电针大鼠足三里调节下食管括约肌压力神经通路的探讨_19167

电针大鼠足三里调节下食管括约肌压力神经通路的探讨_19167 电针大鼠足三里调节下食管括约肌压力神经通路的探讨 [标签:来源] 作者:牟向东 谢鹏雁 王化虹 刘建湘 【摘要】 :目的 通过观察胆碱能M受体阻断剂阿托品和一氧化氮合成酶抑制剂N-硝基-L- 精氨酸甲酯(L-NAME)对电针足三里调节大鼠下食管括约肌压力(LESP)的影响,探讨电针调节 LESP的神经通路。方法 将48只Wistar大鼠随机分成对照组、电针组、阿托品组、阿托品 ，电针组、L-NAME组和L-NAME，电针组,应用三通道微细注水式测压管和荷兰UPS-2020型食 管测压系统测定大鼠LESP。结果 电针足三里可使LESP明显升高。阿托品可部分减弱电针足 三里增加LESP的作用,电针可以使胆碱能神经阻断大鼠降低的LESP恢复至正常水平。L-NAME 能够增加LESP,电针可以使LESP进一步增加。结论 电针足三里作用的传出途径可能是迷走 神经中的胆碱能神经纤维,但也有其它途径。 【关键词】 电针 足三里 下食管括约肌 阿托品 N-硝基-L-精氨酸甲酯 大鼠 Abstract:Objective To observe the effect of atropine and N-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) on the pressure of lower esophageal sphincter (LESP) regulated by electro-acupuncturing (EA) at Zusanli acupoint (He-Sea, st 36) of stomach meridian and explore the neural mechanism of EA. Methods Forty-eight rats were divided into six groups:control group, EA group, atropine group, atropine，EA group, L-NAME group and L-NAME，EA group. LESP was observed and recorded by using three-channel perfusion manometric measurement system. Results LESP increased significantly under or after EA at Zusanli acupoint. Cholinergic M receptor blocker partly abolished the influence of EA on LESP, but EA could restore the decreased pressure of cholinergic M receptor blocked rats. Nitric oxide synthase (NOS) inhibitor increased LESP, and EA could make it higher. Conclusions The main efferent pathway of regulating effect of EA at Zusanli acupoint on LESP is via the chlinergic nerve of vagus, and other mechanism possibly exits. Key words:electro-acupuncture;Zusanli acupoint;LESP;atropine;L-NAME;rat 下食管括约肌(lower esophageal sphincter,LES)功能障碍会导致胃食管反流病 (gastroesophageal reflux diseases, GERD)和贲门失弛缓症(achalasia of cardia)等疾病, 严重影响患者的生活质量,而电针(electro-acupuncture,EA)足三里对胃肠运动具有良性的双向调节作用[1-2]。因此,探讨电针对下食管括约肌压力(pressure of lower esophageal sphincter, LESP)的影响具有重要意义。但目前电针对LES的作用研究较少,并缺乏对LES神经控制影响方面的报道。本研究采用胆碱能M受体阻断剂阿托品(atropine)和一氧化氮合成酶(NOS)抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)腹腔注射的方法,观察电针大鼠双侧足三里时LESP的变化,探讨其神经机制。 1 材料与方法 1.1 动物及分组 选用健康成年Wistar大鼠48只,北京大学第一临床医院动物实验中心提供,体重400,450 g,?级动物室喂养2周,实验前空腹24 h。 大鼠随机分为6组:对照组、电针组、阿托品组、阿托品，电针组、L-NAME组和L-NAME，电针组,每组8只动物。各组均持续监测LESP,电针组在21,40 min予电针;阿托品组和阿托品，电针组在20 min时予阿托品2 mg/kg腹腔注射;L-NAME组和L-NAME，电针组予L-NAME 37.5 mg/kg腹腔注射;阿托品，电针组和L-NAME，电针组在41,60 min予电针。 1.2 仪器 LH202H型韩氏穴位神经刺激仪(北京);低顺应性毛细管连续水灌注测压系统UPS-2020(荷兰);三腔微细通道测压管(美国),外径1.7 mm,内径0.4 mm,各侧孔之间距离均为2.0 mm,水流速度为每侧孔0.2 mL/min。 1.3 药物 氨基甲酸乙酯(北京化学试剂公司);阿托品(天津金耀氨基酸有限公司);L-NAME(美国Sigma公司)。 1.4 穴位选择和电针参数 足三里穴选在大鼠双后肢膝关节外、腓骨小头下约5 mm处,直刺7 mm[3],非经非络穴选在足三里穴旁5 mm,直刺5 mm。电针参数[4]:等幅疏密波,频率2/15 Hz,对称双向矩形脉冲波,脉冲宽度分别为0.6、0.4 ms,强度为1,3 mA恒流输出,电流强度以引起大鼠后肢轻度抖动为宜,电针持续20 min。 1.5 下食管括约肌压力测定 使用氨基甲酸乙酯(1.0 g/kg)腹腔注射麻醉。大鼠完全麻醉后,平卧位固定,头部抬高20,30?,切开腹壁和胃壁,将一引流管放置在贲门下方以收集并引流食管测压时滴注的液体;另一引流管置于盆腔,用于阿托品(2 mg/kg)和L-NAME (37.5 mg/kg)腹腔注射。食管测压采用定点牵拉法(stationary pull-through technique,SPT)确定LES位置,固定测压管,应用低顺应性毛细灌注测压系统监测大鼠LESP。 1.6 统计学方法 采用MMS database软件计算各时间段平均LESP, SSPS11.0统计软件进行数据处理。所有数据以—x?s表示;同一组前后比较采用配对t检验,不同组之间采用2组独立样本的t检验,多组之间采用方差分析。 2 结果 2.1 电针健康大鼠足三里对下食管括约肌压力的影响 对照组在测压过程中LESP基本保持稳定,在0,20、20,40、40,60、60,80 min时平均LESP分别为(10.7?2.2)、(10.8?2.0)、(11.0?2.3)和(10.8?2.1) mm Hg,各时间段之间差异无显著性(P,0.94)。电针组在电针前LESP为(10.7?2.1) mm Hg,与对照组相比无显著差异(P,0.99);在电针期间及停止后0,20、21,40 min LESP分别为(17.6?5.2)、(24.8?6.6)和(23.8?5.2) mm Hg,较电针前LESP明显升高(P<0.01),升高率分别为(62.7?27.0)%、(131.0?36.4)%和(122.6?25.9)%,在电针停止后0,20 min LESP达最大值。 2.2 胆碱能M受体阻断对电针调节下食管括约肌压力的影响 (见表1)表1 胆碱能M受体阻断对电针调节LESP的影响(略)注:与阿托品组比较,*P<0.01,**P<0.05(下同) 2.3 一氧化氮合成酶抑制剂对电针调节下食管括约肌压力的影响(见表2)表2 一氧化氮合成酶抑制剂对电针调节LESP的影响(略) 3 讨论 LES的神经支配主要来自于迷走神经,而迷走神经主要由兴奋性胆碱能和抑制性非肾上腺能非胆碱能(non-adrenergic non-cholinergic,NANC)神经元组成,形成突触分布介导LES压力的增加和减低,它们主要的神经递质分别是乙酰胆碱(acetylcholine,ACh)和一氧化氮(nitric oxide,NO)。LESP是由兴奋性和抑制性两种因素的平衡决定的[5]。 胃食管反流病患者的内源性胆碱能神经往往会出现损害,导致LESP下降[6];LES在抗胃食管反流屏障中起关键作用,LESP低下是发生胃食管酸反流、导致反流性食管炎发生的主要原因[7]。有动物实验发现,电针猫足三里可以增加食管体部的运动和LESP增加[8]。本实验结果表明,电针足三里对健康大鼠LES有明显的兴奋作用,主要表现为LESP明显升高,该生物学效应在电针停止之后仍继续存在;胆碱能M受体阻断阿托品可使大鼠LESP下降,而电针可以使其恢复至正常水平。电针足三里可以增加LESP,并且使M受体阻断的LESP恢复正常,这对反流性食管炎的治疗有重要意义。 贲门失弛缓症患者的LES区NANC神经元减少或消失,NOS缺乏,导致LESP增加和松弛障碍[9]。许多实验证明,电针可以降低贲门失弛缓症患者的LESP,缓解吞咽困难[10-11],静脉注射L-NMMA可以使人的食管蠕动增加,LESP升高[12]。本实验发现,大鼠腹腔注射L-NAME后可以增加LESP,但电针没有使LESP下降,反而使LESP进一步升高,LESP总的升高幅度没有受 到影响。 有实验发现,针刺足三里的胃电效应以兴奋为主,刺激迷走神经,其胃电效应与针刺足三 里相同;切断迷走神经后针刺足三里穴,胃电效应消失[13]。谢氏等[14]对健康猫行迷走神经 阻断及迷走神经主干切断后,LES对电针刺激无反应,揭示迷走神经是针刺对食管动力作用的 主要途径。本实验发现,在阻断胆碱能M受体后,电针刺增加LESP的作用被明显减弱,阻断NO 能神经元后,电针刺的效应没有受到影响,这表明迷走神经中的胆碱能神经是电针对食管动力 作用的主要途径。但是,胆碱能M受体阻断仅部分减弱电针的作用,电针仍可使胆碱能神经阻 断大鼠降低的LESP恢复至正常水平。这说明电针兴奋LES的效应除迷走神经中的胆碱能神经 这一主要途径外,还有其它的传出途径。 总之,电针大鼠足三里可以增加食管的LESP,增强抗胃食管反流的屏障,为电针治疗胃食 管反流提供了依据;电针足三里作用的主要传出途径可能是迷走神经中的胆碱能神经纤维, 但也有其它途径,具体机制仍需进一步研究。 【参考文献】 [1] 刘 辉,赵 鸿,易受乡.近十年来针刺足阳明胃经对胃肠功能影响的研究[J].中国 中医药信息杂志,1999,6(12):19,21. 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