正常形态前向运动精子总数对IUI临床周期妊娠率影响

正常形态前向运动精子总数对IUI临床周期妊娠率影响 正常形态前向运动精子总数对IUI临床周期妊娠率的影响 【摘要】 目的 探讨宫腔内人工授精(iui)时， 精子参数对iui临床妊娠结局的影响。方法 回顾性分析本院生殖中心2010年7月,2013年3月380周期iui的临床资料， 统计精子形态、前向运动精子总数及正常形态前向运动精子总数对iui临床妊娠率的影响。结果 380周期精液处理后正常形态精子百分率0.05);380周期精液处理后正常形态前向运动精子总数0.05); 380 cycles of semen after treatment of normal forward movement sperm count 【key words】 male infertility; semen parameters; pregnancy rate; iui 由于环境污染、不良生活习惯的养成以及生存压力增大等多种综合因素的影响， 使不育症成为影响人类健康的重大疾病之一。同时不育症也成为造成家庭不稳定因素的重要原因。不育夫妇在已婚育龄夫妇中所占比例达到15%， 其中男性因素约占50%[1]。部分不育夫妇通过病因治疗或经验性药物治疗可获得成功临床妊娠， 但仍有很多不育夫妇需要借助辅助生殖技术助孕治疗， 宫腔内人工授精术(intauterine insemination， iui)作为一种简单、经济、无创的助孕技术， 在临床中被广泛应用， 但由于受到不育夫妇双方各种因素的影响， iui的妊娠率较低， 如何提高iui的妊娠率， 一直是生殖医学领域关注的热点问题。本研究旨在分析精子形态、前向运动精子总数及正常形态前向运动精子总数对iui临床妊娠率的影响， 为临床选择合适的iui患者提供一定的参考价 值。 1 资料与方法 1. 1 一般资料 回顾性分析2010年7月,2013年3月在广东医学院附属医院生殖医学中心实施夫精人工授精的380周期的iui临床资料， 女方平均年龄(34.50?5.01)岁， 平均不育年限(4.89?2.54)年。均符合iui的适应证， 无禁忌证。 1. 2 方法 1. 2. 1 精液采集 受检者禁欲2,7 d， 在本中心取精室通过手淫的方法取精， 精液射入无菌的一次性取精杯中， 然后立即交予男性学实验室工作人员， 置于室温中， 待其完全液化后进行检测。 1. 2. 2 精液优选处理 采用上游法和梯度离心法优选活性精子。上游法:取10 ml试管一个， 加精液1ml， 上方分层加quinn’s sperm washing medium 2 ml， 倾斜45?， 37?孵育45,90 min后， 取上层液1.5 ml， 加quinn’s sperm washing medium 5 ml， 300 g离心10 min， 去上清液， quinn’s sperm washing medium 重新悬浮精子， 调整恰当浓度后充分混匀取10 μl， 镜检。非连续梯度离心法:取15 ml试管一个， 由底部向上分别分层加80% lower phase gradient 3 ml， 40% lower phase gradient 3 ml， 精液1,2 ml， 500 g离心15,20 min， 去上部液体， 保留底部沉淀， 用3 ml lower phase gradient将沉淀洗涤离心后， 调整适当浓度后充分混匀取10 μl， 镜检。 1. 2. 3 精液参数检测 按照世界卫生组织推荐的精液参数检测方 法[2]进行精液量、精子形态等检测， 采用西班牙sca精子分析仪检测精子浓度(106/ml)、前向运动精子(%)等精液参数。精子形态采用巴氏染色法分析， 取优化处理后精液10 μl滴在载玻片的一端， 使用拉薄技术， 将精液涂在载玻片的表面， 待其自然干燥后， 采用who第五版所推荐的巴氏染色方法进行染色， 油镜下计数200个精子的形态， 求出每份精液样本的正常精子形态百分率。精子包括头、颈、中段、主段和末段。由于通过光学显微镜很难观察到精子末段， 因此可以认为精子是头(和颈)和尾(中段和主段)组成。只有头和尾都正常的精子才认为是正常的， 所有处于临界状态的精子均为异常。 1. 2. 4 宫腔内人工授精术 女方患者术前检查白带常规， 确定无生殖道感染才能实施手术。自然周期从月经周期的第10天b超监测卵泡发育， 血e2、lh， 及尿lh水平判断lh峰， 当优势卵泡直径达到16,20 mm， lh水平上升到大于基础值2倍以上， 可以在24,48 h后行人工授精。促排周期在月经周期的第3,5天用促排卵药， 促排卵开始后的第4,5天b超监测卵泡发育， 当优势卵泡直径达到16,20 mm， 注射hcg5000,10000 u， hcg注射后24,48 h行人工授精。授精方法:患者取膀胱截石位， 生理盐水冲洗外阴、阴道， 用干棉球抹净阴道， 核对患者姓名后， 以不带芯导管缓慢抽吸已经处理好的精子悬液0.3,0.5 ml， 将导管自宫颈口沿宫腔方向缓慢插入， 至宫颈内口上方约1,2 cm处将精子悬液缓慢注入， 将导管退出宫腔。术后取臀高仰卧位0.5,1 h。 常规黄体支持， 术后14,16 d检测β-hcg， 术后5周采用b超确认临床妊娠。 1. 3 统计学方法 应用spss17软件包进行统计学分析， 各组率的比较采用χ2检验， 以p0.05)， 见表2;380周期精液处理后正常形态前向运动精子总数目前已知影响iui妊娠率的因素很多， 以往研究多关注女方的因素， 但对不育原因中占50%的男方因素研究较少， 现在越来越多的学者认为男方因素在实施辅助生殖技术时同样不能忽视。在男方因素中精液参数是重要因素之一。精液参数中精子浓度、精子总数、前向运动精子百分比、前向运动精子总数、精子形态是主要的信息。一项回顾性分析认为， 精液处理前正常形态率、处理后前向活动精子数(ptms)和处理后精子曲线速率(vsl)是预测男性因iui成功率的最有意义指标[4]。随着who第五版的推广， 近年来在男性不育症诊断中， 精子形态学分析越来越受到重视， 根据kruger精子形态学严格标准进行精子形态学评估被认为是评价男性生育力的重要指标之一。lee等[5]研究认为当处理前精子正常形态10×106为好。多数文献也认为ptms>10×106时， 可获得较高的临床妊娠率[6， 7]。blauer等[8]以平均 ptms 为1.93×105的活动精子数目行iui， 获得了15%的临床妊娠率。而wainer等[9]认为， 处理ptms计数<1×106组妊娠率显著低于ptms?2×106组。但本研究发现， ptms<10×106与 ptms?10×106比较， 临床妊娠率差异无统计学意义， 可能是由于本研究ptms<10×106组周期数较少的原因， 也可能与分组不细有关。 一般认为精子形态和前向运动精子总数对iui妊娠率均有影响， who第五版提出了总数优先的原则， 故我们提出了一个全新的概念“正常形态前向运动精子总数”， 分析精液优化处理后正常形态前向运动精子总数对iui临床妊娠率的影响， 结果表明正常形态前向运动精子总数<0.4×106组与其它组比较， 差异有统计学意义， 当正常形态前向运动精子总数?0.4×106时可获得较高的临床妊娠率， 但临床妊娠率不会随着正常形态前向运动精子总数的进一步增多而增高， 反而有下降趋势。可能由于正常形态前向运动精子总数过高说明不育原因主要在女方， 亦或由于精子过多增加了精子无效碰撞和耗能， 使到达输卵管内的有活力的正常形态精子减少， 从而降低了受孕机会。 本研究表明iui精液处理后精子正常形态率及正常形态前向运动精子总数与iui临床妊娠率关系密切， 是预测患者iui结局的较为可靠的指标， 为患者选择相应的助孕方式提供了较为有力地依据，但临床中需结合女方情况方能更好地预测结局， 指导选择相应的助孕方式。 参考文献 [1] zadehmodarrs s， oladi b， saeedi s， et al.intrauterine insemination with husband semen:an evaluation of pregnancy rate and factors affecting outcome.j assist reprod genet， 2009(26):7-l1. [2] 世界卫生组织.世界卫生组织人类精液检查与处理实验室手 册.谷翊群， 陈振文， 译.第5版， 北京:人民卫生出版社. 2011: 11-84. [3] de mouzon j，goossens v，bhattacharya s，et al.assisted reproductive technology in europe， 2007: results generated from eropean registers by eshre. hum reprod， 2012(27): 954-966. [4] shibahara h， obara h， ayustawati， et a1.prediction of pregnancy by intrauterine insemination using casa estimates and strict criteria in patien,with male factor in fertility.int j androl 2004， 27(2):63-68. [5] lee rk， hou jw， ho hy， et al. sperm morphology analysis using strict criteri as a prognostic factor in intrauterine insemination.int jandrol， 2002，25(5):277-280. [6] 张科， 范立青， 刘薇， 等.活动精子总数、精子形态与宫 腔内人工授精妊娠率的关系.中国现代医学杂志， 2011， 21(19): 56-59. [7] 张志恒， 孙玲， 全吴敏， 等.处理后精液参数对夫精人工 授精结局的影响.海南医学， 2012， 22(08):7-9. [8] blauer kl， keyvanfar k， matken r， et al.iui pregnancy rates using <400 000 total motile sperm in presumed fertile couples participating in the microsort sperm separation clinical trial for preconception gender selection.fertil steril， 2001， 76 (3):76. [9] wainer r， albert m， dorion a， et al.influence of the number of motile spermatozoa inseminated and of their morphology on the success of intrauterine inseminationhum reprod， 2004， 19(9):2060-2065.