高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量

高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素D3的含量 高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生 素D2和维生素D3的含量 :墨:oliTraditionalChineseMedicalUniversity2007,voI.10No.2 图3金花茶叶乙醇液二阶导数光谱图 图4金花茶叶氯仿液零阶光谱图 图5金花茶叶氯仿液一阶导数光谱图 ^.^^人^i^!6. VV一 图6金花茶叶氯仿液二阶导数光谱图 3讨论 3.1在可见紫外鉴别中,金花茶叶可供鉴别的特征峰较多, 特别是其氯仿提取液在可见光区和紫外光区特征峰更明显. 在乙醇液零阶光谱图中,在243,276,663121TI波长处有明显 的吸收,其中243nm为最大吸收峰,276为肩峰;叶的氯仿液 零阶光谱图在246,416,458,668nm波长处有明显吸收峰. 其中416啪为最大吸收峰,这些特征均具有一定的鉴别意 义. 3.2在一阶,二阶导数光谱图中,金花茶叶的乙醇液在200 , 32Onto和650,70Ohm;氯仿液在200,3o0啪,400, 500nm和600--700nm中均有鉴别特征.整个光谱曲线均具 有鉴别意义. 3.3金花茶是我国一级保护的珍稀物种,不仅具有较高的 观赏价值,而且具有一定的营养价值和药用价值.本研究可 为金花茶叶药材的鉴定提供依据. 参考文献 [1]中国科学院.中国植物志[M].北京:科学出版社, 1998.49. [2]梁盛业.金花茶[M].北京:中国林业出版社, 1993.123. (编辑陈明伟) 高效液相色谱法同时测定钙镁D片中 维生素D2和维生素D3的含量' 梁晓艳 (广西中医学院附属瑞康医院,广西南宁530011) ]建立反相高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和维生素摘要:[目的 D3的含量.[方法]采用KromasilCl8 反相色谱分离柱,流动相为甲醇-乙腈(90:10),检测波长为265nm,流速为0.8rnl/min, 加入维生素A和维生素E进行干扰试 验.[结果]维生素,03在0.5,lOOmg/L浓度范围内线性关系良好,维生素平均加样 回收率98.9%,108.4%,RSD 收稿日期:2006—09—20 2007年第10卷第2期广西中医学院?59? 2.22%--4.28%;维生素A和维生素E不干扰测定.【结论]本方法简单,易于操作,分 离效果好,结果准确,受干扰因素小,适 宜测定片剂中的维生素D2和维生素D3. 关键词:维生素D2;维生素D3;高效液相色谱法;钙镁D片 中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1008—7486(2007)02—0058—04 脂溶性维生素D是人体必需的营养素,其主要形式是维 生素D3(Ch)lecaldferol,胆骨化醇)和维生素132(~dferol,骨 化醇),分别来源于动物和植物,结构相似,功能相近.维生 素D能够维持血钙水平稳定,调节钙磷代谢,维持骨骼的正 常钙化,肌肉收缩,神经传导和所有细胞的正常功能,还有免 疫调节作用,增强机体对感染的反应;主要用于预防和治疗 骨质疏松症,以及预防癌症,多囊性卵巢综合征,牛皮癣,糖 尿病等疾病[.由于维生素D2和D3的结构相似,色谱行为 相近,对其有效分离和定量具有一定难度,因此同时测定药 品中两种维生素D的报道尚不多见_2q].本文建立了反相 高效液相色谱法同时测定钙镁D片中维生素D2和D3的含 量,结果满意,现报道如下. 1实验材料 1.1仪器Agilem1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公 司),紫外检测器,自动进样器(安捷伦公司);HS20500D超 声波清洗器(BENCHTOP);离心机(上海安亭科学仪器厂). 1.2药品与试剂钙镁D片(市售品);维生素D2,D3对照 品(购自Sigma公司,含量>99.0%);水为超纯水;甲醇,乙 腈(色谱纯). 2实验方法 2.1对照品溶液的制备 混合对照品贮备液分别精密称取维生素D2,D3对照 品各0.1g,置100ml量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,摇 匀,制得浓度为lmg/ml的混合对照品贮备溶液.贮存至 4?条件下. 混合对照品溶液精密吸取混合对照品贮备液5ml,置 于50ml量瓶中,用流动相定容至刻度,制得浓度为0.1mg/ rnJ的混合对照品溶液. 2.2供试品溶液的制备取样品10片,研细,混匀.取1g, 精密称定,置lOml具塞比色管中,加流动相8ml,摇匀,超声 提取20mln,加流动相定容至刻度,摇匀,转移至离心管,置离 心机中以4000r/rnln离心5min.吸取上清液,经0,45tan滤 膜过滤,取续滤液作为供试品溶液. 2.3对照品溶液的纯度校正由于维生素D2和对光不 稳定,因此在配制对照品溶液之前需用紫外分光光度法进行 纯度校正.具体方法参照中国药典l-8J. 2.4色谱条件色谱柱:KromasilC18柱(4.6×150mm, 3/zrn);流动相:甲醇一乙腈(90:10);流速:0.8ml/mln;检测波 长:265nm;柱温:25?;进样量:10. 2.5线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液0.25, 1.0,5.0,10.0,25.Oml,置50ml量瓶中,加流动相稀释至刻 度,摇匀,进样.以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标 准曲线.得回归方程:=32.756C一1.4072,r=0.99996. An:33.599C一1.1979,r=0.99996.结果明维生素D2,j 100mg/L浓度范围内均有良好的线性关系. 在0.5, 检测限按3倍空白噪声计算.维生素D2,D3的检出限 均为0.3ng,若称样1g,最低检出浓度为0.3~g/g.按信噪比 (S/N)为10时,最低定量浓度为1.O~g/g. 2.6系统适用性试验精密吸取供试品,混合对照品溶液 各10,按2.4项色谱条件进样测定,色谱图见图1.结果表 明供试品在混合对照品色谱图相应位置上有相同保留时间 的色谱峰.且被测成分与相邻杂质峰分离良好. 2.7干扰试验在维生素D2,D3的混合对照品溶液中加入 维生素A,a,B,,占四种维生素E和维生素E醋酸酯的对照 品,在上述色谱条件下分离,色谱图见图2.从图2中可以看 出,维生素A,E,D2,D3都得到很好的分离,维生素A,E不干 扰维生素D2,的测定. 2.8精密度试验对同一份供试品溶液,连续进样测定6 次,结果维生素D2,D3峰面积RSD分别为1.05%和1.17%. 2.9重复性试验精密称取同一批供试品6份,按供试品 溶液制备方法制备,依法测定,结果维生素平均含量 0.1013mg/~,RSD为1.64%.维生素D3平均含量< 0.0003mg/片. 2.10稳定性试验对同一供试品溶液,在棕色瓶中和室温 下放置Oh,lh,2h,4h,6h,8h,分别进样测定峰面积,结果 维生素D2峰面积的RSD为2.08%(,z=6),维生素D3峰面 积的RSD为2.26%(,z=6),表明供试品溶液在8h内有良好 的稳定性. 2.11加样回收率试验精密称取已测知含量的样品1g于 10ml具塞刻度管中,分别精密加入维生素D2对照品适量, 分高,中,低三种浓度加标,按"供试品溶液制备方法"项下操 作,进样测定含量,计算加样回收率.每个浓度均平行试验6 次.结果见表1. 表1维生素D2加样回收率试验结果 JournalofGuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity2007,Vol.10No.2 mA【J mAU VWDIA.Wavelength265nm(VITD6213/H/ST3.D)占' 200 150 loo m^U 0 扣 田 0 0246810l2 A混合对照品 VWDIA,Wavelength=265nm(VITD6213/IS-33D) l6min 口 F- .豢壁 & 八山.02468l0l2 B供试品 图1}玎Lc色谱图 16min 图2混合对照品加维生素A,EHPLC图谱 2.12样品测定取3批样品,根据供试品溶液制备方法制 备样品溶液,按2.4项色谱条件进样测定含量,每批平行测 定3次,结果见表2. 3讨论 3.1色谱柱的选择实验中曾采用ZorbaxSBCl8柱(Stun, 4.6mmX250mm)和Waterst~BondapakCl8柱(1Opm,4.6mm ×250ram)反相分离柱,不断改变流动相配比,但维生素D2 如加巧mO 2007年第10卷第2期广西中医学院?61? 和维生素D3分离度均小于1.2,不能达到基线分离.本文采 用KromasilC18柱(m1,4.6mmx150mm)进行分离,维生素 D2和维生素D3分离度均大于2.5,分离良好. 表2样品测定结果(=3,mg/h") 3.2色谱流动相的选择单独采用甲醇,出峰时间较长;单 独采用乙腈,毒性和成本加大.通过改变甲醇和乙腈的比 例,保留时间和分离度均随之改变.本文选用甲醇.乙腈 (90:10),分离度等于2.0,保留时间合适,避免了杂质的干 扰. 3.3本方法能将维生素D2和维生素D3良好分离;方法简 便,易于操作,出峰时间适宜,干扰小,色谱峰重现性好,结果 准确.由于目前市售的药品和保健食品很多没有标明添加 的是维生素D2还是维生素D3,往往给检测工作带来诸多不 便.本方法可以同时测定片剂中的维生素和维生素, 节约了时间成本,提高了工作效率. 参考文献 [1]周建烈,柳启沛.实用维生素矿物质补充剂手册[M]. 北京:中国轻工业出版社,2003.46~48. [2]蒋晔,刘红菊,郝晓花.4种脂溶性维生素的非水反相 HPLC测定[J].中国医药工业杂志,2005,36(2):93, 94. [3]张玫,刘新字.高效液相色谱法测定维多宝泡腾片中 的维生素D3的含量[J].上海医药,1998,19(2):36, 37. [4]张学农,周慧,苗爱东,等.正相高效液相法测定碳酸 钙颗粒剂中微量维生素D3含量[J].新疆医科大学学 报,2002,25(1):39,41. [5]周春兰,金锡然,韩宁.高效液相色谱法测定维生素 D2糖丸的含量[J].黑龙江医药科学,2004,27(1):97. [6]历士旺,赵亚平,张亚锋,等.HPLC法测定钙一D颗粒 剂中维生素D3的含量[J].西北药学杂志,2003,18(1): 3--4. [7]彭清涛,谭生建,崔瑞芳,等.高效液相色谱法测定钙维 康胶囊中维生素D3的含量[J].药物分析杂志,1998,18 (6):395--396. [8]中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典(二 部)[S].北京:化学工业出版社,2000.55. (编辑陈明伟) 高效液相色谱法测定排石?号颗粒剂中绿原酸的含量 农英高.莫海玲,李以军.于灿华 (广西壮族自治区民族医院,广西南宁530001) 摘要:[目的]建立高效液相色谱法测定排石?号颗粒剂中绿原酸的含量.[方法]色 谱柱为ZorbaxC18柱(250mm× 4.6mm,5tan),流动相为乙腈一0.5%磷酸溶液(11:89),检测波长为326nm,流速为 1.0ml/min.[结果]绿原酸进样量在 0.2064,2.064txg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r:0.9997),平均回收率为 100.3%,RSD=0.66%(=6).[结论]本 方法简便,灵敏,准确,重现性好,可用于该制剂的质量控制. 关键词:绿原酸;排石II号颗粒剂;高效液相色谱法 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1008—7486(2007)02—0061—03 我院自制制剂排石?号颗粒剂来源于临床经验方,由广 金钱草,石韦,海金沙,泽泻,赤芍等九味中药组成,对尿路结 石,肾盂肾炎,胆囊炎等有很好的疗效.目前该制剂的质量 尚元含量测定,为了控制该制剂的质量,保证临床用药 效果,本文采用高效液相色谱法对方中君药石韦的主要有效 成分绿原酸进行含量测定,结果满意,现报道如下. 收稿日期:2007—03—20 l仪器与试药 1.1仪器美国Beckman公司高效液相色谱仪(125泵, 166检测器);电子天平(BP_211D,sartorius,德国);德国Elma 13-78224型超声仪. 1.2试药绿原酸对照品(批号:110753.200212,供含量测 定用,由中国药品生物制品检定所提供);排石?号颗粒剂为 广西民族医院研制品;乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯;