阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响

阿司匹林对血小板凝集和对血栓的影响 【研究背景】 全球一半人死于血栓:近年来，脑血栓、心肌梗死、周围动脉血栓、深静脉血栓、肺栓塞等一系列血栓栓塞疾病严重威胁着人类健康。据统计，其导致的死亡已达全球总死亡人数的51%。因此，血栓，这个血管中的幽灵，多专科医生共同的对手，已成为人类健康最大的敌人。在活体的心脏和血管内，血液发生凝固或血液中某些有形成分凝集形成固体质块的过程，称为血栓形成，所形成的固体质块称为血栓。当心血管内皮细胞损伤后，内皮下胶原组织暴露，在炎症细胞产生的趋化、粘附及细胞因子作用下，血小板粘附在破裂处，粘附后血小板活化，释放血栓素A2(TXA2)、二磷酸腺昔(ADP)、凝血酶等，使血小板板聚集，并和凝血瀑布终产物纤维蛋白交联，最终导致血栓形成。在血栓形成过程中血小板起关键作用，TXA2是活化血小板的重要因素，阿司匹林(Aspirin，Asp)是环氧化酶(COX)抑制剂，主要通过减少TXA2的合成发挥抗血小板作用，从而发挥其抗血栓作用。 阿司匹林减少TXA2的合成过程是一个涉及多种酶的级联反应。阿司匹林通过它的乙酸基与含有600个氨基酸的酶活性中心发生不可逆结合(530位的丝氨酸残基),使血小板的环氧化酶(即PG合成酶)乙酰化，从而抑制了环内过氧化物(前列腺素类化合物)的形成，其中第一步就是抑制花生四烯酸转化为前列腺素H2(PGH2)。PGH2是不稳定的中间产物(它至少可产生5种具有不同生物活性的前列腺素类物质其中包括TXA2和前列环素(PGI2)。 【实验目的】 研究阿司匹林抗血栓作用及对血小板凝集的抑制作用，从而探讨其抗血栓机制。 【材料与方法】 ,140只健康雄性小鼠，体重18,20 g，Asp结晶(临用前以50mmol?L NaCO溶解后再32 ,1用0.1mol?L HCl 调节 pH 7.0)，花生四烯酸(arachidonie acid，AA) 实验方法: 1、Asp对血栓形成的影响:小鼠20只，随机分成对照、Asp二组，每组10只。Asp以10 ,1,1,1mg?kg?d连续灌胃给药7天，对照组等体积灌胃。第7天灌胃后以 AA 80 mg?kg、 ,150 μL?(10g)静脉注射，立即观察小鼠的呼吸，活动状态并记录15分钟内小鼠死亡数。 2、Asp对AA 激活的血小板聚集的影响:小鼠20只，随机分四组，对照一组、Asp三组。 ,1均以2,戊巴比妥钠30 mg?kg腹腔注射麻醉动物，自颈动脉取血，血与2(7, EDTA 9: ,11比例混合抗凝，抗凝后迅速离心9分钟(900 r?min)得到富含血小板血浆(platelet ricb ,1plasma，PRP)。再离心10分钟(3 000 r?min)得到血小板团块。用含1,BSA、1.4 ,1mmol?LEDTA的PBS洗涤血小板3次，最后悬浮于PBS中，计数并调整血小板数为1 8,1×10 Pt?mL。在已吸取过PRP的抗凝血中，加入与PRP等体积的生理盐水以恢复血液的原体积，然后再加入1/10体积的6,右旋糖酐，于37? 垂直静置40分钟以沉淀红细胞成分。取上层白细胞，加入1mL双蒸水溶血30秒，使混杂的红细胞破膜，再加入2倍PBS ,11 mL，混匀，使白细胞恢复等渗状态，离心10分钟(800 r?min)，然后用PBS洗三次， 6,1最后悬浮于Hank's溶液中，将白细胞计数至4×10cell?mL。行玫瑰花结实验，取血小 ,1板悬液及PBS各50μL，然后加入终浓度为1mmol?L的AA，于37?振荡10分钟，加 ,1,1,1μmol?L、60μmol?L、30μmol?L)，37?振荡30分钟，入不同浓度的药物(120 随后加人100μL白细胞悬液，并立即于4? 振荡、混匀30分钟，取出后滴人少许到血球计数板上随机计数100个白细胞。其周围粘附有2个或2个以上血小板者为玫瑰花结阳性。每个计数3次，取平均值，并计算玫瑰花结形成的百分率为血小板与白细胞的粘附率，抑制率按下式计算: 溶媒对照粘附百分率,给药粘附百分率抑制率(,),×100, 溶媒对照粘附百分率 并对结果采用t检验处理。 【预期结果】 Asp对血栓形成的影响:对照组的小鼠死亡率要明显高于Asp组。 Asp对AA 激活的血小板聚集的影响:对照组AA 激活的血小板粘附率明显高于Asp组，且不同浓度的Asp均可抑制这种粘附作用。 【结论】 阿司匹林有抗血小板凝集和抗血栓作用。