【doc】 头孢美唑和头孢西丁对产与不产超广谱β-内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较

【doc】 头孢美唑和头孢西丁对产与不产超广谱β-内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较 头孢美唑和头孢西丁对产与不产超广谱β- 内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较 四川生理科学杂志2005;27(4)l67 ods:Atotalof160patientswithrespiratoryinfectionsOrurinaryinfectionswereenrolledintothismnhicenter,double.blinded,randomized controlledclinicalstudy.80patientsreceiveddomesticceftizoximeastrialgroupand80patientsreceivedimportedceftizoximeascontrol group.Bothgroupsweregivenceftizoxime2gtwicedaily,ivgttfor7to14days.Results:Iecureandeffectiverateswere62.5%and 90%indomesticgroup,56.25%and90%inimportedgroup;thebacterialeradicationratewere87.1%and90.3%;theadverseevents ratewere8.75%and7.50%,respectively.Therewerenosignificantdifferencesbetweenthetwogroups(P>0.05).Conclusions:D0. mesticmadeceftizoximeisaseffectiveandwel1.toleratedasimportedoneforthetreatmentofbacterialinfections. KeywordsCefiizoxime;Bacterialinfection;Randomizedcontrolledclinicalstudy 头孢美唑和头孢西丁对产与不产超广谱p一内酰胺酶菌株体外抗菌 活性比较 郑沁,康梅,过孝静,陈慧莉,严可宁,简军,陈知行,陈文昭,吕晓菊 (四川大学华西医院实验医学科临床微生物室,成都610041) 摘要目的:测定头孢羡唑和头孢西丁对产与不产超广谱B.内酰胺酶(ESBLs)菌株的体外抗茵活性.方法:收集2004年1 月到2004年l2月从华西医院各临床科室分离出的大肠埃希茵和肺炎克雷伯茵520株,采用Kirby.Bauer琼脂扩散法进行体外药敏 试验并用表型确证试验检测ESBk.结果:筛选出产ESBLs茵226株,ESBLs阳性检出率为43.5%,其中大肠埃希茵的ESBLs检出 率为45.8%,肺炎克雷伯茵的ESBLs检出率为39.6%.头孢美唑对我院ESBLs阳性茵椿体外抗茵活性优于头孢西丁.结论:头霉 素类抗生素可作为治疗ESBIz茵株引起的重症感染的可选药物,且对我院分离的产ESBI5大肠杆茵和肺炎克雷伯茵.头孢美唑体 外活性略优于头孢西丁. 关键词头孢美唑;头孢西丁;超广谱B-内酰胺酶;体外抗菌活性 在我国,大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为产超广谱B一内酰胺 酶(ESBI_a)的主要肠杆菌科细菌….ESBLs可水解大多数的青 霉煮类,头孢菌索类和B.内酰胺类,亦可能同时对其它的抗生 索如氟喹诺酮类和氨基糖苷类产生耐药性.ESBb可通过质粒 介导使耐药基因在细菌问扩散,从而造成严重的医院交叉感染 和院外耐药菌的扩散研究新的抗生素对这些菌株的体外抗 茁活性可为临床治疗提供重要的参考信息.头孢西丁(cefox— itin,FOX)系第二代头霉素类B-内酰胺类抗生素,对大多数革兰 阳性菌.革兰阴性菌及厌氧菌均有较强的抗菌作用,对B-内酰 胺酶稳定J.头孢茭唑(eefmetazole,CMZ)是较新的半合成头 霉素类抗生毒,其抗菌谱广,对多种革兰阳性菌.革兰阴性菌及 厌氧菌均有抑菌作用,包括产B一内酰胺酶的菌株J.本研究测 定并对比了头孢美唑和头孢西丁对323株大肠埃希菌和197株 肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性 I材料与方法 1.1试验菌株自2004年1月,2004年12月,从四川大学 华西医院临床标本分离菌中收集大肠埃希菌323株,肺炎克雷 伯菌197株,标本来源包括痰,尿,血.胆汁,脓液,创面分泌物, 引流液,腹水等.对每个患者同一部位中分离的同一种菌.留取 首次分离的菌株,所有菌株由DADE公司全自动细菌鉴定仪鉴 . 1.2体外药敏试验采用Kirby—Bauer琼脂扩散法.抗菌药 物纸片:头孢美唑(CMZ)和头孢西丁(FOX)为北京天坛药物生 物技术开发公司技术产品.药敏结果按照美国国家临床实验 室委员会(NCCLS)1999年推荐的判定标准判读.并用大 肠埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603为质控菌 通讯作者 株. 1.3产ESBI~菌株的检测采用NCCLS1999年推荐的表型确 证试验进行l4J.头孢他啶(CAZ)和头孢他啶/克拉维酸(CAZ— CL)以及头孢噻肟(CTX)和头孢噻肟/克拉维酸(CTX.CL)4 种纸片均为英国OXOID公司产品.按Kirby—Bauer琼脂扩散法 准备细菌平板,在平板上分别贴上4种纸片,35下培养过夜 后判读结果,若任一复合纸片抑菌圈直径与相应单药纸片抑菌 圈赢径相差?5mm,即判定为产ESBLs株,若<5mm则判定 为非产ESBI~株.质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和肺炎 克雷伯菌ATCC700603. 2结果 2.1超广谱B-内酰胺酶(ESBLs)检测520株大肠埃希菌和 肺炎克雷伯菌中,共检出产ESBLs株226株,ESBLs检出率为 43.5%.其中大肠埃希菌的ESBLs检出率为45.8%(148/ 323),肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率为39.6%(97/197). 2.2产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药物的体外 药敏结果头孢美唑对产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的 体外敏感率均高于头孢西丁,与相关报道结果一致…,见表1. 袭I226株产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克霄伯菌对头孢美唑和 头孢西丁的体外药敏结果(%) 抗菌,些堡重堕:塑 药物敏感(%)中介(%)耐药(%) 丝堕丝堕!!:! 敏感(%)中介(%)耐药(%) 头孢美唑74.3%8.8% (CMZ)(i10/148)(13/148) 头孢西丁44.6%19.6% (FOX)(66/148)(29/148) 65% (5/78) 10.3% (8/78) 用嘶 佛 %?%?九M”? J68四JIj生理科学杂志2005;27(4) 2.3不产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗菌药物的 体外药敏结果头孢美唑对不产ESBLs的大肠埃希菌的体外 敏赡率略高于头孢西丁,头孢美唑对不产ESBLs的肺炎克雷伯 菌的体外敏感率低于头孢西丁.见表2. 表2294株不产ESBLs的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢羹唑 和头孢西丁的体外药敏结果(%) 抗菌塑些重型!三!!21丝壅堕坦堕!!!!!! 药物敏感(%)巾介(%)耐药(%)敏感I%中介(%)’}} 2.4头孢美唑和头孢西丁对520株产与不产ESBLs的大肠埃 希菌和肺炎克雷伯菌的体外药敏结果头孢美唑和头孢西丁 对非产ESBLs菌株的抗菌活性均高于产ESBLs菌株,见表3. 表3头孢美唑和头孢西丁对520株产与不产ESBI的大肠埃希 菌和肺炎克雷伯菌的体外药敏结果(%) 抗菌!堕鳖堑一韭堕!堕堡竺 药物敏感(%)巾介(%)耐鲫(%)敏感(%)中介(%)蝌约(% 3讨论 3.1大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌是产质粒介导的超广谱B?内 酰胺酶(EsBk)的代表菌种.ESBLs主要由克雷伯菌属和大肠 埃希菌属等肠杆菌科细菌产生,该酶由质粒介导,从广谱B呐 酰胺酶突变而来,其特点是能被B-内酰胺酶酶抑制剂抑制. ESBLs是由rEM.1,TEM-2,SHV.1型B-内酰胺酶变异衍生而来 的一类B一内酰胺类水解酶,属于分子生物学分类的A类酶, Bush功能分类的2be酶.ESBLs的出现是新一代抗生素(尤其 是三代头孢和单环菌素)选择性压力的结果J.目前,ESBLs 已有5O多种,某些ESBLs能赋予细菌对所有B一内酰胺类抗生 素高水平耐药,但另一些ESBLs仅轻微提高耐药性或对部分药 物选择性提高J.因此,不同地区和医院使用的抗生素种类和 数量不同,则ESBLs的检出率,种类及耐药性电不尽相同.本 次我院大肠埃希菌的ESBLs(+)率为45.8%,肺炎克雷伯菌的 ESBLs(+)为39.6%(97/197),比熊剑文等报道的高(大肠 埃希菌ESBLs检出率26.67%,肺炎克雷伯菌ESBLs检出率36. 96%),跟我院2000-2001年度统计结果比较出高了许多(大 肠埃希菌23.9%,肺炎克雷伯菌26%).这一现象不仅由于近 年来三代头孢菌素在我院临床上使用量大幅度增加,细菌TEM. 1,TEM一2,SHV-1型B一内酰胺酶发生变异,而产生了耐药性的变 化,还与ESBLs的质粒在细菌问的传播有关. 3.2头霉索(~ephamycins)类抗生索的化学结构式与头孢菌素 相似,但在头孢烯母核(7ACA)的7位碳上引入7a一甲氧基, 甲氧基对于许多由青霉索酶和头孢菌素酶所引起的抗生素失 活提供了高度的保护作用,经化学修饰的基础头霉素核附于侧 链,从而增强其对B一内酰胺酶和ESBLs的稳定性?,使头孢美 唑和头孢希丁对上述细菌的抗菌作用优于第二,三代头孢菌 素.从表1见,头孢美唑对ESBLs阳性的大肠埃希菌的敏感率 为74.3%,相对于头孢西丁对ESBLs阳性的大肠埃希菌的敏感 性(44.6%),两者之间有显着性差异(P<0.001),说明头孢美 唑对ESBLs阳性的大肠埃希菌的体外活性明显高于头孢希丁; 对ESBLs阳性的肺炎克雷伯菌,头孢美唑的体外敏感率为67. 9%,头孢西丁的体外敏感率为56.4%,前者略高于后者,但两 者之间无显着性差异(P>0.O1).从表3见,头孢美唑对ESBLs 阳性菌的敏感率(72.1%)明显高于头孢西丁(48.7%),P<0. O5,此结果跟林庆安等”报道的大体一致.但国内也有相关报 道显示头孢西丁和头孢美唑治疗ESBLs阳性菌,两组比较无 显着性差异,两组治疗后的产酶菌清除率电无显着性差异,这可 能跟各地区ESBLs流行的表型和各医院使用抗生索种类频率 不同有关. 3.3根据NCCLS1997年推荐意见,只要确认为产ESBLs株. 无论药敏结果显示耐药还是敏感,均应避免应用头孢菌素类抗 生索治疗,而应选用其他有效的药物.但由于头霉类抗生素特 殊的化学结构对ESBLs的稳定性和我院头孢美唑对ESBLs阳 性菌仍保持较高的敏感率,对于肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌 (均为产生ESBLs的代表菌种)感染,也可根据病情加以选用. 参考文献 1徐焚备,谢秀丽,张小江,等.头孢米诺和其它14种抗菌药物埘产0 不产衄广讲B一内_酰胺酶菌株抗菌活性比较.中华医院感染学杂志, 2004,14(7):727729. 2Ii选锭,应可,刘窗光,等.头孢西丁.-0头孢荚唑随机刈J!f{治疗细菌 感染124例临床详价.巾国临床药理学杂志,1996.12(4):193—199. 3徐共存,辉陈瞰钧.头孢美唑发其他执生索的抗菌活性.中 牛内科杂,1997,36(8):540,542. 4NationalCommitteeforClinical1’aboratoryStandmxts.Performance standardsforantimicmbialsusceptibilitytesting.9thinformationalsupple. meuted.WaynePA:NationalComnfitteeforClinicalLaboratoryStandards, 1999,19:36 5BushK,~acokyGA,MedeirosAA.AfunctionalelassificarionscheIne f0rB-lactamaseanditscolvelatlonwithmoleeulal.struelult~AntimicrobAgents Chemother,l995,39:1211. 6倪语盟,洪秀华.细菌耐药性监测与抗感染治疗.北京:人睢军医出 版社,2002.107—110, 7JacobyGA.HanP.Detectionofextended—spectrumbeta.1actamasesin clinicalisolatesofKlebsiellapneumonlacandEscherichiacoli.JClioMicro. biol,1996,34(4):908—911. 8熊剑文,等.产越广酱p一内酰胺酶情株的监测及耐药性分析.南京 军J学院.2003,25(4):261—263. 9过孝静,J求栅,陈文昭,等.产超广谱B一内酰胺酶细菌的分离率和 耐 药特性.华西医学,2002,17(3):341,342. 10JacobyGA,MedeireosAA.Moreextended2spectrumbeta—laetamases. AntimicmbAgentsChemother,199l,35:1697—1704. 1l料庆安,糊冈祥.柳德灵.头孢美唑对肺炎克雷伯菌和大肠竣希菌的 体外抗曲活性.『I}J幽扰感染化疗杂志,2002,2(4):235—237. 四川生理科学杂志2005;27(4)169 InvitroactivityofcefmetazoleagainstExtended-SpectrumBeta-lactamases producingandnone-producingstrains:Acomparisonwithcefoxitin ZhengQin,KangMei,GuoXiaojing,ChenHuiLi,YahKening,ChenZhixing,JianJun,ChenWenZhao,LvXiaoju (DepartmentofClinicalMicrobiologyWestChinaHospital,SichuanUniversity,Correspondingauthor:MeiKang,Chengdu610041) AbstractObjective:TodetermineinvitroantibioticactivityofCefmetazoleandCefoxitinagainstextended.spectrumbeta—lactamases producingstrains,Method:520strainsofKpn (ESBLs)producingandnon— eumoniaeandE.eoliwel’eisolatedfromJanuary2004toDe, cember2004.PhenotypicconfirmatorytestwasusedtodetectESBLs;Kirby—Baueragardiffusionmethodwasusedfordrugsensitivetest.Re. suits:226ESBkstrainsweredetected,thepositve1.atewas43.5%,amongwhichE.eoliwas45.8%.andK.pneumoniaeWas39.6%re— spectively.Invitroantimiel’obialactivityofCefmetazoleagainstExtended—SpectrumBeta—lactamasesproducingstrainswashigherthanthatof Cefoxitininwestchinallospita1.Conclusions:cephamyeinscanbethealternativesforESBLsproducingstrains.andinvitroantimicrobialac— tivityofCefmetazoleagainstExtended—SpectrumBeta—lactamasesp,’od ucingwashigherthanthatofCefoxitininwestchinahospita1. KeywordsCefmetazoleCefoxitinExtended.SpectrumBeta.1actamasesInvitroantimicrobialactivity 髓榷氆 综述寮告9e9口?口?口当0毒 嵌合抗菌肽的研究 王伯瑶,黄宁,吴琦,冯云 (四川大学华西基础医学与法医学院,成都610041) 嵌合蛋白(Chimericprotein)是2O世纪9O年代发展起来的 ? 种基因工程技术,通过PeR拼接技术,将2个或以上生物活 性蛋白或其功能结构域编码基因偶联起来,以产生新的生物活 性蛋白.比如CD免疫粘附素.CD分子是一种辅助T淋巴 细胞和巨噬细胞的跨膜蛋白,是爱滋病病毒(HIV)的受体,HIV 通过CD复合受体进入和感染T淋巴细胞和巨噬细胞,导致免 疫功能受损.CD跨膜蛋白的细胞外区段可从细胞膜上脱落下 米,进入血循环,这个细胞外区段称为可溶性CD分子,它可以 ‘jHIV外膜糖蛋白特异结合.CD免疫粘附索就足:悔CD分 1的细胞外段的编码基与lgG的轻链和重链基因偶联产生 的,它增强了口J溶性CD分子结合爱滋病病毒的效价,提高了 可溶性CD在血中的半衰期和穿透胎盘的能力.21世纪初叶 国外有报道将人一防御素一2(hBD一2)成熟肽编码基因与无免疫 原性的小鼠骨髓瘤细胞特异抗原(Ig)基因偶联,获得一个新的 DNA疫苗,免疫小鼠,产生极强的针对小鼠骨髓瘤细胞的特异 抗体和CTL反应,并保护小鼠免避小鼠骨髓瘤细胞毒株的致死 攻击.我们对嵌合抗菌肽的研究主要集中在增强我们自己 新近鉴定出的人LAK细胞抗菌多肽HMGN2生物学功能上. I.HMGN2的抗菌作用及其抗菌结构域 我们应用微量电泳凝胶琼脂糖弥散抗菌检测法,制备性酸 性尿素聚丙烯酰胺凝胶洗脱电泳和反向高效液相色谱技术,分 别从人LAK细胞和子宫颈黏液中分离鉴定出一个抗菌多肽,经 N一端氨基酸序列测定,质谱分析,全cDNA克隆和免疫印迹等 实验为HMGN2. HMGN2属于高迁移率非组蛋白(Highmobilitygloupcbro? ItlOsolnalprotein,HMG)家族成员,是脊椎动物和非脊椎动物细 胞核中含量最丰富的非组蛋白家族,早期研究认为HMGN2与 DNA复制和转录活性有关.我们首次发现HMGN2的抗菌活 性,为了证明HMGN2在免疫反应中发挥作用,我们对其亚细胞 定位特别是免疫反应时的定位分布进行了研究,应用免疫荧光 细胞化学染色与共聚焦显微镜观察,ELISA和Weste~’nBlotting 等多种实验方法证明人单个核细胞经IL一2刺激成为LAK细胞 时,部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.构建带 六组氨酸臂标签的HMGN2重组真核细胞表达质粒pcDNA3.1一 myc—his—HMGN2,转染人宫颈上皮Hela细胞株,用抗六组氨酸臂 的单克隆抗体经免疫细胞化学染色与共聚焦显微镜观察显示, 新合成的带六组氨酸臂标签的HMGN2除导向于(targeting)细 胞核外,还分布于细胞浆中,ELISA和免疫印迹显示亦分泌到细 胞外.人子宫颈组织标本免疫组织化学染色显示HMGN2主要 分布于上皮组织表面和宫颈黏液中,免疫印迹显示感染性子富 颈黏液HMNG2的表达量比正常者高. 我们还对HMGN2的二维结构与抗菌功能的关系进行了研 究.从一级结构看HMGN2氨基酸序列中无半胱氨酸,不可能 形成一片层,因此应用JANIN和Kyte—Doolittle分析法分析了 HMGN2的亲疏水性,应用Agros和VonHeijne软件分析法分析 了HMGN2的一螺旋结构,结果显示位于第17-42位氨基酸残基 范围有一个一跨膜螺旋结构域,具双亲性.于是我们合成了 HMGN2分子的一跨膜螺旋结构域,N一末端和C一末端肽片段进行 抗菌活性检测,抗菌检测显示仅仅一螺旋结构肽片段具抗菌活 性. 2.HMGN2一跨膜螺旋结构域嵌合抗菌肽的研究 为了进一步证明HMGN2一跨膜螺旋结构域的抗菌作用和