涤液进行1:40倍稀释。 5.2设阳性对照2孔，阴性对照3孔，空白对照1孔。 5.3加样:在阳性对照、阴性对照孔内分别加入阳性对照、阴性对照50ul，其余每孔加待测血清或血浆50ul(或将待测血清或血浆用生理盐水1:1000稀释后，加入到反应孔内)，盖上封孔胶片，置37?水浴孵育30分钟。 5.4洗涤:弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。 5.5加酶结合物:取出酶结合物，充分混匀，每孔加50ul(空白孔除外)，盖上封孔胶片，置37?水浴孵育30分钟。 5.6洗板:同5.4 5.7加底物液:每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混匀，盖上封孔胶片，置37?条件下避光显色15分钟后，加终止液50ul，混匀，终止反应。 6.参考值(参考范围) 终止后尽快测定，波长450nm，空白孔调零，测OD值。如果选用双波长测定，不必设置空白对照空。按下列公式计算: 17 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK COV=阴性对照平均OD值×2.1倍 样品OD值S/COV?1时为阳性 样品OD值S/COV,1时为阴性 注:阴性对照平均OD值低于或等于0.05，按0.05计算;高于0.05时，按照实际OD值计算。 7.检验结果的解释 7.1阴性结果表明样本中不含有抗-HAV IgM或抗-HAV IgM含量低于试剂盒的检测范围。 7.2阳性结果表明样本中含有抗-HAV IgM或产生非特异反应。 7.3样本的检验结果与临床表现不符或存在疑问时应采用适当的方法进行确认。 7.4对于待检血清或血浆直接进行50ul加样，结果判为阳性的标本，应对其用生理盐水1:1000稀释后重复实验并判定结果。 8.注意事项 8.1本品仅用于体外诊断，仅限检测人体血清或血浆;检测结果作为诊断指标之一。 8.2使用时，从冷藏环境取出试剂盒，置室温平衡30分钟后，方可进行测试。剩余试剂应及时封存于冰箱内保存，备用。 8.3结果判定需在反应终止后10分钟内完成。 18 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 8.4封孔胶片不得重复使用。 8.5在有效期内，微孔板密封袋如有漏气现象，不影响试验结果。 8.6试剂盒在有效期内使用，不同批号不得混用。 8.7确保样本加样量的准确，如果加样不准确可能会导致错误的试验结果。 8.8使用微量移液器加样时，每次应更换吸头吸取样本;如果采用滴瓶滴加时，请将滴瓶中液体摇匀，并弃去2滴后垂直均速滴加，要避免组分中的液体触到或溅到微孔边缘上，特别是酶结合物。 8.9在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。 8.10准确控制反应温度和反应时间。 8.11洗板:1用洗板机洗板时，洗板机的加液量应注意控制，既避免洗液过量而溢出，又能充满反应微孔，并经常检查加液头是否堵塞;2洗板机最好每次使用前、后冲洗干净，防止管路堵塞或腐蚀;3洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。 8.12本试剂盒及临床样本均应视为传染性物质或潜在传染性物质，请按相关实验室工作规范执行和处理。 9.参考文献 《中国生物制品规程》2000年版 19 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 丙型肝炎病毒抗体操作规程(SOP文件) 1.目的 用于血液的筛查和临床丙型肝炎病毒感染的辅助诊断 2.检验原理 本品系用丙型肝炎病毒(HCV)抗原包被的微孔板和酶标记抗人IgG及其他试剂制成，应用简接酶联免疫法原理检测人血清或血浆样品中的HCV抗体。 3.适用仪器 微量移液器;37?恒温水浴箱;振荡器;洗板机或洗瓶;计时器;酶标仪，检测波长450nm，参考波长630nm。 4.样本要求 4.1样本采集不需要特殊准备，按照正常的采血技术收集血液，全血样本最好先放置37?处理2小时，再将血样本充分离心，3000转/分钟离心6分钟以上，使血清(血浆)不含有或极少含有血细胞。如果为抗凝血样本，应将血样本充分离心后，最好再放置室温2小时以上。 4.2样本中含有叠氮钠会影响试验的结果，高度溶血的样本、没完全收缩的血清样本或有微生物污染的样本可能会引起错误的结果。 4.3新鲜的样本在2~8?无菌条件下可保存一周，新鲜样本可长期贮存在-20?或以下，避免反复冻融。 5.检验方法 20 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 5.1实验准备:从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30分钟，同时将洗涤液进行1:40倍稀释。 5.2设阳性对照2孔，阴性对照3孔，不加样品稀释液，直接加入阳性对照。阴性对照100 ul，另设空白对照1孔(只加底物液及终止液)。 5.3加样:在其余每孔加先加样品稀释液100ul ,再加待检血清或血浆10ul(空白孔除外)，充分混匀，盖上封孔胶片，置37?水浴孵育60分钟。 5.4洗涤:弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。 5.5加酶结合物:空白孔除外，每孔各加酶结合物100ul。盖上封孔胶片，置37?水浴孵育30分钟。 5.6洗涤:弃去孔内液体，用稀释后的洗涤液连续洗涤5次后，拍干孔内液体。 5.7加底物液:每孔先加底物液A50ul，再加底物液B50ul,混匀，盖上封孔胶片，置37?条件下避光显色30分钟后，加终止液50ul，混匀，终止反应。 6.参考值 终止后尽快测定，波长450nm，空白孔调零，测OD值。如果选用双波长测定，不必设置空白对照空。按下列公式计算: COV=阴性对照平均OD值×2.1倍 阴性对照平均OD值低于或等于0.1，按0.1计算;高于0.1， 21 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 按照实际OD值计算。 7结果判断 样品OD值S/COV?1时，待测样本为阳性; 样品OD值S/COV,1时，待测样本为阴性。 8.注意事项 8.1本品仅用于体外诊断，仅限检测人体血清或血浆;检测结果作为诊断指标之一。 8.2使用时，从冷藏环境取出试剂盒，置室温平衡30分钟后，方可进行测试。剩余试剂应及时封存于冰箱内保存，备用。 8.3结果判定需在反应终止后10分钟内完成。 8.4封孔胶片不得重复使用。 8.5在有效期内，微孔板密封袋如有漏气现象，不影响试验结果。 8.6试剂盒在有效期内使用，不同批号不得混用。 8.7确保样本加样量的准确，如果加样不准确可能会导致错误的试验结果。 8.8使用微量移液器加样时，每次应更换吸头吸取样本。 8.9在操作过程中应尽量避免反应微孔中产生气泡。 8.10准确控制反应温度和反应时间。 8.11洗板:1用洗板机洗板时，洗板机的加液量应注意控制，既避免洗液过量而溢出，又能充满反应微孔，并经常检 22 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 查加液头是否堵塞;2洗板机最好每次使用前、后冲洗干净，防止管路堵塞或腐蚀;3洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。 8.12本试剂盒及临床样本均应视为传染性物质或潜在传染性物质，请按相关实验室工作规范执行和处理。 9.参考文献 《中国药典》2010年版三部 《体外诊断试剂说明书编写指导原则》(国食药监械【2007】240号) 23 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK HIV抗体初筛实验室操作规程(SOP文件) 1.检验目的 检验人体血清中是否感染HIV病毒 2.检验原理 本产品系用纯化基因工程人类免疫缺陷病毒“1”型和“2”(HIV-1和HIV-2)抗原包被的微孔板和酶联记的HIV-1和HIV-2抗原及其它试剂组成试剂盒，应用双原夹心法原理检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病毒抗体，用于献血员及高危人群中人类免疫缺陷病毒的筛查。 3.检验条件 3.1操作人员对本实验应心中有数，严格执行操作规程。 3.2洗板机，酶标仪，加样器必须定期校正。试剂按保存。 4.标本采集 4.1门诊病人由检验科人员无菌抽取静脉血2ml分离血清备用。 4.2住院病人由护士采血送检验科。 4.3要避免溶血。 5.设备和试剂 5.1设备全自动ZDMX型酶标洗板机，MR-96A酶标仪。 5.2试剂 珠海丽珠试剂股份有限公司 生产的抗HIV诊断试剂盒。 24 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 6.操作方法 6.1实验准备 从冷环境中取出试剂盒，室温平衡半小时，同时将浓缩洗液用蒸馏水作1:20稀释备用。 6.2编号 每板应设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照2孔，质控1孔。 6.3加样 每孔加入50ul样品稀释液，并分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳对照、质控品50ul。空白孔内只加稀释液。 6.4温育 用封板膜封板后置37?温育60分钟。 6.5加酶 除空白对照孔外，每孔加50ul酶标记物，轻轻震动混匀，用封板膜将板孔封好，置37?温育30分钟。 6.6洗板 小心将封板膜揭掉，选择6次的程序洗板，最后排干。 6.7显色 每孔先加显色剂A再加显色剂B各50ul，轻轻混匀后置37?避光显色30分钟。 6.8测定 每孔加终止液50ul，轻轻混匀，用酶标仪波长450nm及620nm测定各孔OD值。 7.参考值 7.1试剂空白标准:试剂空白A值应,0.08(空白校零前) 7.2阴性对照标准:阴性对照A值应?0.12 7.3阳性对照标准:抗-HIV-1阳性对照A值应?0.8 25 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 抗-HIV-2阳性对照A值应?0.8 7.4临界值(C.O.)计算: 临界值(C.O.)=阴性对照平均A值+0.15 备注:阴性对照平均A值小于0.08按0.08计算，大于0.08按试剂值计算 8.检验结果的解释 8.1 样品A值?临界值(C.O.)为HIV抗体阳性 样品A值,临界值(C.O.)为HIV抗体阴性 备注:初次检验阳性者应重新取样进行双孔复试，如果复试中任何一孔为阳性则样品视为HIV抗体阳性，对复试结果为阳性的样品请按《全国艾滋病检测技术规范》处理。 8.2可能对检验结果产生影响的因素: 1.不充分的洗涤，如侵泡时间不够或洗液量不足。 2.洗板机针孔堵塞或位置调节不当，孔底洗液残留量过多。 3.加样量不准。 4.在检验过程中应避免交叉污染及酶结合物和其他试剂的污染。 5.没有使用正确的波长读数。 6.测试过程中应避免反应孔的干燥。 7.血清或血浆样品如有溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，可能会对检验产生影响。 26 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 9.质量控制 9.1每次做室内质控，同标本一起做，发现问题及时处理。 9.2每年两次参加省临床检验中心免疫质评，以保证检验质量。 10.注意事项 10.1本试剂的使用单位必须是经当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。 10.2检测必须符合HIV试验室管理规范和生物安全守则的规定，严格防止交叉污染。操作时必须戴手套，穿工作服，严格健全和执行消毒隔离，所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理，终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。 10.3未用完的微孔条用自封袋和干燥剂密封保存。 10.4加液时必须用加液器加，并经常校队加液器的准确性。 10.5洗涤时各孔均须加满洗液，防止空口内有游离酶不能洗净。使用洗板机洗涤应设定30-60秒浸泡时间。 10.6 HIV抗体检测结果的判定必须以酶标仪读数为准。 10.7操作应按说明书严格进行，封板膜为一次性用品，不能重复使用。 11.标本处理 27 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK 检验后标本室温保存至次日8点由卫生员按传染源处理。 12.报告时间 检测当日报告结果，住院病人报告单通过LIS系统当天直接打印报告单，门诊病人自取打印报告单。 下面是赠送的经典语录和搞笑语录，不需要的朋友可以下载后不急删除～～～谢谢～～ 28 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK , 【感人的话】 要学会感恩、同情、宽容、忍耐、积极与真诚。希望是心灵的一种 支持力量.逆境的回馈，使生命将更加精彩而富足. , 【感人的话】 每个人的好运跟坏运都是分配好的，虽然我的好运没有别人多，所 以只要是一点点好事，我就非常感恩了。 , 【祝福的话】 这里有一本你当年用过的笔记，它有点儿泛黄了，书页里夹着的 话也早已没了香气，却还是谢谢你把它借给了我。今天的我们已经分开，却依然是朋 友。还是要跟以前一样，我听着你的述说，看着你笑，看着你难过委屈去安慰你。我 会把祝福写在这本笔记里，在那多枯黄的花的旁边，我会写下我的祝福:祝福你过得 好～祝福你过得比我好～然后，将它寄给你。不要哭泣，你。 , 【表白的话】 爱你是一个念头，爱你是一种冲动，爱你是一种宿命，只属于我 的宿命。爱你是一段旅程，爱你是一场幸福的长跑，爱你是一路沐浴阳光，爱你是一 径的花香。爱你，是睡觉呼吸一般的自然～请，给我你的爱。 , 【有哲理的话】 世上有三种人:一是良心被狗吃了的人，二是良心没被狗吃的 人，三是良心连狗都不吃的人. , 【激励人的话】 如果你看到面前的阴影，别怕，那是因为你的背后有阳光。 , 【感人的话】 一身白衣为你洗尽铅华，白衣白发白胜雪，捧一卷古墨，盈袭暗 香，我踏着平平仄仄的长长短短，款款步入风情万种的宋词里。溪边桃红青染，流水 潺潺，柳丝随风絮，我在桃花下写着红笺小字，一抹嫣然回眸，惊落了桃花，也惊落 了你的心。佛说千年一轮回，今生，你在哪里, , 【有哲理的话】 母爱是一滴甘露，亲吻干涸的泥土，它用细雨的温情，用钻石的 坚毅，期待着闪着碎光的泥土的肥沃;母爱不是人生中的一个凝固点，而是一条流动 的河，这条河造就了我们生命中美丽的情感之景。 , 【表白的话】 我深深地恳求你;不要把我逐出你的爱门之外，我一分一秒也不能 缺少你的爱。只有赢得你的爱，我的生命才有光彩。 , 【表白的话】 爱你，却要无欲无求，好难～爱你，却要偷偷摸摸，好累～爱你， 却让自己心碎，好惨～但竟然心甘情愿，好傻～但是我能肯定的是:我是真的很爱你～ , 【表白的话】 我扬一把散沙粒粒想念漫天纷飞带给我对你的祝福，我洒下一瓢涟 水滴滴飘洋流到你的心海，爱你，今生无悔，牵了你的情，爱了你的人，我会努力呵 护你，一生一世～ , 【表白的话】 你的热情，温暖了我冰冻的心;你的大胆，鼓起了我爱的热忱;你 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到了，心悟到了，相信属于你的风景就在下一个拐弯处。 , 【有哲理的话】 有些人成就不大，不在于智力或能力不够，而在于没有克服自己 心理上的弱点和谬见，没有充分发挥自己既有的潜力和才能。只有不断向自己挑战， 向生活挑战，才能取得更大成功。 , 【有哲理的话】 面对别人的反对意见，如果你针锋相对地进行争执和批驳，对方 很难从内心真正接受，在表达方式上委婉一些，效果就好多了。 30 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK , 【有哲理的话】 当我们放眼这个世界的时候，如果以自我为中心，很可能会以为 自己了不起，可一旦我们把心歇下来，用赤子之心来观察，就会发现我们是多么渺小。 我们什么时候都能看清自己不如人的地方，那就是对生命有真正信心的时候。 , 【有哲理的话】 胸有平常心，幸福自然来。人的心态如同琴上的弦，太紧则易断， 太松则无音，只有松紧适度，才能弹出美妙之音。保持一颗平常心，才是人生的真谛。 怀一颗平常心，看淡得失，超越成败，不为物欲所迷，不被烦恼所扰，明心见性，随 缘自适。平常心，是一种人生态度，也是一种生活智慧。 , 【有哲理的话】 绝大多数人都喜欢嘲笑别人，而不愿意被别人嘲笑。在别人处于 尴尬境遇时，你如果能通过自己出丑来减少他的难堪，他一定对你非常感激。 , 【有哲理的话】 对于胸怀大志的有志之士和勤奋努力的人来说，障碍是不会起什 么作用的。他们会说:不会再有什么困难能拦得住我了。只要有百折不挠的信念，就 会战胜许多强大的阻力。 , 【有哲理的话】 成功地推销自己是迈向成功的第一步。在推销自己的过程中，多 动脑筋，设计一些小花样，就容易引起别人的兴趣和关注。 搞笑语录 , 一次，同事几个去美国，到超市买东西，用济南话讨论，有个美国人过来用标准 的济南话说:―你们是济南的,～‖暴汗，原来这老外是以前战争时期留在中国的美国 人后代，同事问他:―那你英文怎么样啊,‖老外一拍大腿道:―英语太他妈难学了～～‖ 哈哈，有木有笑趴啊。 , 公司加班到半夜，所有人都眼皮打架，一姑娘哀叹:―我现在真想变成一个?因‘ 字。‖众问其故，姑娘说:―就是一个人四肢平摊躺在大床上。‖话音刚落，旁边一男同 事嘟囔:―困。‖ , 一先生感冒去医院挂吊针，护士小姐很麻利的给这位先生插上针挂好盐水，一个 多小时过去了，盐水瓶的水打完了，护士过来马上又换上一瓶。这先生不解，问护士 小姐说:―小姐，处方单上不是只开了一瓶吗,‖护士小姐指着打完盐水的空瓶盖说，―先 生，您运气真好，这瓶中奖了，再来一瓶～‖ , 一退休老头，闲来无事就教鹦鹉说话，每天早上必教:―早上好～‖可惜～几个月 后，鹦鹉仍不开口。一日，老头心情不佳，未教。只听鹦鹉大叫:―老头，今天牛了～ 连好也不问了啊～‖ 31 宁城县蒙医中医医院输血科 NCXMYZYYYSXK , 白雪公主逃出王宫，来到森林，看到一间小木屋，里面排列着七张小小的床。白 雪公主就躺下睡着了。傍晚七个小人回来了，白雪公主说:―你们就是我命中的七个小 矮人吧。‖ 七个人面面相觑，然后说:―你走错地方了，我们是金刚葫芦娃。‖ , 爷孙三人去钓鱼，爷爷拿着鱼杆发呆，孙子看到后对爸爸说:―瞧瞧，你爹在那 发呆，跟傻B 似的。‖爸爸打了儿子一耳光生气的喊道:―你爹才傻B 呢～‖ , 作业做了很久，顺手打开收音机，一个温柔的声音传出:―如果肤色粉红，脸上 的绒毛细嫩柔软，那么说明很健康……‖听到这里，忍不住摸了自己的脸，对镜顾盼， 再笑一笑，样子健康可爱。这时，又听播音员说道:―好，听众朋友，这次我们的《养 猪知识讲座》就到这里。‖ , 话说上技校时我们班为机电八班。某日，学校组织拔河比赛。我们班对战二班。 二百女生加时喊:―机二，加油……机二，加油……‖我们班女生也学着人家喊:―机八， 加油……机八，加油……‖我滴个神～ , 出差，刚出车站就来一大婶:―小伙子，住旅馆呀,‖我说:―不用。‖大婶马上换 成暧昧的语气:―有小姑娘哟，很漂亮的。‖我汗，说:―不要小姑娘。‖大婶立刻改口: ―老姑娘，老姑娘也有，便宜一点。‖再汗，说:―我不要姑娘。‖大婶沉默了下，小声 说:―那个，小伙子也是有的～‖ , 一哥们儿隔壁新搬来个老外，一天晚上老外敲门求助，说:―我的电视坏了，不 能换台。‖这哥们儿低头看了眼表，很镇定的说:―过了七点半就好了‖ , 有个懒人，懒得出奇。妻子要切面条，叫他到邻家借个面板。他说:―不用借了， 就在我背上切吧～‖妻子在他背上切完面条，问他:―痛不痛,‖他说:―痛，我也懒得 吱声。‖ , 一只青蛙给牧师打电话，问自己的命运。牧师说:―明年，有一个年轻的姑娘会 来了解你。‖青蛙高兴的蹦了起来:―哦，真的吗,是在王子的婚礼上吗,‖牧师说:―不， 是在她明年的生物课上。‖ , 几个人在高尔夫更衣室，一手机响很久，一男人按了免提键。女:―亲爱的你在 俱乐部吗,‖男:―在。‖女:―我看到一辆宝马，才不到两百万。‖男人:―买。‖女:―还 有那个楼盘又放盘了， 6万一平。‖男:―买。‖女:―好爱你。‖男:―也爱你。‖旁边的 男人们敬佩得目瞪口呆。男人挂了电话，问:―这是谁的手机,‖ , 深夜，老公未归。女儿心急给妈打电话:―妈～他还没回来，一定有别的女人了～‖ 妈妈轻声安慰:―傻孩子，乖，别净往坏处想，兴许是出车祸了～‖ , 一男子在闹市骑摩托撞昏了一个陌生的老汉～男子惊吓得不知所措～围观群众越 来越多～突然，该男抱住老汉，声泪俱下的喊道:―爹，你等着我，我这就去给你找医 生～‖说后，就跑掉了。老汉挣扎着愤怒的喊道:―给老子回来～‖众人纷纷感慨:―这 儿子当的真孝顺～‖ 32